БИОИНЖЕНЕРИЯ

LCR, ligase cycling

reaction

ВИЗУАЛИЗАЦИЯ ПРОЦЕССА ДОСТАВКИ РЕКОМБИНАНТНЫХ ДНК

Флуоресцентные метки

•Флуоресценция – это излучение света веществом, которое поглотило свет.

•Излучаемый свет имеет большую длину волны, чем поглощённый свет.

•Сливание флуоресцентного белка с другим белком обычно не влияет на флуоресценцию первого.

Основное применение флуоресцентных белков:

 Путем изменения интенсивности флуоресценции определять

уровень экспрессии (сила или специфичность промотора)

 Сливая с интересующим белком, визуализировать его

локализацию

Основное применение флуоресцентных белков

•Fusion tagging – присоединение флуоресцентного белка к N или C концу белка, для его пространственной и временной визуализации

•Transcription Reporter – размещение гена флуоресцентного белка по исследуемый промотор с целью определения эффективности его работы

•Förster resonance energy transfer (FRET) – используется для изучения взаимодействия двух белков. Для этого к каждому из белков пришиваются флуоресцентные белки с перекрывающимися спектрами поглощения\испускания света.

•Split EGFP – используются для изучения взаимодействия двух белков. Для этого к каждому пришивается по половине флуоресцентного белка, который начинает светится, когда половины соединяются.

•Cell marking/selection – ген, кодирующий флуоресцентный белок, вставляется в плазмиду (как под отдельным промотором, так и через 2A сайт или IRES), для маркирования процесса попадания плазмиды к клетку

•Fluorescence-activated cell sorting (FACS) – флуоресцентная цитометрия,

основанная на разделении популяции клеток по наличию флуоресцентного белка

•Purification – использование флуоресцентного белка в качестве эпитопа для очистки белка

Классификация флуоресцентных белков по спектру эмиссии

Плазмидные таги (tags)