ных, как правило, одной копией. Большая часть рибосомальных белков выполняет структурную функцию.

Синтез белка осуществляется агрегатами, состоящими из рибосом, молекул информационной и транспортных РНК и называемыми полирибосомами, или полисомами. Последние могут находиться в цитоплазме или же быть связанными с мембранными структурами.

Генетический аппарат и репликация хромосомы

Строение генетического аппарата прокариох долгое время было предметом жарких дискуссий, суть которых сводилась к тому, есть у них такое же ядро, как у эукариот, или нет. Уста­новлено, что генетический материал прокариотных организмов, как и эукариотных, представлен ДНК, но имеются существен­ные различия в его структурной организации. У прокариот ДНК представляет собой более или менее компактное образо­вание, занимающее определенную область в цитоплазме и не отделенное от нее мембраной, как это имеет место у эукариот. Чтобы подчеркнуть структурные различия в генетическом ап­парате прокариотных и эукариотных клеток, предложено у пер­вых его называть нуклеоидом в отличие от ядра у вторых.

При электронно-микроскопическом наблюдении видно, что нуклеоид прокариот, несмотря на отсутствие ядерной мембра­ны, довольно четко отграничен от цитоплазмы, занимает в ней, как правило, центральную область и заполнен нитями ДНК диаметром около 2 нм. Не исключено, что на выявляемую в электронном микроскопе организацию прокариотной хромосо­мы большое влияние оказывают условия фиксации препарата. По имеющимся наблюдениям, в живой клетке нуклеоид зани­мает больше места в цитоплазме.

Вся генетическая информация прокариот содержится в од­ной молекуле ДНК, имеющей форму ковалеытно замкнутого кольца и получившей название бактериальной хромо­сомы¹⁰. Длина молекулы в развернутом виде может состав­лять более 1 мм, т. е. почти в 1000 раз превышать длину бак­териальной клетки. Длительное время считали, что в распре­делении нитей ДНК бактериальной хромосомы не прослежи­вается никакой закономерности. Однако если исходить из того, что молекула ДНК образует беспорядочный клубок, трудно объяснить процесс репликации и последующее распределение образовавшихся хромосом по дочерним клеткам. Специальные исследования показали, что хромосомы прокариот представля­ют собой высокоупорядоченную структуру, имеющую констан­ту седиментации 1300—2000S для свободной и 3200—70005 для

¹⁰ В прокариотной клетке ДНК может находиться м вне бактериальной хромосомы в плазмидах, но последние не являются обязательными кле­точными компонентами.

Рис. 16. Строение ДНК:

А — фрагмент нити ДНК, образованной чередующимися остатками дезоксирибозы и фосфорной кислоты. К первому углеродному атому дезоксирибозы присоединено азотистое основание: / — цитозин; 2 — гуанин; Б — двойная спираль ДНК: Д ■— дезоксирибоза; Ф — фосфат; А — аденин; Т — тимин; Г ■— гуанин; Ц — цитозин

связанной с мембраной формы. В том и другом случае часть ДНК в этой структуре представлена системой из 20—100 не­зависимо суперспирализованных петель. В обеспечении супер-спирализованной организации хромосом участвуют молекулы РНК.

Хромосомы большинства прокариот имеют молекулярную массу в пределах 1—3-Ю⁹ Да. В группе микоплазм генетиче­ский материал представлен молекулами, имеющими наимень­шее для клеточных организмов количество ДНК (0,4—0,8• 10⁹), а наибольшее содержание ДНК обнаружено у нитчатых ци-анобактерий (8,5■ 10⁹). Хотя каждая прокариотная клетка содержит 1 хромосому, часто в экспоненциально растущей культуре количество ДНК на клетку может достигать массы 3, 4, 8 и более хромосом. Нередко в клетках при действии на Них определенных факторов (температуры, рН среды, ионизи­рующего излучения, солей тяжелых металлов, некоторых анти-

54

55

биотиков и др.) происходит образование множества копий хро­мосомы. При устранении воздействия этих факторов, а также после перехода в стационарную фазу в клетках, как правило, обнаруживается по одной копии хромосомы¹¹.

