Повышение приживляемости эмбрионов крупного рогатого скота воздействием на точки акупунктуры реципиентов

Тарадайник Т.Е.^1,2, Тарадайник Н.П.¹, Сингина Г.Н.¹, Казеев Г.В.³,

Казеева А.В.³

¹ГНУ Всероссийский институт животноводства РАСХН, Подольск, Московская обл., Россия, e-mail: almaatinka25@rambler.ru

²ФГБОУ Российская академия менеджмента в животноводстве, Подольский р-он, Московская обл., Россия

³ФГБОУ Российский государственный аграрный заочный университет, Балашиха, Московская обл., Россия

Несмотря на достижения в развитии и коммерческом использовании метода трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота, приживляемость зародышей, особенно замороженно-оттаянных, варьирует в широких пределах и обусловлена многими причинами (Mapletoft R.J., Hasler J.F., 2005). Поэтому остается актуальным вопрос повышения жизнеспособности эмбрионов и приживляемости их у реципиентов после нехирургической пересадки.

Установлено, что 80% всех эмбриональных потерь происходит до 17-го дня развития зародыша; с 17-го по 42-й день смертность составляет 10-15%, после 42-го дня – 5% и обусловлена целым рядом причин (Hansen P.J., 2002; O’Connor М., 2008).

Экспериментально доказано, что эмбрион способен корректировать несоответствие материнской среды (Ashworth C.J., Bazer F.W., 1989; Hansen P.J., 2002). Эмбрионы крупного рогатого скота продуцируют интерфероны, обладающие лютеотропным эффектом (Barros C.M. et al., 1992; Michael, D.D., 2006). Предпринимались попытки парентерального введения альфа- интерферона после искусственного осеменения, с целью коррекции функции желтого тела (Barros C.M. et al., 1992). Однако для достижения ожидаемого эффекта необходимы условия для получения биологически активных веществ, а также наличие достаточно больших объемов препаратов.

B этой связи весьма интересны экспериментальные данные об эффектах воздействия сверхмалых доз биологически активных соединений на организм (Бурлакова Е.Б., 1999). Установлено также, что вызывающая эффект доза лекарственного вещества может быть значительно снижена при введении в точки акупунктуры (ТА) (Казеев Г.В., 2000; Казеев Г.В. с соавт., 2001).

Ранее нами экспериментально был доказан эмбриотропный эффект кондиционированных эмбрионами in vitro сред при инъецировании их в точки акупунктуры коров в течение 10 дней после искусственного осеменения (Тарадайник Т.Е. с соавт., 2008; 2011). Известно, что при экстракорпоральном оплодотворении для улучшения культуральных условий развития эмбрионов млекопитающих довольно давно и достаточно успешно используются кондиционные клеточные и эмбриональные среды (Van Langendoncket A. еt al., 1996; Fujita T. et al. 2006). Кондиционная среда, по сути, является полноценным натуральным экстрактом, содержащим вырабатываемые эмбрионом факторы.

Цель исследований состояла в повышении приживляемости заморожено-оттаянных эмбрионов крупного рогатого скота при трансплантации.

Для достижения этой цели была поставлена задача: изучить влияние кондиционной эмбриональной среды, введенной в точки акупунктуры реципиентов на приживляемость заморожено-оттаянных эмбрионов крупного рогатого скота.

Материал и методы.Кондиционированные среды получали посредством культивирования оплодотворенных in vitro ооцитов коров. Полученные на каждом этапе культивирования эмбрионов среды замораживали в пробирках по 220 мкл и хранили при температуре – 70^оС до использования. Получение и введение сред в точки акупунктуры проводили по методике, описанной ранее (Тарадайник Т.Е. с соавт., 2008).

Для трансплантации использовали эмбрионы, полученные от коров- доноров голштинской породы со средней продуктивностью 10 тыс. кг молока. Эмбрионы были заморожены в этиленгликоле с 4% бычьего сывороточного альбумина, что предусматривает прямую пересадку реципиенту непосредственно после оттаивания без оценки качества эмбриона.

В качестве реципиентов использовали телок случного возраста в спонтанном и синхронизированном цикле. Всего было пересажено 111 эмбрионов: 61 – реципиентам опытной группы (58 голов); 50 – реципиентам контрольной группы (47 голов): трем телкам в каждой группе эмбрионы были пересажены в оба рога матки. Перед трансплантацией эмбрионов животным обеих групп проводили сакральную эпидуральную анестезию 2%-м раствором новокаина. Пересадку эмбрионов проводили нехирургическим методом глубоко в рог матки.

Реципиентам опытной группы сразу после трансплантации эмбриона вводили по 200 мкл кондиционной среды в ТА25 и/или ТА30. Локализация: ТА25 − на дорсомедиальной линии тела в углублении между 2-м (неподвижным) и 3-м (подвижным) хвостовыми позвонками; ТА30 − на медиальной линии тела между корнем хвоста и анусом (атлас Казеева Г.В., 2000). Контрольным животным среду не вводили. Оценку эффективности проводили через 2 месяца после трансплантации эмбриона методом ректальной пальпации матки. Для статистического анализа изменчивости по качественным признакам и определения достоверности разности между процентами использовали критерий Стьюдента (Петухов В.Л. с соавт., 1985).

