Ход работы. К 5 каплям раствора белка добавить 5 капель 0,1%-ного раствора нингидрина, кипятить 1-2 мин - появляется розово-фиолетовое или сине-фиолетовое окрашивание.

3. Ксантопротеиновая реакция открывает в белках циклические аминокислоты, основой структуры которых является бензольное ядро. Большинство белков при нагревании с концентрированной азотной кислотой приобретает желтое окрашивание, переходящее в оранжевое при подщелачивании.

Химизм: реакция обусловлена нитрованием бензольного кольца соответствующих аминокислот с образованием нитросоединений желтого цвета:

Ход работы. К 5 каплям раствора белка добавить 3 капли концентрированной азотной кислоты и осторожно кипятить. Появляющийся осадок белка окрашивается в желтый цвет. После охлаждения прилить по каплям 10%-ный раствор едкого натра до появления оранжевого окрашивания.

4. Реакция Миллона открывает в белках циклическую аминокислоту тирозин, имеющую фенольную группировку, которая, взаимодействуя с реактивом Миллона (смесь азотнокислых солей закиси и окиси ртути в концентрированной азотной кислоте), образует ртутную соль красного цвета. Белки, не содержащие тирозина, этой реакцией не обнаруживаются. При избытке реактива Миллона появление окраски (красного цвета) может быть замаскировано ксантопротеиновой реакцией за счет азотной кислоты.

Ход работы. К 5 каплям раствора белка прилить 3 капли реактива Миллона - появляется осадок белка, который при осторожном нагревании окрашивается в кирпично-красный цвет. Ту же процедуру, повторить с раствором фенола (осторожно — ожоги!).

5. Реакция Фоля позволяет обнаружить в белке аминокислоты (цистин и цистеин), содержащие непрочно связанную серу.

Химизм реакции: при кипячении белка со щелочью цистин и цистеин теряют серу в виде сероводорода, который с плюмбитом образует черный или серый осадок сернистого свинца (реактив Фоля состоит из 5%-ного раствора уксуснокислого свинца и избытка 10%-ного раствора едкого натра):

1. а) (CH₃COO)₂Pb+2NaOH → 2CH₃COONa+ ↓ РЬ(ОН)₂+NаОН;

б) Pb(OH)₂+2NaOH → NaPbO₂+2Н₂O+избыток NaOH;

СН - SH СН₂ОН

│ │

2. CH - NH₂+2NаОН → СН – NН₂+Nа₂S+Н₂О;

│ │

Соон cooh Цистеин Серин

3) Nа₂S+Nа₂РЬО₂+2Н₂О → PbS ↓ +4NaOH.

Черный

осадок

Ход работы. К 5 каплям раствора белка прилить 5 капель реактива Фоля, нагреть до кипения и оставить на 1 или 2 мин - появляется бурый или черный осадок сернистого свинца.

ВНИМАНИЕ!!!

После выполнения проб каждому студенту необходимо индивидуально проделать следующее: в пробе жидкости, полученной у ассистента, установить наличие белка или аминокислот (при обнаружении аминокислот определить тип).

Дайте (письменно) обоснованные ответы на следующие вопросы:

1. Из 1 мл биологической жидкости полностью осажден белок, с помощью метода Къельдаля в осадке обнаружено 3 мг азота.

Каково процент­ное содержание белка в исследуемой жидкости?

2. Исследуемая биологическая жидкость при нагревании с нингидрином приобретает фиолетовое окрашивание. Содержатся ли в исследуемой жидкости соединения белковой природы?

3. Исследуемая жидкость при нагревании с реактивом Миллона приобретает кирпично-красный цвет.

Свидетельствует ли это о присутствии белка?

4. Реакция Фоля с биологической жидкостью положительна.

Ваши выводы, нужна ли дополнительная информация?

5. Можно ли установить присутствие свободных аминокислот в растворе белка, располагая реактивами только для нингидриновой пробы?

Используя учебник, проделайте следующее:

1. Запишите определение понятия «белковая молекула»,

2. Изобразите структурные формулы протеиногенных аминокислот,

3. Разделите их в зависимости от строения радикала на циклические и ациклические,

4. Разделите их в зависимости от характера дополнительной функциональной группы.