1. Отбор проб для получения накопительных культур и первичный анализ выделенных микроорганизмов

Источником для получения бактериальных культур, родовую и видовую принадлежность которых необходимо определить, могут служить почва, воздух, вода, пищевые продукты, надземные и подземные части растений, а также различные тканевые жидкости животных и человека, отделяемое ран, слизистой оболочки и т.д.

Взятие образцов почвы может осуществляться в различных почвенных горизонтах (на глубине 10 и более сантиметров). Отбор проводят в стерильные колбы стерильными шпателями (колбы могут быть заменены стерильными пробирками). В том случае, если анализ взятых проб проводится не сразу, допустимо хранение образцов в высушенном состоянии. Из образцов удаляют кусочки щебня, мелкие камешки, механические частицы и кусочки корней. Примерно 10 г образца переносят в стерильную чашку Петри. Навеску увлажняют, тщательно растирают и переносят в колбу с 90 мл стерильной воды. Образец в течение 10 мин интенсивно встряхивают и, при необходимости, готовят серию разведений почвенной суспензии в стерильной воде. Высев почвенной суспензии проводят по методу Коха (с помощью шпателя на 3 чашки Петри с полноценным агаром). Чашки инкубируют при 28-37 ⁰С в течение 2-5 дней.

После соответствующего времени инкубирования, чашки просматривают и отбирают для дальнейшего анализа несколько морфологически различающихся типов колоний. При этом в протоколе указывается общее количество типов колоний, их морфологические особенности и количественное соотношение.

Анализ микрофлоры воздуха. Содержащиеся в воздухе микроорганизмы можно выделить, используя предложенный Кохом метод осаждения на плотных питательных средах. С этой целью используют чашки Петри с предварительно разлитым в них агаром, помещают на горизонтальную поверхность в различных помещениях и открывают крышки на 15-30 мин. Затем чашки закрывают и помещают в термостат на 2-5 дней при температуре 28 – 37 ⁰С. После соответствующего времени инкубирования, проводят описание выросших колоний. Для последующего анализа отбирают несколько морфологически различающихся колоний. Отмечают общее количество типов колоний, их морфологические особенности и количественное соотношение.

Используя данный метод можно рассчитать количество микроорганизмов в 1 м³ воздуха. При расчете допускают, что на площадь в 100 см² за 5 мин осаждается примерно столько бактерий, сколько их содержится в 10 л воздуха (0,01 м³). Зная площадь чашки Петри, определяют количество бактерий в 1 м³ воздуха.

Анализ микрофлоры воды. Отбор воды для исследования (водопроводной или из открытых водоемов), осуществляется в стерильные колбочки или пробирки в объеме 5-10 мл. При необходимости (если водоем является сильно загрязненным), проводят разведения исследуемого образца. Водопроводную воду можно исследовать без разведений. Посев проводится по методу Коха, анализ выросших колоний - как в описанных выше случаях.

В некоторых случаях можно воспользоваться методом глубинного посева. Для этого в стерильную чашку Петри вносят 1 мл исследуемого образца, а затем вливают 15-20 мл расплавленного и охлажденного до 45⁰ С питательного агара. Чашки инкубируют и проверяют наличие роста. Подсчитав выросшие колонии можно сделать вывод о микробном числе – общем количестве аэробных сапрофитов. Вода, содержащая более 100 клеток в 1 мл, считается непригодной к употреблению.

Выделение микрофлоры кожи рук. К поверхности питательной среды прикоснуться поверхностью пальцев или ладонью. Чашку поставить для инкубирования и через 1-2 суток провести анализ выросших колоний, как описано выше.