5. Световой микроскоп, его устройство, разрешающая сила и работа с ним в микробиологической лаборатории. Изучение микробов в световом, люминесцентном и других микроскопах.

Бактериоскопичесшй (микроскопический). С помощью микроскопа в специально приготовленных препаратах изуча­ют форму, структуру, размер, подвижность, тинкториальные свойства. Используются различные типы микроскопов — све­товой, фазово-контрастный, темнопольный, люминесцентный и электронный.

Под разрешающей способностью объектива микроскопа (d) понимают тот наименьший диаметр частицы, которую можно увидеть в микроскоп. У светового 200-300 нм.

С помощью простых луп можно получить увеличение не более чем в 25 раз. Есть способ достигнуть больших увеличений: нужно установить две увеличивающие линзы на определенном расстоянии друг от друга. Тогда первая линза (обращенный к объекту исследования объектив) создаст увеличенное изображение, которое будет еще раз увеличено второй линзой (окуляром ), то есть общее увеличение станет результатом сложения отдельных увеличений. И именно такое, состоящее из нескольких линз, устройство сегодня мы называем микроскопом. Для того чтобы на линзы не попадал снаружи излишний свет и выдерживалось точное расстояние между ними, линзы помещаются в трубу — тубус.

В современных микроскопах окуляр и объектив представляют собой системы линз.

Главная роль принадлежит объективу: если он плохого качества, то окуляр не улучшает изображение, а увеличивает его дефекты. Высококачественные объективы состоят более чем из дюжины точно отшлифованных линз и стоят порядка нескольких тысяч рублей.

Разумеется, важно хорошее освещение. Поэтому в микроскопы встраиваются специальные приборы — светосильные лампы накаливания, а также системы линз, которые концентрируют свет на объекте наблюдения и в зависимости от увеличения позволяют установить оптимальную яркость.

Для световой микроскопии биологические объекты обычно окрашивают с целью выявления тех или иных их свойств (рис. 1). При этом ткани должны быть фиксированы, т.к. окраска выявляет определенные структуры только убитых клеток. В живой клетке краситель обособляется в цитоплазме в виде вакуоли и не прокрашивает ее структуры. Однако в световом микроскопе можно изучать и живые биологические объекты с помощью метода витальной микроскопии. В этом случае применяют темнопольный конденсор, который встраивают в микроскоп.

Для исследования живых и неокрашенных биологических объектов используют также фазово-контрастную микроскопию.

Широкое распространение имеет люминесцентная микроскопия. Она основана на свойстве некоторых веществ давать свечение — люминесценцию в УФ-лучах или в сине-фиолетовой части спектра. Многие биологические вещества, такие как простые белки, коферменты, некоторые витамины и лекарственные средства, обладают собственной (первичной) люминесценцией. Другие вещества начинают светиться только при добавлении к ним специальных красителей — флюорохромов (вторичная люминесценция). Флюорохромы могут распределяться в клетке диффузно либо избирательно окрашивают отдельные клеточные структуры или определенные химические соединения биологического объекта.