- •1. Определение активности препарата биологическими методами
- •2. Общие принципы расчетов
- •Объединение результатов двух и более биологических испытаний одного и того же препарата проводят согласно разделу 5 «Объединение результатов независимых определений биологической активности».
- •3. Биологические испытания, основанные на количественном ответе
- •3.1. Обработка результатов двухдозовой рандомизированной постановки (биологическая активность гонадотропина хорионического)
- •3.2. Обработка результатов трехдозовой рандомизированной постановки (биологическая активность гонадотропина хорионического)
- •3.3. Обработка результатов двухдозовой постановки методом случайных блоков (биологическая активность окситоцина на петушке)
- •3.4. Обработка результатов двухдозовой постановки методом латинского квадрата (биологическая активность окситоцина на изолированном органе)
- •3.5. Обработка результатов трехдозовой постановки методом латинского квадрата (биологическая активность антибиотиков методом диффузии в агар в чашках Петри)
- •3.6. Обработка результатов двойного перекреста (биологическая активность инсулина методом а и в)
- •Таким образом, биологическая активность испытуемого препарата равна 40,1 ед/мл. Ее доверительные границы составляют 101,5240–101,6830, т. Е. 33,4–48,2 ед/мл.
- •3.7. Статистическая обработка результатов испытания на гистамин
- •Испытуемый препарат u
- •4. Биологические испытания, основанные на альтернативном ответе
- •4.1. Оценка и сравнение пороговых доз при их прямом определении
- •4.1.1. Обработка результатов оценки активности испытуемого препарата по сравнению со стандартным образцом на кошках
- •Определение биологической активности сердечных гликозидов на кошках по сравнению со стандартным образцом (пример 5)
- •4.2. Оценка биологической активности испытуемого препарата при косвенном определении эффективных доз (оценка еd50)
- •4.2.1. Определение средней смертельной дозы (лд50)
- •Учет результатов опыта (яд гюрзы)
- •4.3. Сравнение лд50 двух испытуемых препаратов
- •Перевод процентов в пробиты и перевод пробитов в весовые коэффициенты w см. Таблицу V и VIII в приложениях.
- •Таким образом, биологическая активность испытуемого препарата равна 40,2 ед/мл. Ее доверительные границы составляют 101,4716–101,7377, т. Е. 29,6–54,7 ед/мл.
- •4.5. Качественное сравнение испытуемых препаратов
- •5. Объединение результатов независимых определений биологической активности
- •Приложения
- •Критические значения контрольного критерия q (р, n)
- •Критические значения критерия Фишера
Перевод процентов в пробиты и перевод пробитов в весовые коэффициенты w см. Таблицу V и VIII в приложениях.
Таблица 14.2.4.5
Пробиты, суммы ответов и контрасты
|
Стандартный образец S |
Испытуемый препарат U |
Сумма |
||
|
s1 |
s2 |
u1 |
u2 |
|
Пробит |
4,57 |
6,16 |
4,79 |
5,96 |
|
Весовой коэффициент W |
0,595 |
0,384 |
0,626 |
0,452 |
|
Сумма ответов |
10,73 |
|
10,75 |
|
21,48 |
Линейный контраст |
1,59 |
|
1,17 |
|
2,76 |
Для того чтобы проверить правильность проведенного опыта и вычислить его дисперсию, проводят дисперсионный анализ полученных данных. При этом рассчитывают значения дисперсий для 4 источников дисперсий («Препараты», «Регрессия», «Параллельность» и «Отклонение»).
Для этого на основании данных, представленных в таблице 14.2.4.4 и 14.2.4.5, а также поправочного коэффициента, вычисляют суммы квадратов источников дисперсии.
Поправочный коэффициент ;
;
;
;
.
Затем вычисляют средние квадраты (дисперсии):
Таблица 14.2.4.6
Сводная таблица дисперсионного анализа (упрощенный пробит-метод)
Источник дисперсии |
Число степеней свободы (f) |
Сумма квадратов |
Средний квадрат |
Наблю- даемое значе- ние кри- терия Фишера
Fнабл. |
Кри-тиче-ское значе-ние кри- терия Фи-шера Fкритич. |
|
Препараты |
1 |
0,0001 |
0,0001 |
|
|
|
Регрессия |
1 |
1,9044 = E |
1,9044 |
23,5041 |
>6,63 |
(P=99 %) |
Параллельность |
1 |
0,0441 |
0,0441 |
0,544282 |
<3,84 |
(P=95 %) |
Отклонение (дисперсия опыта) |
|
|
0,0810241 |
|
|
|
Значимость различий дисперсий проверяют с помощью критерия Фишера. Обязательным является выполнение требований для источников дисперсии «Регрессия» и «Параллельность». «Регрессия» характеризует дозозависимость, а «Параллельность» – параллельность линий дозозависимости стандартного образца и испытуемого препарата. Для «Регрессии» наблюдаемое (фактическое) значение критерия Фишера должно быть больше критического (P = 99 %), а для показателя «Параллельность» – меньше критического (P = 95 %).
Для того чтобы найти Fнабл. средние квадраты источников дисперсии «Регрессия» и «Параллельность» делят на «Отклонение». Полученные результаты сравнивают с табличными критическими значениями критерия Фишера (приложения, таблица III). Число степеней свободы f1 = 1, а f2 = .
Вычисление биологической активности и ее доверительных границ
Биологическая активность
,
t = 1,96 (f = , P = 95 %);
Коэффициент регрессии ;
Средний ответ на стандартный образец ;
Средний ответ на испытуемый препарат ;
Доверительные границы
.
Логарифмические доверительные границы биологической активности испытуемого препарата вычисляют по формуле:
.
Логарифмические доверительные границы биологической активности испытуемого препарата составляют 1,4716 и 1,7377.