микрZanyatie_1_2_2

ЗАНЯТИЕ 1.2.2

Санитарно-микробиологическое исследование объектов внешней среды (почвы, воды, воздуха)

Цель занятия:

изучить микрофлору объектов окружающей среды (воды, почвы, воздуха) и методы их санитарно-микробиологической оценки.

Студент должен знать:

1.Природные микробиоценозы. Экологические связи в микробиоценозах.

2.Санитарно-микробиологические исследования объектов внешней среды:

воздуха,

воды,

почвы,

пищевых продуктов.

3.Санитарно-микробиологические исследования рук, оборудования и спецодежды персонала.

Студент должен уметь:

проводить оценку санитарно–бактериологического состояния воздуха, воды, почвы и смывов с рук и предметов.

Студент должен владеть:

методами микробиологических исследований с использованием медикотехнической аппаратуры;

методами противоэпидемических и др. мероприятий, направленных на обеспечение безопасности жизни и здоровья людей.

1

Работа № 1. Санитарно-бактериологическая оценка микрофлоры воздуха Цель: изучить методы оценки санитарно-бактериологического состояния воздуха.

Самостоятельная работа:

А) по готовым посевам сделать расчет ОМЧ по формуле Омелянского. Оценить чистоту воздуха по справочной таблице (см. теоретическую справку).

Посев воздуха методом седиментации (по Коху) на МПА для определения ОМЧ.

Результат: ________________________________________

__________________________________________________

__________________________________________________

__________________________________________________

Б) определить наличие СПМ (гемолитических стрептококков) на кровяном агаре.

Посев воздуха аспирационным методом (по Кротову) на кровяной агар для определения СПМ (см. теоретическую справку). Условие: V= 1000 дм3.

Результат: ________________________________________

__________________________________________________

__________________________________________________

__________________________________________________

Заполнить таблицу:

2

Работа № 2. Санитарно-бактериологическая оценка микрофлоры воды Цель: изучить методы оценки санитарно-бактериологического состояния воды.

Самостоятельная работа: оценить санитарно-бактериологическое состояние питьевой воды по результатам посевов. Определить ОМЧ, коли-титр, индекс БГКП.

Оценить чистоту воды (см. теоретическую справку).

Посев воды глубинным методом на МПА для определения ОМЧ.

Результат: ________________________________________

__________________________________________________

__________________________________________________

__________________________________________________

Посев воды методом мембранных фильтров на среду Эндо для определения

общего кличества колиформных бактерий (БГКП, от лат. Escherihia coli - кишечная па-

лочка) в 100 мл воды (см. теоретическую справку).

Результат: ________________________________________

__________________________________________________

__________________________________________________

__________________________________________________

Заполнить таблицу:

Вывод:

3

Работа № 3. Санитарно-бактериологическая оценка микрофлоры почвы Цель: изучить методы оценки санитарно-бактериологического состояния микрофлоры почвы.

Самостоятельная работа: провести оценку санитарно-бактериологического состояния почвы по результатам посевов. Результаты внести в таблицу. Сделать выводы (см. теоретическую справку).

(Гр+ споровые палочки)

Вывод: _______________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

4

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Работа № 4. Санитарно-бактериологическая оценка чистоты рук персонала Цель: изучить методы санитарно-бактериологического контроля в ЛПУ. Самостоятельная работа: учесть результат готового посева смывов с рук на среде Кесслера.

Посев смыва с рук персонала на среде Кесслера

Результат: _____________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Вывод: ______________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Подпись преподавателя_________________________________________________________

Самостоятельная работа во внеурочное время

Как правильно провести санитарно-бактериологические исследования объектов окружа-

ющей среды_____________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Перечислите санитарно-показательные микроорганизмы

А) воздуха____________________________________________________________________

Б) воды______________________________________________________________________

В) почвы _____________________________________________________________________

Требования, предъявляемые к СПМ______________________________________________

5

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Методы качественного и количественного изучения микрофлоры молока______________

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Методы качественного и количественного изучения микрофлоры мяса, колбасных изде-

лий и мясных продуктов ____________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Методы качественного и количественного изучения микрофлоры консервированных про-

