лекция4
.pdf
Модификация экспрессии генагена
Направленный мутагенез
Замещение гена и добавление гена
Антисмысловые нуклеотиды
Транспозоновый мутагенез
11
Замещение гена и добавлениее генагена
ГенХ
+ 
Мутантныйутантный генген ХХ
1. Замещение гена
Мутантный ген замещает ген дикого типа (бактерии, дрожжи)
Активен только мутантный ген |
2. Добавление гена |
|
||||||||
|
|
Ген Х |
|
ГенГен ХХ** |
|
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Инсерция мутантного гена в новое место (высшие эукариота)
Активны оба гена
12
Модификация экспрессии генагена
Направленный мутагенез
Замещение гена и добавление гена
Антисмысловые нуклеотиды
Транспозоновый мутагенез
13
Использование антисмысловыхвых нуклеотидов для выключения экспрессииспрессии гена
РНК |
ДНК |
14
Использование антисмысловойой РНКРНК для «выключения» генаа
Ген Х
Х неГ
Личинка мучногого хрущакахрущака
дикого типа (Triboliumribolium))
|
|
|
|
ТРАНСКРИПЦИЯ |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
мРНК |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Антисенс |
|
||
|
|
|
|
|
|
|
РНК |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Личинка, у которойрой блокированблокирован |
||
|
|
|
|
|
|
Дуплекс |
|
||
|
|
|
|
|
|
РНК |
|
ген Tc’DII, отвечающийающий |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
за развитие ног.. |
|
|
Блокирование трансляции |
|||||||
|
|
(Klinger et. al., CurrentCurrent Biology,Biology, 20032003)) |
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Использоваласьь |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
si (small-interfering)ing) RNARNA |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
15 |
Использование антисмысловойой ДНКДНК для «выключения» генаа
5’ |
…A T G G T G C T T C G A G A C G C C… 3’ |
Смысловой тяж ДНК |
3’ |
…T A C C A C G A A G C T C T G C G G…5’ |
Антисмысловой тяж ДНК |
Транскрипция антисмыслового тяжа
5’ …A U G G U G C U U C G A G A C G C C… 3’ |
мРНК (=sense) |
3’ T A C C A C G A A G C T C T G C G G 5’ |
Антисмысловой |
|
олигонуклеотид |
Трансляция блокирована
Белок
16
Использование антисмысловойой ДНКДНК для «выключения» генаа
Антисмысловой |
Контроль |
Контроль |
нуклеотид |
(буфер) |
(“sense” |
|
|
нуклеотид) |
37˚С |
37˚С |
37˚С |
Клетки не делятся 
ген Х необходим для делений
17
Использование антисмысловыховых нуклеотидов в фармакологиигии
Тестируются антисмысловые олигонуклеотиды в качестве лекарственных средств против:
1.Вируса СПИД (HIV-1, наиболее часто вызывает СПИД в СШАСША););
2.Цитомегаловируса (вызывает серьезные осложнения припри СПИДеСПИДе););
3.Астмы (у кроликов антисмысловые нуклеотиды вызываютвают уменьшение синтеза клеточных рецепторов, вовлеченныхых вв развитие астмы);
4.Некоторых типов рака (chronic myelogenic leukemia)
18
Модификация экспрессии генагена
Направленный мутагенез
Замещение гена и добавление гена
Антисмысловые нуклеотиды
Транспозоновый мутагенез
19
Транспозоновый мутагенез плазмидлазмид
Tn5 (5.7 kb)
IS KanR IS
1. Вектор-самоубийца,, содержащий транспозонон Tn5Tn5 сс геном KanR, вводят в клеткиклетки,, содержащие плазмидуу..
2. Клетки, у которыхых транспозонтранспозон внедрился в ДНК,, отбираютотбирают нана среде, содержащейей канамицинканамицин..
Tn5 перемещается |
|
Tn5 перемещается |
20 |
в хромосому |
|
в плазмиду |
|
|
|