ДНК прокариот построена так же, как и зукариот (рис. 16). Молекула ДНК несет множество отрицательных зарядов, по­скольку каждый фосфатный остаток содержит ионизированную гидроксильную группу. У эукариот отрицательные заряды ней­трализуются образованием комплекса ДНК с основными бел­ками — гистонами. В клетках подавляющего большинства про­кариот не обнаружено гистонов, поэтому нейтрализация заря­дов осуществляется взаимодействием ДНК с полиаминами (спермином и спермидином), а также с ионами Mg²⁺. В пос­леднее время у некоторых архебактерий и цианобактерий обна­ружены гистоны и гистоноподобные белки, связанные с ДНК. Содержание пар оснований A-f-T и Г+Ц в молекуле ДНК явля­ется постоянным для данного вида организма и служит важ­ным диагностическим признаком. У прокариот молярная доля ГЦ в ДНК колеблется в очень широких пределах: от 23 до 75%.

Деление молекулы ДНК (репликация) происходит по полу­консервативному механизму и в норме всегда предшествует делению клетки. С помощью электронного микроскопа уста­новлено, что репликация ДНК начинается в точке прикрепле­ния кольцевой хромосомы к ЦПМ, где локализован фермента-

Рис. 17. Репликация кольцевой бактериальной хромосомы в

двух направлениях.

А — родительская молекула ДНК; Б — промежуточные ре-пликативные формы; В — дочерние молекулы ДНК после завершения процесса репликации и расхождения: ) — точка начала репликации; черными стрелками показано направ­ление репликации

¹¹ Из изложенного выше следует, что термины «нуклеоид» и «хромосо­ма» не всегда совпадают. В зависимости от условий нуклеоид прокариотной клетки может состоять из одной или некоторого числа копий хромосомы.

56

тивный аппарат, ответственный за репликацию. Часто можно об­наружить, что контакт ДНК с ЦПМ осуществляется посредст­вом мезосом. Репликация, начавшаяся в точке прикрепления, идет затем в двух противоположных направлениях, образуя ха-

Рис. 19. Модель органи­зации нуклеоида Е. coli:

1. — наружная мембра­ на клеточной стенки;

2. — пептидогликановый слой; 3 — ЦПМ; 4 — точка прикрепления бак­ териальной хромосомы к ЦПМ; 5 — рибосомы, «сидящие» на иРНК; остальные объяснения см. в тексте (по Громо­ ву, 1985)

. Рис. 18. Механизм распределения

бактериальных хромосом: А — бактериальная клетка содер­жит частично реплицированную хро­мосому, прикрепленную к мембране в точке (или точках) репликации; Б —■ репликация хромосомы завер­шена. В бактериальной клетке две дочерние хромосомы, каждая из ко­торых прикреплена к ЦПМ. Пока­зан синтез клеточной стенки и ЦПМ; В ■— продолжающийся синтез мем­браны и клеточной стенки приводит к разделению дочерних хромосом. Показано начало деления клетки путем образования поперечной пе­регородки: 1 — ДНК; 2 — прикреп­ление хромосомы к ЦПМ; 3 — ЦПМ; 4 — клеточная стенка; 5 — синте­зированный участок ЦПМ; 6 — но­вый материал клеточной стенки

рактерные для кольцевой хромосомы промежуточные структу­ры (рис. 17). Возникающие дочерние хромосомы остаются при­крепленными к мембране. .Репликация молекул ДНК происхо­дит параллельно с синтезом мембраны в области контакта ДНК с ЦПМ. Это приводит к разделению (сегрегации) дочер­них молекул ДНК и оформлению обособленных хромосом (рис. 18).

Модель строения бактериальной хромосомы должна объяс­нять также прохождение в клетке процессов транскрипции и трансляции. Согласно существующим представлениям супер-спирализованные петли соответствуют неактивным в данное время участкам ДНК и находятся в центре нуклеоида. По его периферии располагаются деспирализованные участки, на ко­торых происходит синтез информационной РНК (иРНК), при этом, поскольку у бактерий процессы транскрипции и трансля­ции идут одновременно, одна и та же молекула иРНК может быть одновременно связана с ДНК и рибосомами (рис. 19).

Рост и способы размножения

Под ростом прокариотной клетки понимают согласованное увеличение количества всех химических компонентов, из кото­рых она построена. Рост является результатом множества ско­ординированных биосинтетических процессов, находящихся под строгим регуляторным контролем, и приводит к увеличению массы (а следовательно, и размеров) клетки. Но рост клетки не беспределен. После достижения определенных (критичес­ких) размеров клетка подвергается делению.

