Препарат 14. Первичная полоска. Поперечный разрез зародыша цыпленка. Гематоксилин – эозин.

При малом увеличении препарат надо сориентировать так, чтобы его средняя часть (плотный и широкий клеточный слой) была в центре, а его небольшое углубление располагалось сверху. Также нужно обратить внимание на расположение гранул желтка по краям среза: они должны быть снизу. При такой ориентации спинная сторона зародыша будет сверху. Скопление клеток в центре объекта – первичная полоска. Углубление сверху – первичная бороздка.

По обе стороны от первичной бороздки зародышевый материал разделен на зародышевые листки: поверхностно расположенную, более мощную, эпителизированную многослойную эктодерму, лежащую на желтке тонкую однослойную кишечную энтодерму и находящуюся между ними рыхлую мезодерму.

По мере удаления от первичной полоски эктодерма истончается, приобретает вид двурядного, а затем и однослойного пласта. У птиц, в отличие от амфибий, клетки, выселяющиеся внутрь зародыша, уходят туда не пластами, а индивидуально, поэтому под первичной бороздкой мезодерма образует густое скопление, а по мере перемещения к периферии ее клетки располагаются рыхло. Кишечная энтодерма на всем протяжении представлена тонким слоем уплощенных клеток. В отличие от амфибий, в гаструле птиц не образуется настоящего архэнтерона, точнее, он не формирует замкнутую трубку, а остается распластанным на желтке.

Край обрастания представляет собой малодифференцированную бластодерму, которая в процессе обрастания расслаивается на внезародышевую эктодерму и желточную энтодерму.

Задание: изучить препарат при среднем (х20) и большом увеличении (х40) и зарисовать.

Рис. 4 Поперечный разрез зародыша цыпленка на стадии первичной бороздки. Гематоксилин-эозин. Об. х 20.

Обозначения: 1 – первичная бороздка; 2 – первичная полоска; 3 – эктодерма; 4 – мезодерма; 5 – кишечная энтодерма; 6 – край обрастания; 7– желток.

Препарат 18. Зародыш курицы на вторые сутки инкубации (29–37 часов инкубации). Тотальный препарат. Гематоксилин-эозин.

Изучая препараты зародыша курицы на стадии нейрулы, следует обратить внимание, что дифференцировка зародышевых листков в головном отделе значительно опережает дифференцировку в туловищном и хвостовом отделах. Так, если в головном отделе зародыша наблюдаются признаки стадии поздней нейрулы, то в средней его части заметны признаки ранней и средней нейрулы, а в хвостовом отделе еще завершается гаструляция. С головного отдела также начинается отделение зародыша от желтка. Это явление называют кранио-каудальным градиентом развития. Оно присуще всем позвоночным, но у птиц выражено особенно ярко из-за большой протяженности зародыша по продольной оси при малых поперечных размерах.

Стадия ранней нейрулы (23–24 часа инкубации). На этом этапе начинается отделение головного отдела зародыша от стенки желточного мешка посредством головной складки. На тотальных препаратах эта складка выглядит как серповидная тонкая темная полоска впереди головного конца зародыша, граничащая с задним краем проамниона. В передней части зародыша уже начинает формироваться осевой комплекс органов. Хорда удлиняется и выглядит как узкая темная полоска на фоне более широкой светлой нервной пластинки, ограниченной темными скоплениями мезодермы по бокам. Заканчивается хорда, немного не доходя до конца головы. На переднем конце нервной пластинки по ее краям можно заметить темные полоски нервных валиков. Начинается сегментация осевой мезодермы, и можно увидеть от 1 до 3 пар сомитов. Гензеновский узелок и первичная бороздка сместились в среднюю часть зародыша и примыкают к хорде сзади. В аrea opaca, начинают возникать многочисленные скопления клеток внезародышевой мезодермы – кровяные островки, отчего она выглядит пятнистой.

Стадия средней нейрулы (24–26 часов инкубации). Головная складка углубляется, передний конец зародыша еще больше приподнимается и нависает над проамнионом. Теперь его можно называть головой зародыша. Пространство между головой и поверхностью зародышевого диска – подголовной карман.

