6. Простые и сложные методы окраски микробов. Принципы окраски по Граму, Циль-Нильсену, Нейссеру. Романовскому -Гимза, их применение.

Методы окраски. Окраску мазка производят просты­ми или сложными методами. Простые за­ключаются в окраске препарата одним красителем; сложные методы (по Граму, Цилю — Нильсену и др.) включают последо­вательное использование нескольких красителей и имеют диффе­ренциально-диагностическое значение. Отношение микроорганиз­мов к красителям расценивают как тинкториальные свойства. Существуют специальные методы окраски, которые используют для выявления жгутиков, клеточной стенки, нуклеоида и разных цитоплазматических включений.

При простых методах мазок окрашивают каким-либо одним красителем, ис­пользуя красители анилинового ряда (основные или кис­лые). Если красящий ион (хромофор) — катион, то краситель обладает основными свойствами, если хромо­фор - анион, то краситель имеет кислые свойства. Кис­лые красители — эритрозин, кислый фуксин, эозин. Ос­новные красители — генциановый фиолетовый, кристал­лический фиолетовый, метиленовый синий, основной фуксин. Преимущественно для окраски микроорганизмов используют основные красители, которые более интенсивно связываются кислыми компонентами клетки. Из сухих красителей, продающихся в виде порошков, готовят на­сыщенные спиртовые растворы, а из них — водно-спирто­вые, которые и служат для окрашивания микробных кле­ток. Микроорганизмы окрашивают, наливая краситель на поверхность мазка на определенное время. Окраску основным фуксином ведут в течение 2 мин, метиленовым синим — 5—7 мин. Затем мазок промывают водой до тех пор, пока стекающие струи воды не станут бесцветными, высушивают осторожным промоканием фильтровальной бумагой и микроскопируют в иммерсионной системе. Ес­ли мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения совершенно прозрачно, а клетки интенсивно окрашены.

Сложные методы окраски применяют для изуче­ния структуры клетки и дифференциации микроорганиз­мов. Окрашенные мазки микроскопируют в иммерсион­ной системе. Последовательно нанести на препа­рат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты, кислоту и др.

Существуют несколько основных окрасок: по Граму, по Цилю-Нельсону, по Ауески, Нейссера, Бури-Гинса.

7. Этапы развития бактериологии. Принципы классификации бактерий. Понятие о виде. Культура. Штамм. Клон. 1.Эмпирических знаний  до изобретения микроскопов 2.Морфологический период занял около двухсот лет. Левенгук в 1675г. впервые описал простейших, в 1683г.- основные формы бактерий. 3.Физиологический период (с 1875г.)- эпоха Л.Пастера и Р.Коха. Л.Пастер- изучение микробиологических основ процессов брожения и гниения, развитие промышленной микробиологии, выяснение роли микроорганизмов в кругообороте веществ в природе, открытие анаэробных микроорганизмов, разработка принципов асептики, методов стерилизации, ослабления  вирулентности и получения вакцин (вакцинных штаммов). Р.Кох- метод выделения чистых культур на твердых питательных средах, способы окраски бактерий анилиновыми красителями, открытие возбудителей сибирской язвы, холеры. туберкулеза (палочки Коха), совершенствование техники микроскопии. 4.Иммунологический период. И.И.Мечников-  - учение о невосприимчивости (иммунитете), разработав теорию фагоцитоза и обосновав клеточную теорию иммунитета. Одновременно накапливались данные о выработке в организме антител против бактерий и их токсинов, позволившие П.Эрлиху разработать гуморальную теорию иммунитета. И.И.Мечникову и П.Эрлиху в 1908г. была присуждена Нобелевская премия. В  1892г. Д.И.Ивановский сообщил, что возбудителем мозаичной болезни табака является фильтрующийся вирус. Эту дату можно считать днем рождения вирусологии, а Д.И.Ивановского - ее основоположником. 5. Следующим важным этапом в развитии микробиологии стало открытие антибиотиков. В 1929г. А.Флеминг открыл пенициллин и началась эра антибиотикотерапии, приведшая к революционному прогрессу медицины. 6. Современный молекулярно- генетический этап развития микробиологии, вирусологии и иммунологии начался во второй половине 20 века в связи с достижениями генетики и молекулярной биологии, созданием электронного микроскопа. Объектами изучения микробиологии являются представители трех «царств» — Procariotae, к которому относятся бактерии, Eucariotae, включающего грибы (Mycota) и простейших (Pro­tozoa), и Vira, объединяющего вирусы.

Общий признак всех микроорганизмов — очень мелкие размеры. Они невидимы простым глазом и обнаруживаются при помощи микроскопа.

Величину бактерий измеряют в микрометрах (1 мм = 1000 мкм), а размеры органелл микроорганизмов выражают в нанометрах (1 мкм = 1000 нм). При электронной микро­скопии используют еще более мелкие единицы — ангстре­мы (1 мм = 10 000 000 А).

Систематика и классификация микроорганизмов с целью распределения их по группам — таксонам проводится с учетом совокупности признаков и свойств: морфологических, тинкториальных (способности окрашиваться красителями), культуральных, физиолого-биохимических, антигенных, организа¬ции генома. Дифференциальными признаками служат также подвижность, спорообразование, чувствительность к бактериофагам и др. Клон — потомство клеток микроорганизмов, полученных из одной клетки или одной споры. Это генетически идентичные и фенотипически однородные культуры. Клоны можно выде¬лить путем культивирования изолированной клетки или споры на питательной среде. При этом обычно используют несе-лективные среды и проводят на них многократные пересевы клонируемых культур. Чистая культура — это совокупность микроорганизмов од¬ного вида или варианта, полученная из одной изолированной колонии. Штамм — чистая культура, выделенная из определенного источника (организма человека, животных, окружающей среды).