2. Указания к занятию:

   1. Внимательно изучите инструкцию.

   2. Осмыслите ход выполнения лабораторной работы.

   3. Соблюдайте меры предосторожности в работе с реактивами, приборами.

   4. Используйте резиновую грушу с переходником. Работайте в перчатках!

   5. Соблюдайте дезинфекционный режим в работе!

Практическая часть.

1. Лабораторная работа. Определение концентрации α-холестерина (ЛПВП) в сыворотке и плазме крови человека.

ПРИНЦИП: Хиломикроны, ЛПОНП и ЛПНП осаждаются при добавлении к исследуемому образцу фосфорно-вольфрамовой кислоты в присутствии ионов магния. После центрифугирования в супернатанте остаются только ЛПВП. Концентрация холестерина ЛПВП определяется энзиматическим колориметрическим методом.

Оборудование и реактивы: штатив с пробирками (центрифужные и биологические), пипетки градуированные (1 мл; 0,1 мл); набор реактивов «Абрис+», химические стаканы, термостат; центрифуга; спектрофотометр; дезинфицирующий раствор 0,5% раствор Полидеза.

Проведение анализа.

1. Процедура осаждения.

Внести в центрифужную пробирку	Опытная проба, мл	Калибровочная проба, мл	Контрольная проба, мл
Осаждающий раствор Сыворотка крови Калибратор Вода	0,5 0,25 - -	0,5 - 0,25 -	0,5 - - 0,25

Смешать и инкубировать 10 минут при температуре 18-25C. По окончании инкубации пробы центрифугировать в течение 10 мин. при 4.000 об/мин. или 1-2 мин. при 10.000 об/мин. Ни в коем случае не допускать попадания осадка в реагент для определения концентрации холестерина!

2. Определение концентрации холестерина лпвп.

Внести в пробирку	Опытная проба, мл	Калибровочная проба, мл	Контрольная проба, мл
Монореагент Супернатант образца (опытной пробы) Супернатант калибратора Супернатант контрольной пробы	1,0 0,1 - -	1,0 - 0,1 -	1,0 - - 0,1

Смешать и инкубировать 10 мин. при температуре 37C или 15 мин. при температуре 18-25C. По окончании инкубации измерить оптическую плотность пробы (Е_пр.) и калибратора (Е_кал.) против контрольной пробы при длине волны 500 нм, кювета – 10 мм. Окраска стабильна не менее 2 часов после окончания инкубации.

Расчёт:

С = 2,29  (Е_пр. / Е_кал.), ммоль/л.

Референтные пределы	Мужчина	Женщина
Нормальные показатели, ммоль/л Группа риска, ммоль/л Патология ммоль/л	более 1,42 0,9-1,42 менее 0,9	более 1,68 1,16-1,68 менее 1,16