- •1. Определение активности препарата биологическими методами
- •2. Общие принципы расчетов
- •Объединение результатов двух и более биологических испытаний одного и того же препарата проводят согласно разделу 5 «Объединение результатов независимых определений биологической активности».
- •3. Биологические испытания, основанные на количественном ответе
- •3.1. Обработка результатов двухдозовой рандомизированной постановки (биологическая активность гонадотропина хорионического)
- •3.2. Обработка результатов трехдозовой рандомизированной постановки (биологическая активность гонадотропина хорионического)
- •3.3. Обработка результатов двухдозовой постановки методом случайных блоков (биологическая активность окситоцина на петушке)
- •3.4. Обработка результатов двухдозовой постановки методом латинского квадрата (биологическая активность окситоцина на изолированном органе)
- •3.5. Обработка результатов трехдозовой постановки методом латинского квадрата (биологическая активность антибиотиков методом диффузии в агар в чашках Петри)
- •3.6. Обработка результатов двойного перекреста (биологическая активность инсулина методом а и в)
- •Таким образом, биологическая активность испытуемого препарата равна 40,1 ед/мл. Ее доверительные границы составляют 101,5240–101,6830, т. Е. 33,4–48,2 ед/мл.
- •3.7. Статистическая обработка результатов испытания на гистамин
- •Испытуемый препарат u
- •4. Биологические испытания, основанные на альтернативном ответе
- •4.1. Оценка и сравнение пороговых доз при их прямом определении
- •4.1.1. Обработка результатов оценки активности испытуемого препарата по сравнению со стандартным образцом на кошках
- •Определение биологической активности сердечных гликозидов на кошках по сравнению со стандартным образцом (пример 5)
- •4.2. Оценка биологической активности испытуемого препарата при косвенном определении эффективных доз (оценка еd50)
- •4.2.1. Определение средней смертельной дозы (лд50)
- •Учет результатов опыта (яд гюрзы)
- •4.3. Сравнение лд50 двух испытуемых препаратов
- •Перевод процентов в пробиты и перевод пробитов в весовые коэффициенты w см. Таблицу V и VIII в приложениях.
- •Таким образом, биологическая активность испытуемого препарата равна 40,2 ед/мл. Ее доверительные границы составляют 101,4716–101,7377, т. Е. 29,6–54,7 ед/мл.
- •4.5. Качественное сравнение испытуемых препаратов
- •5. Объединение результатов независимых определений биологической активности
- •Приложения
- •Критические значения контрольного критерия q (р, n)
- •Критические значения критерия Фишера
3.2. Обработка результатов трехдозовой рандомизированной постановки (биологическая активность гонадотропина хорионического)
Если в качестве тест-объекта используют крыс-самок, то в качестве ответа животного принимают отношение массы матки в мг к массе тела в г. В случае использования самцов, ответ животного представляет собой отношение массы добавочных половых желез в мг к массе тела в г. Схема расчетов при этом абсолютно одинакова. В таблице 14.2.3.4 даны ответы крыс-самок на введение трех доз стандарта и трех доз испытуемого препарата.