дуктов ___________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________

_________________________________________________________________

Подпись преподавателя_________________________________________________________

6

Теоретическая справка

В природе микроорганизмы заселяют практически любую среду (почва, вода, воздух) и распространены гораздо шире, чем другие живые существа. Благодаря разнообразию механизмов утилизации источников питания и энергии, а также выраженной адаптации к внешним воздействиям, микроорганизмы могут обитать там, где другие формы жизни не выживают. Естественные среды обитания большей части организмов - вода,

почва и воздух. Число микроорганизмов, обитающих на растениях и в организмах животных, значительно меньше. Широкое распространение микроорганизмов связано с лёгкостью их распространения по воздуху и воде; в частности, поверхность и дно пресноводных и солёных водоёмов, а также несколько сантиметров верхнего слоя почвы изобилуют микроорганизмами, разрушающими органические вещества. Меньшее количество микроорганизмов колонизирует поверхность и некоторые внутренние полости животных (например, ЖКТ, верхние отделы дыхательных путей) и растений. В зонах обитания микроорганизмы образуют биоценозы - сложные ассоциации со специфическими и часто необычными взаимоотношениями. Каждое микробное сообщество в конкретном биоценозе образуют специфичные аутохтонные микроорганизмы [от греч. autos, свой, + chthon, страна, местность], то есть микробы, присущие конкретной области. В состав этих сообществ могут внедряться аллохтонные микробы [от греч. alios, чужой, + chthon, страна; буквально - чужестранец], (например, паразитические), обычно в них не встречающиеся. В природных биоценозах (почва, вода, воздух) выживают и размножаются лишь те микроорганизмы, которым благоприятствует окружающая среда; их рост прекращается, как только меняются условия окружающей среды. В природе большую часть бактерий поедают хищные простейшие, но часть клеток каждого вида выживает; при наступлении благоприятных условий они дают начало новым клонам микроорганизмов

Санитарно-бактериологическая оценка объектов окружающей среды Принципы проведения санитарно-микробиологических исследований

1.Правильный забор проб осуществляется:

а) с соблюдением стерильности; б) правил транспортировки, позволяющих избежать искажения результатов; в) быстрое проведение исследований или сохранение материала до анализа в холодильнике (не более 6-8 часов).

2.Серийность проведения анализов. Для получения адекватных результатов проводят забор серии проб из разных участков объекта. В лаборатории об-

разцы смешивают, затем точно отмеряют необходимое количество материала (среднее по отношению к материалу в целом).

3.Повторность отбора проб, позволяющую получить более достоверную информацию по загрязнению объекта.

4. Применение только стандартных унифицированных методов исследования для получения сравнимых результатов.

5.Использование комплекса тестов.

6.Проведение оценки объектов по совокупности полученных результатов с учетом других показателей - органолептических, химических, физических.

Санитарное состояние объектов внешней среды определяют по двум основным показателям:

общее микробное число – общее количество микроорганизмов в единице объема или массы исследуемой среды;

санитарно-показательные микроорганизмы – косвенный показатель возможного при-

сутствия патогенных микроорганизмов, которые попадают во внешнюю среду из организмов человека, животных и птиц. Для разных объектов внешней среды выбраны определенные виды микроорганизмов.

7

ОМЧ расценивается как показатель интенсивности загрязнения окружающей среды органическими веществами.

Санитарно-показательными называют микроорганизмы (СПМ), по которым можно косвенно судить о возможном присутствии патогенов в окружающей среде.

Содержание СПМ определяют: 1) прямым подсчетом с помощью специальных камер или электронным счетчиков, предварительно гомогенизируя пробу и внося краситель (эритрозин). Методика позволяет отличить живые бактерии от погибших;

2) посевом на питательные среды.

СПМ должны удовлетворять следующим характеристикам: а) постоянно обитать в естественных полостях человека и животных и выделяться в окружающую среду; б) не должны размножаться вне организма, исключая пищевые продукты; в) длительность их выживания в окружающей среде должна быть не меньше, и даже несколько больше, чем у патогенов; г) устойчивость СПМ в окружающей среде должна быть аналогичной или превышать таковую у патогенных микроорганизмов; д) у СПМ не должно быть в окружающей среде «двойников»; е) микроб не должен изменяться в окружающей среде; ж) методы индикации и идентификации СПМ должны быть простыми.