Для подавляющего большинства прокариот характерно равновеликое бинарное поперечное деление, приводящее к образованию двух одинаковых дочерних клеток. При таком способе деления имеет место симметрия в отноше­нии продольной и поперечной оси. У большинства грамположи-тельных эубактерий и нитчатых цианобактерий деление проис­ходит путем синтеза поперечной перегородки, идущего от пе­риферии к центру (рис. 20, Л). Так у Bacillus subtilis в середи­не клетки сначала имеет место кольцевое впячивание ЦПМ, сопровождающееся формированием мезосом разного внешнего вида. Они образуются в месте закладки поперечной перегород­ки, и предполагается их активное участие в процессах синтеза пептидогликана и других компонентов клеточной стенки. По­перечная перегородка формируется из ЦПМ и пептидоглика-нового слоя, ее наружные слои синтезируются позднее. Клет­ки большинства грамотрицательных эубактерий делятся путем перетяжки. У Е. coli на месте деления обнаруживается по­степенно увеличивающееся и направленное внутрь искривление ЦПМ и клеточной стенки (рис. 20,5). Синтез новой клеточной стенки может происходить в нескольких местах или только в зоне формирования поперечной перегородки (рис. 20, А, Б).

Вариантом бинарного деления является почкование, ко­торое можно рассматривать как неравновеликое бинарное де­ление. При почковании на одном из полюсов материнской клет­ки образуется маленький вырост (почка), увеличивающийся в процессе роста. Постепенно почка достигает размеров материн­ской клетки, после чего отделяется от последней. Клеточная

58

стенка почки полностью синтезируется заново (рис. 20, В). В процессе почкования симметрия наблюдается в отношении только продольной оси. При равновеликом бинарном делении материнская клетка, делясь, дает начало двум дочерним клет­кам и сама, таким образом, исчезает. При почковании мате-

ринская клетка дает начало дочерней клетке, и между ними можно в боль­шинстве случаев обнаружить морфо­логические и физиологические разли­чия: есть старая материнская клетка и новая дочерняя. В этом случае можно наблюдать процесс старения. Так, для некоторых штаммов Rhodotnicrobium показано, что материнская клетка спо­собна отпочковывать не более 4 дочер­них клеток. Дочерние клетки лучше приспосабливаются к меняющимся ус­ловиям. Почкование обнаружено в разных группах прокариот: среди фо­то- и хемотрофов, осуществляющих

Рис. 20. Способы деления и синтез клеточной

стенки у прокариот:

А •— деление путем образования поперечной перегородки; Б — деление путем перетяжки; В — почкование; Г — множественное деле­ние: 1 — клеточная стенка (толстой линией ■обозначена клеточная стенка материнской клетки, тонкой — заново синтезированная); 2 — ЦПМ; 3 — мембранная структура; 4 ■— цитоплазма, в центре которой расположен нуклеоид; 5 ■— дополнительный фибрилляр­ный слой клеточной стенки

авто- и гетеротрофный конструктивный метаболизм. Вероятно, оно в процессе эволюции возникало несколько раз.

Бинарное деление может происходить в одной или несколь­ких плоскостях. В первом случае, если после деления клетки не расходятся, это приводит к образованию цепочек палочко­видных или сферических клеток, во втором — к клеточным скоплениям разной формы (см. рис. 3,4—6). Расхождение об­разовавшихся дочерних клеток происходит в результате лизи­са среднего слоя клеточной стенки.

Для одной группы одноклеточных цианобактерий описано размножение путем множественного деления. Оно начи­нается с предварительной репликации хромосомы и увеличения размеров вегетативной клетки, которая затем претерпевает ряд _х быстрых последовательных бинарных делений, происходящих внутри дополнительного фибриллярного слоя материнской кле­точной стенки. Это приводит к образованию мелких клеток, по-

59

лучивших название баеоцитов ¹², число которых у разных вадов колеблется от 4 до 1000. Освобождение баеоцитов происходит путем разрыва материнской клеточной стенки (рис. 20, Г). Та­ким образом, в основе множественного деления лежит принцип равновеликого бинарного деления. Отличие заключается в том, что в этом случае после бинарного деления не происходит ро­ста образовавшихся дочерних клеток, а они снова подверга­ются делению.

Деление прокариотной клетки начинается, как правило, спу­стя некоторое время после завершения цикла репликации мо­лекулы ДНК- Вероятно, репликация бактериальной хромосомы запускает какие-то процессы, ведущие к клеточному делению. Более детальное изучение у разных видов прокариот взаимо­связи между репликацией ДНК и делением клетки не привело, к однозначным результатам. Получены данные о том, что сиг-* налом к клеточному делению служит начало репликации ДНК, ее завершение или репликация определенного локуса бактери­альной хромосомы. Таким образом, в норме существует впол­не определенная временная связь между репликацией хромосо­мы и делением бактериальной: «летки. Воздействия различны-: ми химическими веществами и физическими факторами, при­водящие к подавлению репликации ДНК, останавливают и клеточное деление. Однако при некоторых условиях связь ме­жду обоими процессами может быть нарушена, и клетки спо­собны делиться в отсутствие синтеза ДНК- Это удалось полу­чить введением определенных мутаций в генетический аппа­рат бактериальной клетки.