Нервные валики становятся более рельефными и сливаются с краниального конца, образуя нервную трубку. На препарате это выглядит как темная вытянутая Х-образная фигура в области переднего конца зародыша. Верхние ветви Х слились, образуя замкнутое отверстие. Это передний невропор. Он возникает в результате запаздывания смыкания нервных валиков на крайнем, ростральном конце нервной трубки и сохраняется до конца нейруляции. В средней и каудальной части зародыша нервные валики несколько расходятся и становятся менее отчетливыми, так как здесь процессы сворачивания нервной трубки еще не начались. Место, где нервные валики расходятся – задний невропор (в ходе нейруляции он постоянно смещается каудально). Хорда хорошо заметна только на участках, где нервная трубка еще не образовалась.

Важной характеристикой средней нейрулы является образование энтодермальной передней кишки. Она образует в головном отростке карман, напоминающий маленький палец перчатки, вложенный внутрь большого. Таким образом, передняя (головная) кишка – первая часть пищеварительного тракта, приобретающая клеточное дно. Часть кишечника, расположенная каудальнее, где дно все еще составляет желток, именуется средней кишкой. Отверстие между передней и средней кишками называется передними кишечными воротами. Топографически край передних кишечных ворот выглядит как еще одна полукруглая линия, лежащая каудальнее головной складки.

В туловищной части зародыша уже имеется 4-5 пар сомитов. Гензеновский узелок и укоротившаяся первичная бороздка также сместились к хвостовой части зародыша.

Стадия поздней нейрулы (26–28 часов инкубации). На этой стадии головная часть нервной трубки значительно увеличивается и образует расширение, в котором заметны три отдела (самое широкое – передний мозговой пузырь, отделенный от переднего сужением средний мозговой пузырь, и, наконец, задний мозговой пузырь, отграниченный очень слабо выраженным сужением). Часто на препаратах отчетливо выделяется лишь передний мозговой пузырь. Передний невропор уменьшается (полностью закрывается после 33-го часа инкубации).

Замыкание нервной трубки распространяется к задней части зародыша параллельно формированию сомитов, при этом по всей длине она имеет приблизительно одинаковый диаметр. Каудальнее самых задних сомитов нервный желобок остается открытым (там теперь находится задний невропор). Нервные валики с обеих сторон огибают гензеновский узелок, за которым располагается значительно укоротившаяся первичная бороздка, а перед ним – хорда. Именно на стадии поздней нейрулы лучше всего заметен кранио-каудальный градиент в развитии куриного зародыша: на переднем конце уже замкнулась нервная трубка, а в заднем все еще завершается гаструляция.

На этой стадии зародыш содержит 6-8 пар сомитов. К концу нейруляции на некоторых препаратах видно сформировавшееся в задней части аrea opaca внезародышевое сосудистое сплетение, в то время как в передней ее части еще формируются кровяные островки. На уровне передних кишечных ворот можно заметить зачатки парных желточных вен, а если перевернуть препарат и рассмотреть его с брюшной стороны выше места слияния вен – зачаток сердца (со спинной стороны его прикрывает задний мозговой пузырь).

Задание: рассмотреть препарат при ув. х8, определить стадию нейруляции и зарисовать ее. Внимание! На препаратах указано время инкубации зародыша, однако оно не может служить основным критерием для определения стадии, так как скорость развития зависит от многих внешних и внутренних факторов и весьма индивидуальна. Ориентируйтесь на морфологические описания зародышей.

Рис. 4 Тотальный препарат (какой?) нейрулы цыпленка.

Обозначения: 1 – первичная бороздка; 2 – гензеновский узелок; 3 – головная складка; 4 – проамнион; 5 – нервная пластинка; 6 – нервные валики; 7 – нервный желобок; 8 – нервная трубка; 9 – передний невропор; 10 – задний невропор; 11 – мозгов(ой)ые пузыр(ь)и; 12 – хорда; 13 – сомиты; 14 – кровяные островки; 15– внезародышевое сосудистое сплетение; 16 – зачатки желточных вен, 17 – передние кишечные ворота; 18 – передняя кишка.

Примечание: для ранней нейрулы использовать обозначения 1–6, 12, 13,14.

Для средней нейрулы – 1-10, 12,13,14, 17, 18

Для поздней нейрулы – все кроме 5. Для каждого рисунка нумерацию создавать заново.