к работе № 1

Микрофлора воздуха Санитарно-микробиологическое состояние воздуха закрытых помещений оцени-

вают по микробному числу - количеству особей, обнаруживаемых в 1 м3 воздуха, наличию санитарно-показательных бактерий - представителей микрофлоры дыхательных путей - гемолитических стрептококков, золотистого стафилококка.

Нормативы: чистый воздух зимой: ОМЧ не более 4500, гемолитических стрептококков - до 35;

грязный воздух зимой: ОМЧ более 7000, гемолитических стрептококков – до 124.

Допустимые уровни микробной обсемененности воздуха некоторых помещений стационара

Седиментационный метод (по Коху) - оседание микробов под действием силы тяжести - является простым способом изучения микрофлоры воздуха.

Методика. Чашки Петри со средой МПА оставляют открытыми на определенное время (5-10 минут на общую обсемененность и не менее 40 минут на кокковую микрофлору), затем их закрывают, надписывают и выдерживают в термостате 24 часа и 24 часа при комнатной температуре. Количество выросших колоний соответствует степени загрязненности воздуха: по приблизительному подсчету на площадь 100 см2 в течение 5 минут оседает столько микробов, сколько их содержится в 10 л воздуха.

Аспирационный метод (метод Кротова) - более точный количественный метод определения микробного числа воздуха.

Методика. Посев воздуха осуществляется с помощью прибора.

Аппарат Кротова устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью просасывается через узкую щель плексигласовой пластины, закрывающей чашку Петри с питательным агаром. При этом частицы аэрозоля с содержащимися на них микроорганизмами равномерно фиксируются на всей поверхности среды благодаря постоянному вращению чашки под входной щелью.

По истечении заданного времени экспозиции выключают мотор, чашку Петри с посевом воздуха снимают, закрывают и ставят в термостат.

После инкубации посева в термостате проводят расчет микробного числа по форму-

ле:

Х = а х 1000 V

х– количество микробов в м3 воздуха;

а- количество выросших на чашке колоний;

V - объем пропущенного через прибор воздуха, дм3 ; 1000 - искомый объем воздуха, дм3 .

9

Оценка санитарно-бактериологического состояния воздуха по общему микробному числу (ОМЧ) на МПА методом Коха проводится по формуле Омелянского:

Х= а х 100 х 5 х 1000

В х 10 х Т

х – количество микробов в м3 воздуха; а – количество колоний в чашке; Т – время экспозиции, мин;

В – площадь чашки Петри в см2(78.5 см2); 100 – площадь (см2), на которую происходило оседание микробов; 1000 – искомый объем воздуха в литрах; 5 – время по расчету Омелянского, мин;

10 – объем воздуха (л), из которого происходило оседание микробов.

В зависимости от поставленной задвчи посев воздуха проводят производят посев в чашки Петри с МПА, желточно-солевым агаром (вявление золотистого стафилококка) и кровяным агаром (выявление золотистого стафилококка и гемолитических стрептококков).

Результат исследования выражают в количестве колоний стрептококков и стафилококков на 1 м3 воздуха.

к работе № 2

Микрофлора воды Санитарно-микробиологическое состояние воды оценивается :

1)общему микробному числу (ОМЧ) - количеству мезофильных хемоорганотрофных бактерий в 1 мл воды;

2)общее кличество колиформных бактерий (БГКП, от лат. Escherihia coli - кишеч-

ная палочка) в 100 мл воды.

Кроме того, в воде определяют наличие энтерококков, сальмонелл, энтеровирусов, колифагов, спор сульфитредуцирующих клостридий и т.п.

Нормативы безопасности питьевой воды в эпидемическом отношении по микробиологическим и паразитологическим показателям (по методическим указаниям «Са- нитарно-микробиологический анализ питьевой воды»

МУК 4.2.1018-01)