Проведение анализа.

Поместить в пробирку	Опытная проба, мл	Калибровочная проба, мл	Холостая проба, мл
Глициновый буфер Фенантролиновый реагент Сыворотка крови Дистиллированная вода Калибратор	1,8 0,2 0,05 - -	1,8 0,2 - - 0,05	1,8 0,2 - 0,05 -

Смешать и инкубировать 10 минут при температуре 18-25C. По окончании инкубации измерить оптическую плотность опытной пробы (Е_пр.) и калибратора (Е_кал.) против холостой пробы при длине волны 500 (490-520) нм, кювета – 10 мм. Окраска стабильна в течение 30 мин. после окончания инкубации.

Расчёт:

, мкмоль/л

Референтные пределы: Сыворотка (плазма): мужчина – 262-452 мкмоль/л, женщина – 137-393 мкмоль/л.

Примечание: Содержание мочевой кислоты с фосфорновольфрамовым реактивом по методу Мюллера-Зейферта (сыворотка крови): мужчина – 0,27-0,48 ммоль/л, женщина – 0,18-0,38 ммоль/л.

2. Лабораторная работа № 2. Определение содержания мочевой кислоты в моче калориметрическим методом без депротеинизации.

ПРИНЦИП: см. лабораторную работу № 1.

Оборудование и реактивы: см. лабораторную работу № 1.

Материал для исследования: моча суточная.

Перед анализом образец развести физиологическим раствором в соотношении 1:9.

Проведение анализа.

Поместить в пробирку	Опытная проба, мл	Калибровочная проба, мл	Холостая проба, мл
Глициновый буфер Фенантролиновый реагент Моча Дистиллированная вода Калибратор	1,8 0,2 0,05 - -	1,8 0,2 - - 0,05	1,8 0,2 - 0,05 -

Смешать и инкубировать 10 минут при температуре 18-25C. По окончании инкубации измерить оптическую плотность опытной пробы (Е_пр.) и калибратора (Е_кал.) против холостой пробы при длине волны 500 нм, кювета – 10 мм.

Расчёт:

, ммоль/л

Референтные пределы: моча: 1,48-4,43 ммоль/сут.

Примечание: Содержание мочевой кислоты с фосфорновольфрамовым реактивом по методу Мюллера-Зейферта (суточная моча): 1,6-3,5 ммоль/сут.

4. Закрепление знаний, умений и навыков.

4.1. Выполнение лабораторной работы.

4.2. Учёт результатов.

5. Контроль конечного уровня знаний, умений.

5.1. Оформление работы. Начальная интерпретация результатов.

5.2. Запись КДЗ.

Клинико-диагностическое значение.

Определение концентрации мочевой кислоты имеет особое значение для диагностики начальных стадий поражения почек и подагры.

Считается, что у больных с поражением клубочков почки (острый и хронический нефрит, первично и вторично сморщенная почка) в первую очередь страдает выделение мочевой кислоты и индикана, вследствие чего у них наблюдается гиперурикемия, очаговые нефриты и нефрозы не вызывают нарушений выделения мочевой кислоты.

Гиперурикемия может быть и непочечного происхождения. Уже указывалось, что резкое увеличение концентрации мочевой кислоты отмечается у больных с подагрой (первичной гиперурикемией) – заболеванием, связанным с нарушением обмена нуклеопротеидов. При этом заболевании наблюдается отложение солей мочевой кислоты в суставах и в различных тканях тела. Уменьшение экскреции мочевой кислоты способствует её большему накоплению в плазме крови.

Много мочевой кислоты обнаруживается в крови и моче при патологических состояниях, протекающих с усиленным распадом нуклеопротеидов. Причинами такой вторичной гиперурикемии могут быть:

• некоторые гематологические заболевания – миелоидная метаплазия, гемоглобинопатия (талассемия), полицитемия, эритремия, пернициозная анемия, гемолитическая желтуха, злокачественная анемия в стадии ремиссии;

• злокачественные заболевания – лейкозы, множественная миелома, лимфома, лейкемия после облучения рентгеновскими лучами, лейкопения;

• сердечно-сосудистые заболевания – артериальная гипертония, инфаркт миокарда, сердечная недостаточность, печёночная недостаточность, диабет, голодание.