Результаты и обсуждение. Введение в точки акупунктуры телок- реципиентов среды, кондиционированной in vitro эмбрионами крупного рогатого скота, позволило повысить показатель приживляемости заморожено- оттаянных эмбрионов после нехирургической пересадки на 17,9% (Р<0,05). Показатель стельности в опытной группе составил 44,8%, что на 14,3% выше, чем в контроле (таблица). При этом двойни сохранились только у тех телок, которым была введена кондиционная среда.

Таблица

Влияние кондиционной эмбриональной среды на приживляемость заморожено-оттаянных эмбрионов

Показатели	Опыт (кондиционная среда)	Контроль
Количество пересаженных эмбрионов, n	61	50
Количество реципиентов, n	58	47
Стельных реципиентов, n %	26 44,8±6,5	14 29,8±6,7
Прижилось эмбрионов, n %	28 45,9±6,4*	14 28,0±6,3

*-Р<0,05

Как было отмечено выше, оценку качества оттаянных эмбрионов перед пересадкой не проводили. Однако криоконсервации подвергают, как правило, эмбрионы отличного и хорошего качества. Следовательно, низкий процент приживляемости зародышей у интактных животных мог быть обусловлен не вполне удовлетворительным «качеством» реципиентов, в частности состоянием и активностью желтого тела, т.е. гормональным статусом. Отнюдь не исключено влияние других факторов, о чем свидетельствует невысокий показатель стельности телок от искусственного осеменения. Полученные нами результаты позволяют предположить, что эмбриональная кондиционная среда через ТА оказывает лютеотропное действие.

Выводы: Введение кондиционной эмбриональной среды в точки акупунктуры реципиентов после нехирургической пересадки повышает приживляемость заморожено-оттаянных эмбрионов на 17,9% (Р<0,05). Полученные результаты свидетельствуют о возможности нового подхода к решению проблемы повышения эмбриональной выживаемости.

Литература: 1. Бурлакова Е.Б. // Российский химический журнал, 1999, Т. 43, № 5.- С.3-11. 2. Казеев Г.В. Ветеринарная акупунктура.- М., 2000.- 399 с. 3. Казеев Г.В, Казеева А.В, Ильина Г.В. //Материалы девятого Московского Междунар. ветеринарного конгресса.- М., 2001.- C.251-252. 4. Петухов В.Л. и др. Ветеринарная генетика с основами вариационной статистики.- М., 1985.- С.150-153. 5. Тарадайник Т.Е., Сингина Г.Н., Казеева А.В. и др. // Международный вестник ветеринарии. Тематический вестник: «Новые аспекты в биотехнологии репродукции животных», 2008, № 3.- C.53. 6. Тарадайник Т.Е., Сингина Г.Н., Смирнова М.Л. // Проблемы биологии продуктивных животных, 2011, № 2.- С.19-22. 7. Ashworth C.J. and Bazer F.W. // Biol Reprod., 1989, Vol. 40.- Р.425-433. 8. Barros C.M., Betts J.G., Thatcher W.W., Hansen P.J. // J. Endocrinol., 1992, Vol. 133.- P.175-182. 9. Fujita, T., Umeki H., Shimura H., Kugumiya K., Shiga K. // J. Reprod. Dev., 2006, Vol. 52(1).- P.137-142. 10. Hansen P.J. // J. Anim. Sci., 2002, Vol. 80(2).- Р.33-44. 11. Mapletoft R.J., Hasler J.F. //Rev. sci. tech. Off. int. Epiz., 2005, Vol. 24 (1).- P.393-403. 12. Michael, D.D. // Endocrinology, 2006, Vol. 7.- P.3571-3579. 13. O’Connor М. // Dairy and Animal Science at Penn State, 2008, Vol. 11(6).- P.1- 2. 14. Van Langendoncket A. et al. // An overview. Reprod., Nutrit., Devel., 1996, Vol. 36.-P.493-502.

INCREASE OF VIABILITY OF BOVINE EMBRYOS BY INFLUENCE ON ACUPOINTS OF RECIPIENTS

Taradaynik T.E.^1,2, Taradaynik N.P.¹, Singina G.N.¹, Kazeev G.V.³,

Kazeeva A.V.³

¹Institute of Animal Husbandry, Podolsk, Moscov region, Russia

²Russian Academy of Management in Animal Husbandry, Moscov region, Podolsk, Russia

³Russian State Agrarian Correspondence University, Moscov region, Balashikha Russia

The results of effective increase viability frozen - thawed bovine embryos at the recipients by means of injection in biologically active points microdozes of conditioned medium obtained by cultivation of bovine embryos in vitro.

The number of viability in treated and control groups was 45,9% and 28,0% respectively. There is shown that injection of conditioned medium in acupoints, after embryo transfer, raises level of viability of frozen-thawed bovine embryos by 17,9% in comparison with control (P<0,05).

УДК 636.2:615.814