Нарушить последовательность процессов репликации бакте­риальной хромосомы и клеточного деления также можно, вы­ращивая бактерии при разной температуре. Культивирование Bacillus sublilis на богатой питательной среде при 37° приво­дит к интенсивному делению бактериальной хромосомы и ро­сту клеток, в результате чего в культуре образуются нитевид­ные клетки, содержащие множество хромосомных копий с от­сутствующими совсем или недосформированными (незамкнуты­ми) поперечными перегородками. При замедлении скорости ро­ста наблюдается деление нитевидных клеток, приводящее к образованию бактериальных клеток нормальной длины.

Внутрицитоплазматические включения

В цитоплазме прокариот обнаруживаются различные вклю­чения. Одни из них следует рассматривать как активно функ­ционирующие структуры, другие — как продукты клеточного метаболизма, не выделяющиеся наружу, но откладывающиеся внутри клетки. Некоторые цитоплазматические включения име-

¹² Баеоцит — по-гречески маленькая клетка.

60

ют явно приспособительное значение. И наконец, многие из них являются запасными веществами, отложение которых клеткой происходит в условиях избытка питательных веществ в окру­жающей среде, а потребление наблюдается, когда организм попадает в условия голодания.

К числу внутрицитоплазматических включений, выполня­ющих определенную функцию в фотосинтезе, относятся хло­росомы зеленых бактерий и фикобилисомы цианобактерий. В этих структурах локализованы пигменты, поглощающие кван­ты света и передающие их в реакционные центры, т. е. выпол­няющие роль антенны. Хлоросомы имеют форму продолговатых пузырьков длиной 90—150 и шириной 25—70 нм, окруженных однослойной электронно-плотной мембраной толщиной 2—3 нм_г построенной только из белка. Они располагаются в непосред­ственной близости от ЦПМ, плотно к ней примыкая (см. рис. 4). В хлоросомах локализованы бактериохлорофиллы с, d или е. Водорастворимые пигменты белковой природы (фикобили-протеины) цианобактерий содержатся в особых структурах — фикобилисомах, расположенных правильными рядами на внеш­них поверхностях фотосинтетических мембран и под электрон­ным микроскопом имеющих вид гранул диаметром 28—55 нм (см. рис. 4).

В клетках некоторых прокариот из групп фототрофных и хемолитотрофных эубактерий содержатся структуры, имеющие форму многогранника с 4—6 сторонами и диаметром 90— 500 нм, получившие название карбоксисом, или полиэдральных тел (см. рис. 4). Под электронным микроскопом удалось пока­зать, что они заполнены гранулярным содержимым и окруже­ны однослойной мембраной белковой природы толщиной при­мерно 3 нм. Карбоксисомы состоят из частиц рибулозодифос­фаткарбоксилазы, • фермента, катализирующего фиксацию СО₂ на рибулозодифосфате в восстановительном пентозофосфатном цикле. До настоящего времени окончательно не выяснено, в^ какой форме находится фермент в карбоксисомах: в инертном пли функционирующем состоянии. Имеются данные в пользу того, что в активно растущей культуре больше фермента на­ходится в растворимой форме. При переходе в стационарную фазу увеличивается доля рибулозодифосфаткарбоксилазы в со­ставе карбоксисом. Эти данные указывают на возможную роль карбоксисом как структур, обеспечивающих защиту фермента от воздействия внутриклеточными протеазами и, таким обра­зом, его консервирование.

Примером внутрицитоплазматических включений, имеющих приспособительное значение, служат магнитосомы и газовые вакуоли, или аэросомы, обнаруженные у водных прокариот. Га­зовые вакуоли найдены у представителей, относящихся к 15< таксономическим группам. Это сложно организованные струк­туры, напоминающие пчелиные соты (см. рис. 4). Состоят из: множества регулярно расположенных газовых пузырьков, име-

61

азоту указывают на то, что они в клетке служат резервом азо­та, мобилизуемым при его недостатке в среде.

Для прокариот, метаболизм которых связан с соединения­ми серы, характерно отложение в клетках молекулярной серы. Сера накапливается, когда в среде содержится сероводород, и окисляется до сульфата, когда весь сероводород среды оказы­вается исчерпанным. Для аэробных тионовых бактерий, окис­ляющих H₂S, сера служит источником энергии, а для анаэроб­ных фотосинтезирующих серобактерий она является донором электронов.

