И Н С Т Р У К Ц И Я

по выполнению практической работы № 53 по теме

«Обмен белков. Определение содержания мочевой кислоты в сыворотке крови и моче».

Цели занятия:

1. Закрепить и углубить знания по теме «Обмен нуклеопротеидов».

2. Закрепить умения и навыки в работе с набором реагентов.

3. Провести биохимическое исследование – определение количества мочевой кислоты в сыворотке крови и моче.

Исходный уровень знаний и умений.

Учащийся должен знать:

1. Основные этапы обмена белков, их биологическую роль.

2. Патологические состояния обмена белков.

3. Остаточный азот крови и его компоненты.

4. Патологию обмена нуклеопротеидов.

5. Роль лабораторной диагностики в исследовании белкового обмена пациента.

6. Технику приготовления растворов и реактивов.

7. Технику дозирования, пипетирования, инкубации проб.

8. Технику работы на спектрофотометре.

9. Меры предосторожности в работе с реагентами, приборами, биологическим материалом.

10. Иметь понятие о контроле качества лабораторных исследований.

Учащийся должен уметь:

1. Работать с химической посудой, пипетками, дозатором, набором реактивов и др.

2. Работать на спектрофотометре.

3. Приготовить необходимые пробы для биохимического исследования.

4. Провести биохимическое исследование по предложенной методике.

5. Дать начальную интерпретацию полученному результату.

6. Уметь решать ситуационные задачи.

Структура занятия.

1. Теоретическая часть:

1. Повторение теоретического материала по темам «Химия нуклеиновых кислот» и «Обмен белков».

2. Вводное слово преподавателя.

Мочевая кислота является главным продуктом обмена пуриновых оснований, входящих в состав сложных белков нуклеопротеидов, и является 2-6-

8-триоксипурином.

NH₂ N OH N OH N OH N

N - NH₃ N N OH

HO HO

N N-H N N-H N N-H N N-H

аденин гипоксантин ксантин мочевая кислота

OH N OH N OH N

N - NH₃ N N OH

H₂N HO HO

N N-H N N-H N N-H

гуанин ксантин мочевая кислота

Производные пуринов – аденин и гуанин после дезаминирования образуют мочевую кислоту, которая выводится из организма почками.

Качественной реакцией на мочевую кислоту служит мурексидная проба, основанная на образовании мурексида – аммонийной соли пурпуровой кислоты, окрашенной в пурпурно-красный цвет.

Количественное определение мочевой кислоты в крови и моче связано со значительными методическими трудностями.

В клинико-диагностических лабораториях для определения мочевой кислоты чаще пользуются её способностью восстанавливать фосфорновольфрамовый реактив Фолина с образованием продуктов, окрашенных в синий цвет. Это исследование проводят по методу Мюллера-Зейферта. Используются также калориметрические методы без депротеинизации (с применением наборов «Ольвекс диагностикум» и «Абрис+»).

Перед анализом больной 3 дня не должен принимать пищу, содержащие пуриновые основания и жиры. Также противопоказано применение лекарств, производных пурина – кофеина, теобромина, теофиллина; салицилатов, витамина C, антидиабетических сульфаниламидных препаратов.

2. Указания к занятию. Методические рекомендации:

   1. Внимательно изучите инструкцию.

   2. Приготовьте все необходимые реактивы и оборудование для проведения анализа.

   3. Осмыслите ход выполнения лабораторной работы.

   4. Соблюдайте меры предосторожности в работе с реактивами, биологическим материалом; на спектрофотометре.

   5. При работе с градуированными пипетками используйте резиновую грушу с переходником.

   6. Соблюдайте дезинфекционный режим в работе!

Практическая часть.

1. Лабораторная работа № 1. Определение содержания мочевой кислоты в сыворотке крови калориметрическим методом без депротеинизации.

ПРИНЦИП: В результате восстановления фенантролина мочевой кислоты образуется окрашенный комплекс, имеющий максимум поглощения при длине волны 500 нм.

Оборудование и реактивы: штатив с пробирками, штатив с пипетками, пипетки градуированные (1 мл; 2 мл), микропипетки (0,1 мл; 0,2 мл), химические стаканы, спектрофотометр; набор реактивов «Абрис+», дезин­фицирую-щий раствор – 0,5% раствор Полидеза.

Материал для исследования: сыворотка крови.