- •Кафедра биохимии
- •Лекция № 1 Тема: Введение в биохимию. Ферменты: строение, свойства, локализация, номенклатура и классификация.
- •Сравнение каталитического действия ферментов и неорганических катализаторов
- •Строение ферментов
- •1. Оксидоредуктазы
- •2. Трансферазы
- •4. Лиазы
- •5. Изомеразы
- •6. Лигазы (синтетазы)
- •Кафедра биохимии
- •Лекция № 2 Тема: Медицинская энзимология
- •2 Курс.
- •I. Энзимопатология
- •1. Наследственных энзимопатий
- •2. Приобретенные энзимопатии
- •II Энзимодиагностика
- •2) Определение активности ферментов и их констант (Km, t, pH).
- •3) Определение концентрации органических веществ с помощью ферментов.
- •III Энзимотерапия
- •Кафедра биохимии
- •Лекция № 3
- •Тема: Регуляция активности ферментов в клетке.
- •Общие представления о гормонах и
- •Их роли в регуляции активности ферментов.
- •2 Курс.
- •1). Аллостерическая регуляция каталитической активности ферментов
- •III. Механизмы регуляции количества ферментов
- •Клеточная сигнализация
- •Рецепторы
- •Участие рецепторов в трансмембранной передаче сигнала
- •Регуляторные белки
- •Вторичные посредники (мессенджеры)
- •Ферменты
- •Трансмембранная передача информации с участием аденилатциклазной системы
- •Аденилатциклазная система активируется:
- •Инозитолтрифосфатная система активируется:
- •Трансмембранная передача информации с участием гуанилатциклазной системы
- •Трансмембранная передача информации с участием цитоплазматических и ядерных рецепторов
Регуляторные белки
G-белки - универсальные посредники при передаче сигналов от рецепторов к ферментам клеточных мембран, катализирующих образование вторичных посредников гормонального сигнала. В настоящее время известно более 50 G-белков:
-
Gs-белок активирует аденилатциклазу. Масса 80000-90000Да.
-
Gi-белок ингибирует аденилатциклазу. Масса 80000-90000Да. Через рецептор, активируется соматостатином.
-
Gq-белок активирует фосфолипазу С.
-
G-белки влияют на активность фосфодиэстеразы, фосфолипазы А2, некоторые типы Са2+- и K+-каналов.
-
G-белки также обеспечивают передачу сигнала в сенсорных клетках (фоторецепторных, обонятельных и вкусовых): Свет → родопсин → Gt → ФДЭцГМФ → (цГМФ→ГМФ)
G-белки олигомеры, состоят из 3 субъединиц α, β, γ.
β-субъединицы (35000 Да) у Gs- и Gi-белков одинаковы.
α- субъединицы (41000 Да у Gi, 45000 Да у Gs) кодируются разными генами и обеспечивают специфический ответ (“+” или “-”).
1). Гормон (Г), взаимодействуя с рецептором (R), изменяет его конформацию. 2). Гормон-рецепторный комплекс, взаимодействуя с G-белком, уменьшает у α-субъединицы (α) сродство к ГДФ и увеличивает сродство к ГТФ. 3). Присоединение ГТФ к α-субъединице (в присутствии Mg2+) вызывает в G-белке изменение конформации и диссоциацию его на субъединицы: α-субъединицу (α-ГТФ) и димер βγ. α-ГТФ имеет высокое сродство к аденилатциклазе (Ац), его присоединение приводит к активации последней. 4). α-субъединица катализирует распад ГТФ до ГДФ + Фн. α-ГДФ имеет низкое сродство к Ац и высокое к димеру βγ. Отделение α-ГДФ от Ац инактивирует последнюю.
|
Вторичные посредники (мессенджеры)
Мессенджеры – низкомолекулярные вещества, переносящие сигналы гормонов внутри клетки. Они обладают высокой скоростью перемещения, расщепления или удаления.
Нарушения обмена мессенджеров приводят к тяжелым последствиям. Например, форболовые эфиры, которые являются аналогами ДАГ, но в отличие от которого в организме не расщепляются, способствуют развитию злокачественных опухолей.
цАМФ открыта Сазерлендом в 50 годах прошлого века. За это открытие он получил Нобелевскую премию. цАМФ участвует в мобилизации энергетических запасов (распад углеводов в печени или триглицеридов в жировых клетках), в задержке воды почками, в нормализации кальциевого обмена, в увеличении силы и частоты сердечных сокращений, в образовании стероидных гормонов, в расслаблении гладких мышц и так далее.
цГМФ активирует ПК G, ФДЭ, Са2+-АТФазы, закрывает Са2+-каналы и снижает уровень Са2+ в цитоплазме.
Ферменты
Аденилатциклаза (АЦ)
Гликопротеин с массой от 120 до 150 кДа, имеет 8 изоформ, ключевой фермент аденилатциклазной системы, с Mg2+ катализирует образование вторичного посредника цАМФ из АТФ.
АЦ содержит 2 –SH группы, одна для взаимодействия с G-белком, другая для катализа. АЦ содержит несколько аллостерических центров: для Mg2+, Mn2+, Ca2+, аденозина и форсколина.
Есть во всех клетках, располагается на внутренней стороне клеточной мембраны. Активность АЦ контролируется: 1) внеклеточными регуляторами - гормонами, эйкозаноидами, биогенными аминами через G-белки; 2) внутриклеточным регулятором Са2+ (4 Са2+-зависимые изоформы АЦ активируются Са2+).
Протеинкиназа А (ПК А)
ПК А есть во всех клетках, катализируют реакцию фосфорилирования ОН- групп серина и треонина регуляторных белков и ферментов, участвует в аденилатциклазной системе, стимулируется цАМФ. ПК А состоит из 4 субъединиц: 2 регуляторных R (масса 38000 Да) и 2 каталитических С (масса 49000 Да). Регуляторные субъединицы имеют по 2 участка связывания цАМФ. Тетрамер не обладает каталитической активностью. Присоединение 4 цАМФ к 2 субъединицам R приводит к изменению их конформации и диссоциации тетрамера. При этом высвобождаются 2 активные каталитические субъединицы С, которые катализируют реакцию фосфорилирования регуляторных белков и ферментов, что изменяет их активность.
Протеинкиназа С (ПК С)
ПК С участвует в инозитолтрифосфатной системе, стимулируется Са2+, ДАГ и фосфатидилсерином. Имеет регуляторный и каталитический домен. ПК С катализирует реакцию фосфорилирования белков-ферментов.
Протеинкиназа G (ПК G) есть только в легких, мозжечке, гладких мышцах и тромбоцитах, участвует в гуанилатциклазной системе. ПК G содержит 2 субъединицы, стимулируется цГМФ, катализирует реакцию фосфорилирования белков-ферментов.
Фосфолипаза С (ФЛ С)
Гидролизует фосфоэфирную связь в фосфатидилинозитолах с образованием ДАГ и ИФ3, имеет 10 изоформ. ФЛ С регулируется через G-белки и активируется Са2+.
Фосфодиэстеразы (ФДЭ)
ФДЭ превращает цАМФ и цГМФ в АМФ и ГМФ, инактивируя аденилатциклазную и гуанилатциклазную систему. ФДЭ активируется Са2+, 4Са2+-кальмодулином, цГМФ.