БИОИНЖЕНЕРИЯ
.pdfИзбранные loxP варианты
Red recombination system
•5`-3` экзонуклеаза
(Exo) (ген exo)
связывает и процессирует двухцепочечные концы ДНК
•Белок, связывающий одноцепочечную ДНК
(Bet) (ген bet)
•Белок-ингибитор экзонуклеазной активности (Gam) (ген gam) обеспечивает защиту от нуклеаз
ДНК-лигазы
ДНК лигаза бактериофага T4 (T4 DNA Ligase)
За одну единицу активности Т4 ДНК лигазы принимали количество фермента, необходимое для 50% сшивки HindIII-фрагментов ДНК фага лямбда за 30 мин при 16°С в 20 мкл реакционной смеси при концентрации ДНК 300 mkg/ml
Катализирует образование фосфодиэфирной связи между 5`- фосфатной и 3`-гидроксильными концевыми группами ДНК (РНК)
Лигирует как липкие, так и тупые концы
Использует в качестве кофактора АТФ в присутствии Mg2+
ДНК-лигазы
Taq ДНК лигаза (Taq DNA Ligase)
За одну единицу активности Taq ДНК лигазы принимали количество фермента, необходимое для 50% сшивки 12-ти мерных липких концов после рестрикции BstEII фага лямбда за 15 мин при 45°С в 50 мкл реакционной смеси
Катализирует образование фосфодиэфирной связи между 5`- фосфатной и 3`-гидроксильными концевыми группами ДНК
Лигирует только липкие концы
Использует в качестве кофактора дифосфопиридиннуклеотид
САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКИЕ НУКЛЕАЗЫ