Вторичная гиперурикемия встречается у больных:

♦ с эндокринными и обменными заболеваниями – гипо- и гиперпаратиреоидизмом, микседемой, ожирением, диабетическим кетоацидозом, голоданием, алкоголизмом, III типом гиперлипопротеидемии, у больных с почечными заболеваниями, уремией, предэклапсией;

♦ с некоторыми другими патологическими состояниями – саркоидозом, псориазом, хондрокальцинозом, усиленным потреблением жирной пищи, аллергией, гипертрофией предстательной железы, артритом, ацидозом, пневмонией в стадии ресорбции, отравлением свинцом и угарным газом.

Интересно, что у 22-27% нелеченных больных артериальной гипертонией, не сопровождающейся поражением почек, обнаруживается гиперурикемия, а при вовлечении в процесс почек гиперурикемию удаётся выявить у 47-67% больных.

Гиперурикемия при голодании обусловливается, с одной стороны, высокой продукцией мочевой кислоты, с другой – снижением клиренса уратов, что предопределяется кетозом и повышением содержания β-оксибутирата.

Высокая частота обнаружения (30-50%) гиперурикемии у больных псориазом и саркоидозом, у которых, как предполагают, имеется повышенный обмен нуклеотидов и нуклеиновых кислот.

Гиперурикемию вызывают и многие лекарственные средства, например, мочегонные препараты (по данным исследований, проведённых в США, примерно у 75% больных, принимавших мочегонные препараты, выявлена гиперурикемия), пиразикамид, салицилаты и др. Поэтому Е.М.Тареев считает увеличение содержания мочевой кислоты в крови неспецифическим почечным показателем, совпадающим с фактом заболевания почек лишь в 30% случаев.

Понижение величины содержания кислоты в сыворотке крови наблюдается у больных с анемией, после приёма ими пиперазина, атефана, салицилатов и АКТ.

В суточной моче повышение величины содержания кислоты наблюдается при подагре, лейкемии, болезни Вильсона-Коновалова, вирусном гепатите, серповидноклеточной анемии, понижение – при ксантинурии, дефиците фолиевой кислоты, свинцовой интоксикации.

5.3. Фронтальный опрос.

1. Назовите конечные продукты распада пуриновых оснований.

2. Что представляет собой мочевая кислота?

3. Как мочевая кислота выводится из организма?

4. Назовите качественную реакцию на мочевую кислоту.

5. В чём заключается принцип калориметрического метода определения мочевой кислоты без депротеинизации?

6. Какие требования необходимо соблюдать перед проведением анализа на исследование мочевой кислоты?

7. Какие требования предъявляются к исследованию мочевой кислоты в моче?

8. Каковы нормальные показатели мочевой кислоты в сыворотке крови и моче?

9. Какую роль выполняет фермент ксантиноксидаза?

10. Что такое подагра? Чем характеризуется эта патология?

11. Где откладывается мочевая кислота?

12. Что такое гиперурикемия, гипоурикемия?

5.4. Решение ситуационных задач.

Задача № 1. У больного повышена активность ксантиноксидазы, уровень мочевой кислоты в сыворотке крови – 0,9 ммоль/л. Какое заболевание можно предположить у больного? Деятельность какого органа нарушена, и какие лабораторные биохимические исследования необходимо назначить для подтверждения диагноза?

Задача № 2. В приёмный покой поступил мужчина с жалобами на снижение аппетита, изменения вкуса хлеба, мяса, чувство тяжести и боли под ложечкой, отрыжку. Иногда наблюдается тошнота, рвота. В беседе врача с больным выяснено, что бывает ощущение ползания мурашек, онемение конечностей. Клинический анализ показал снижение эритроцитов, гемоглобина. Снижено количество моноцитов, эозинофилов. В периферической крови появляются мегалобласты.

Какие биохимические исследования необходимо назначить больному? О каком диагнозе предварительно можно думать?