Белорусский государственный университет

Биологический факультет

Кафедра микробиологии

ВЫДЕЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ

МИКРООРГАНИЗМОВ

Учебно-методическое пособие

для студентов специальности G31 01 01 «Биология»

специализация – G31 01 01-02 06 «Микробиология»

Минск

2003

Автор-составитель:

Р.А.Желдакова

Р е ц е н з е н т

доктор биологических наук,

зав. кафедрой молекулярной биологии

Евтушенков А.Н.

ВЫДЕЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ: Учеб.-метод. Пособие / Сост Р.А.Желдакова. – Мн.: БГУ, 2003 – 36 с.

Данное пособие рассчитано на студентов 3-5 курсов биологического факультета, специализирующихся по кафедре микробиологии. В пособии приведены основные методы выделения и принципы идентификации микроорганизмов. Подробно описаны составы и условия приготовления питательных сред, постановки основных биологических тестов для идентификации. Пособие предназначено для самостоятельной работы студентов в рамках раздела специального практикума, а также при подготовке курсовых и дипломных работ.

Введение

Выполнение задач данного раздела специального практикума включает:

1) выделение чистых культур микроорганизмов из накопительных культур, полученных из различных образцов и источников (почва, вода, воздух и т.д.);

2) определение, описание и анализ основных свойств (морфологических, физиолого-биохимических, биологических) 4-6 выделенных в чистую культуру видов бактерий;

3) идентификация на основании полученных данных выделенных культур (по крайней мере, до рода);

4) подготовка выделенных культур для хранения под слоем вазелинового масла и введение в коллекцию;

5) использование выделенных культур при выполнении задач по спецкурсу «Механизмы биосинтеза антибиотиков и их действие на бактериальную клетку» и других.

Успешное решение поставленных задач, во-первых, закрепит навыки работы с микроорганизмами (получение накопительной и чистой культуры, окраска различных структур бактериальной клетки, приготовление питательных сред, постановка дифференцирующих тестов и т.п.);

во-вторых, позволит выбрать из всего многообразия различных тестов те необходимые и достаточные, которые обеспечат желаемый результат (т.е. позволят идентифицировать выделенную культуру);

в-третьих, научит пользоваться имеющимися определителями бактерий и сделать выбор и увидеть разницу между классификацией и идентификацией бактерий. Идентификация – это сравнение неизвестных организмов с уже классифицированными с целью установления их идентичности; классификация же – это распределение по группам бактерий со сходными характеристиками.

Помимо общей характеристики выделяемых из природных источников культур микроорганизмов (по предлагаемым схемам), в задачу данного раздела практикума входит также и выделение отдельных специализированных физиологических групп бактерий из различных источников при создании и использовании элективных условий. Основными справочными пособиями для идентификации микроорганизмов будут служить «Краткий определитель бактерий Берги» (1980), «Определитель бактерий Берджи» (1997), а также ряд практических руководств. Именно они используются для выбора необходимых тестов, описания техники их постановки и интерпретации полученных результатов, т.е. отнесения данного микроорганизма к той или иной группе. Техника постановки ряда различных тестов приведена в данных методических указаниях.

Общие правила идентификации бактерий изложены в 8-ом издании определителя бактерий Берджи (1997), а практические шаги должны быть следующими:

1. Удостоверьтесь, что Вы имеете чистую культуру.

2. На каждом этапе работы руководствуйтесь здравым смыслом.

3. Используйте для идентификации минимальное количество тестов.

4. Сравните выделенный вами организм с типовым штаммом.

5. На основании процедуры выделения установите, что Вы имеете дело с хемолитотрофным автоторофом, фотосинтезирующим организмом или хемогетеротофом.

6. Исследуйте живые клетки с помощью фазового контраста, а клетки, окрашенные по Граму - с помощью светового микроскопа. Применяйте другие методы окраски, если это представляется уместным. Обратите внимание на форму и взаимное расположение клеток. Если бросаются в глаза определенные морфологические особенности, такие как образование эндоспор или наличие прикрепительных дисков, ограничьте ваши дальнейшие усилия идентификацией групп, обладающих этими особенностями.

7. Используйте общий вид культур для определения наличия пигмента или других уникальных признаков.

8. Испытайте потребность в кислороде (аэроб, микроаэрофил, факультативный анаэроб, анаэроб).

9. Весьма важными являются три физиологических теста: на наличие оксидазы, каталазы и способности к окислительному или ферментативному катаболизму углеводов.

10. Завершите работу постановкой других дополнительных тестов, отобранных при беглом просмотре признаков группы родов, к которой Вы отнесли организм на основании тестов, указанных выше.

При этом следует помнить, что постановку тестов следует проводить не менее чем в двукратной повторности, а также обязательной является постановка заведомо положительного и заведомо отрицательного контроля.

Если вам не удалось идентифицировать выделенный микроорганизм, то проверьте: а) его чистоту, б) правильность выбора и соответствие использованных тестов, в) адекватность методов, и г) правильность использования ключей и таблиц руководства.