Таблица 14.2.3.4
Ответы y
Группа 1 |
Группа 2 |
Группа 3 |
Группа 4 |
Группа 5 |
Группа 6 |
|
|
|
|
|
|
0,398 |
1,583 |
2,233 |
0,533 |
1,655 |
3,447 |
0,443 |
0,780 |
2,129 |
0,663 |
0,935 |
3,123 |
0,483 |
2,380 |
2,872 |
0,434 |
1,973 |
3,354 |
0,623 |
0,984 |
2,732 |
0,71 |
2,199 |
1,769 |
0,462 |
1,265 |
3,043 |
0,637 |
0,886 |
4,382 |
0,619 |
1,568 |
2,717 |
0,47 |
1,097 |
3,525 |
0,436 |
1,167 |
2,939 |
0,65 |
2,447 |
3,331 |
0,495 |
1,743 |
1,785 |
0,600 |
1,941 |
3,995 |
0,568 |
1,375 |
3,474 |
0,820 |
1,151 |
2,977 |
0,593 |
1,375 |
3,120 |
0,512 |
2,804 |
2,556 |
Таблица 14.2.3.5
Суммы ответов и контрасты
|
Стандартный образец S |
Испытуемый препарат U |
Сумма |
Малая доза |
S1 = 5,12 |
U1 = 6,03 |
|
Средняя доза |
S2 = 14,22 |
U2 = 17,09 |
|
Большая доза |
S3 = 27,04 |
U3 = 32,46 |
|
Сумма |
S = 46,38 |
U = 55,58 |
|
Линейный контраст |
LS = S3 – S1= 21,92 |
LU = U3 – U1 = 26,43 |
|
Квадратический контраст |
|
|
|
Для того чтобы проверить правильность проведенного опыта и вычислить его дисперсию, проводят дисперсионный анализ полученных данных. При этом рассчитывают значения дисперсий для 8 источников дисперсии (см. сводную таблицу 14.2.3.6).
Для этого на основании данных, представленных в таблице 14.2.3.4 и 14.2.3.5, а также поправочного коэффициента, вычисляют суммы квадратов источников дисперсии.
Поправочный коэффициент ;
;
;
;
;
;
;
;
.
Таблица 14.2.3.6
Сводная таблица дисперсионного анализа (трехдозовая рандомизированная постановка)
Источник дисперсии (показатель) |
Число степеней свободы (f) |
Сумма квадратов |
Средний квадрат |
Наблю-даемое значение критерия Фишера Fнабл. |
Критиче- ское значение критерия Фишера Fкритич. |
|
Препараты |
1 |
1,41 |
1,41 |
|
|
|
Регрессия |
1 |
58,44 |
58,44 |
243,5 |
>7,13 (P=99 %) |
|
Параллельность |
1 |
0,51 |
0,51 |
2,13 |
<4,02 (P=95 %) |
|
Квадратичность |
1 |
0,54 |
0,54 |
2,25 |
<4,02 (P=95 %) |
|
Разность квадратичностей |
1 |
0,0002 |
0,0002 |
0,0008 |
<4,02 (P=95 %) |
|
Обработки |
|
60,9 |
12,18 |
|
|
|
Отклонение |
|
13,14 |
0,24 |
|
|
|
Итог |
|
74,04 |
|
|
|
n = 10 (число ответов в группе);
N = 60 (общее число ответов в опыте);
m = 0 (число утраченных и замененных значений).
Значимость различий дисперсий проверяют с помощью критерия Фишера. Обязательным является выполнение требований для показателей «Регрессия», «Параллельность», «Квадратичность» и «Разность квадратичностей». Для «Регрессии» наблюдаемое значение критерия Фишера должно быть больше критического (P = 99 %), а для остальных показателей – меньше критического (P = 95 %).
Для того чтобы найти Fнабл. средние квадраты показателей делят на средний квадрат показателя «Отклонение». Полученные результаты сравнивают с табличными критическими значениями критерия Фишера (приложения, таблица III). Число степеней свободы f1 = 1, а f2 = 54.
Дисперсионный анализ показал правильность результатов опыта: статистическую значимость дозозависимости («Регрессия»), параллельность и линейность двух линий регрессии («Параллельность», «Квадратичность» и «Разность квадратичностей»).
Вычисление биологической активности и ее доверительных границ
Соотношение доз равно 2, следовательно ;
,
при f = 54 и P = 95 %;
Логарифмические доверительные границы биологической активности испытуемого препарата вычисляют по формуле:
.
Логарифмические доверительные границы биологической активности испытуемого препарата составляют 0,0114 и 0,1411. Нижняя и верхняя доверительная граница составляет и , т. е. 1026,6 ЕД/фл. и 1383,9 ЕД/фл. соответственно.