Обращает внимание, что все запасные вещества представле­ны в виде высокомолекулярных полимерных молекул, в ряде случаев отграниченных от цитоплазмы белковой мембраной, т. е. находятся в осмотически неактивном состоянии. Это важ­но, так как в противном случае сосредоточение в цитоплазме «большого числа молекул осмотически активных веществ ока­зало бы на клетку отрицательное действие.

Глава 5

МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ДИФФЕРЕНЦИРОВКА И УРОВНИ КЛЕТОЧНОЙ ОРГАНИЗАЦИИ ПРОКАРИОТ

Для эволюции прокариотных организмов характерен ярко выраженный физиолого-биохимический уклон, т. е. основное развитие прокариот шло по линии формирования и опробова­ния различных функций, результатом чего и явилось сегодняш­нее многообразие типов жизни в микромире. Поразительное физиологическое разнообразие прокариот сформировано на ба­зе весьма ограниченного числа морфологических форм. Дейст­вительно, морфологическая эволюция прокариот прошла не­значительный путь, так что мы можем говорить лишь о зачат­ках морфологической дифференцировки на базе прокариотной .клеточной организации. Относительно «продвинутыми» в этом направлении оказались только эубактерий. Для архебактерий характерно отсутствие сложных морфологических форм и ка­кой-либо клеточной дифференцировки.

Вегетативные клетки многих эубактерий в определенных ус­ловиях дают начало структурам, морфологически отличающим­ся от исходных. Ими могут быть вегетативные клетки, но изме­ненной формы, клеточные структуры с четко выраженной функ­циональной специализацией, различные многоклеточные обра­зования. В подавляющем большинстве случаев все известные проявления морфологической дифференцировки эубактерий на­правлены на повышение их выживаемости. Это выражается как в формировании специальных клеток, обладающих повышенной устойчивостью к перенесению неблагоприятных условий (эндос­поры, цисты), так и в формировании структур, обеспечивающих

64

эффективное размножение вида (гормогонии и баеоциты циа-|нобактерий).

В основе морфологической дифференцировки лежат опреде­ленные биохимические процессы, которые в свою очередь явля­ются выражением соответствующей генетической информации ¹³. Последняя запрограммирована в генетическом аппарате клетки и реализуется в процессе ее развития или же в зависимости от действия различных внешних факторов.

МОРФОЛОГИЧЕСКИ ДИФФЕРЕНЦИРОВАННЫЕ КЛЕТКИ

Образование морфологически дифференцированных клеток у разных представителей эубактерий суммировано в табл. 6. Боль­шинство таких структур относится к категории покоящихся форм, назначение которых — обеспечить переживание вида в течение длительного времени в неблагоприятных условиях. Это

Таблица 6 Морфологически дифференцированные клетки эубактерий

Специализированные клетки	Представители эубактерий, | у которых они обнаружены
Эндоспоры	Bacillus, Clostridium, Desulfotomaculum, Sporosarcina, некоторые актиномицеты
Экзоспоры	некоторые виды Methylosinus, Rhodo-microbium, многие актиномицеты
Цисты	миксобактерии, скользящие бактерии, Azotobacter, Bdellovibrio
Бактероиды	клубеньковые бактерии
Гетероцисты, акинеты, баеоциты, гормогонии	цианобактерии

эндоспоры ряда грамположительных бактерий, цисты азотобак­тера и миксобактерии, акинеты цианобактерии, экзоспоры от­дельных представителей метилотрофных и фототрофных бакте­рий, экзо- и эндоспоры актиномицетов. После попадания в под­ходящие условия покоящиеся формы прорастают, давая начало вегетативным клеткам. Другие морфологически дифференциро­ванные клетки служат для размножения. К ним относятся, на­пример, гормогонии и баеоциты цианобактерии. Наконец, тре­тьи (гетероцисты цианобактерии, бактероиды клубеньковых бак­терий) связаны с осуществлением уникального процесса, свой­ственного только прокариотным организмам, — фиксацией мо­лекулярного азота атмосферы.

¹³ Ф. Жакоб (F. Jacob) и Ж. Моно (J. Monod) определили дифферен-Цировку следующим образом: «одну клетку следует считать дифференци­рованной по сравнению с другой, если при одинаковых геномах набор белков, синтезированных в этих клетках, различен».

65

3 Микробиология

Мы рассмотрим случаи морфологической дифференцировки у эубактерий на примерах формирования ими разных типов по коящихся клеток. Сведения о других типах клеточной дифферен цировки можно найти в разделах, посвященных краткой харак теристике различных групп прокариот.