СПЕКТРОФОТОМЕТР - прибор, который измеряет спектры поглощения
В ОСНОВЕ АБСОРБЦИОННОЙ СПЕКТРОСКОПИИ ЛЕЖИТ ЗАКОН БУГЕРА – ЛАМБЕРТА - БЕРА
D lg II0 c l
Особенности спектроскопии биополимеров
Использование растворов
Узость температурного интервала, в котором
биополимеры не денатурируют
ПОГЛОЩЕНИЕ БЕЛКОВ
Хромофор - функциональная группа, с которой связано возбуждение молекулы посредством поглощения света в видимой и ближней УФ- области.
Хромофоры белковых молекул
пептидные группы |
|
простетические группы |
боковые группы аминокислотных остатков
ПОГЛОЩЕНИЕ ПЕПТИДНЫХ ГРУПП
Для изучения свойств пептидных хромофоров используют модельные соединения
(они аналогичны рассматриваемым соединениям в отношении всей структуры или какого-то фрагмента структуры)
формамид N -метил ацетамид
Пептидная группа
Поглощение наблюдается в диапазоне 210 – 220 нм
ПОГЛОЩЕНИЕ АМИНОКИСЛОТНЫХ ОСТАТКОВ
Для боковых групп многих аминокислот (Asp, Glu, Asn,
Gln, Arg и His) зарегистрировать электронные переходы в белках или полипептидах практически нельзя.
ПРИЧИНЫ
Эти электронные переходы маскируются интенсивным поглощением пептидной группы.
Они уступают по интенсивности электронному переходу пептидной группы
Число соответствующих боковых радикалов обычно меньше, чем число пептидных групп.
Интерес представляют только те хромофоры белковых молекул, которые поглощают при длинах волн больше 230 нм, где вклад в поглощение пептидных групп пренебрежимо мал.
Такими свойствами обладают Phe, Туг и Тгр, а также гистидиновый фрагмент и дисульфидный мостик цистина.
Ароматические аминокислоты: триптофан, тирозин и фенилаланин.
хромофорные группы этих аминокислот
|
бензольное |
|
|
|
фенольное |
|
|
|
Индольное |
|
|
кольцо |
|
|
|
кольцо |
|
|
|
кольцо |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
фенилаланин |
тирозин |
триптофан |
|
|
Спектры поглощения ароматических аминокислот.
По оси ординат отложены значения молярного коэффициента экстинкции в логарифмической шкале