3 курс / Фармакология / Синтез_и_изучение_свойств_новых_материалов_с_противоопухолевой

101

Рис. 3.51. Концентрационная зависимость степени фотогемолиза в присутствии

GO-1.57. С — молярная концентрация GO-1.57 в пересчёте на содержание соединения 1.57, Т50GO-1.57 — время фотоиндуцированного гемолиза 50 % в присутствии GO-1.57, T50контроль — время фотоиндуцированного гемолиза 50 %

эритроцитов в присутствии физиологического раствора.

3.8.1.3. Плазмо-коагуляционный гемостаз

Как видно из представленных данных (Табл. 3.18), GO-1.57 в исследованном диапазоне концентраций достоверно увеличивает АПТВ по сравнению с контролем.

Индивидуальное соединение 1.57 в диапазоне концентраций 5–200 мкМ также проявляло антикоагулянтные свойства, статистически значимо увеличивало время АПТВ по сравнению с контролем [116]. В свою очередь было показано, что конъюгат GO-1.57 незначительно снижал ПВ. Таким образом, антикоагулянтные свойства конъюгата GO-1.57 сопоставимы с индивидуальным соединением 1.57

[116].

Табл. 3.18. Влияние GO-1.57 на показатели плазмо-коагуляционного гемостаза.

*p < 0,05.

102

3.8.1.4. Агрегация тромбоцитов

Как видно из данных, представленных в Табл. 3.19, в тестах АДФ-

индуцированной агрегации тромбоцитов в присутствии конъюгата GO-1.57 в

диапазоне концентраций 5–100 мг∙л−1 наблюдается статистически значимое дозозависимое снижение агрегации тромбоцитов по сравнению контролем.

Табл. 3.19 Влияние конъюгата GO-1.57 на АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов.

*p < 0,05.

3.8.2. Антиоксидантная активность

3.8.2.1. Антирадикальная активность

На Рис. 3.52 представлен график зависимости доли восстановленных радикалов ДФПГ (% ингибирования) от концентрации конъюгата GO-1.57. Можно сделать вывод, что антирадикальная активность GO-1.57 возрастает с увеличением концентрации (C = 0,25–25,0 мг·л−1). Так как доля восстановленных радикалов составляет менее 50 %, рассчитать IC50 не представляется возможным. Также следует отметить, что GO-1.57 проявляет более выраженную антирадикальную активность по сравнению с GO, что в свою очередь связано с функционализацией поверхности GO. Из данных, представленных в разделе 3.5.3.1 следует, что соединение 1.57 активно реагирует с ДФПГ (k = (2,43 ± 0,06)·10−3 мин−1 при 303,15

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Рис. 3.53. Кинетическая зависимость фотодеградации Радахлорина (■) в

присутствии GO-1.57 (▲ 10 мг∙л−1, ▼ 25 мг∙л−1, 50 мг∙л−1, ● 75 мг∙л−1) по сравнению с азидом натрия (◄ 500 мкМ). A0 и At — оптические плотности растворов Радахлорина при длине волны 663,9 нм до и после облучения.

В Табл. 3.20 приведены значения kdeg для процесса фотодеградации Радахлорина в присутствии GO-1.57 и азида натрия. Представленные значения kdeg

свидетельствуют о том, что в присутствии GO-1.57 наблюдается уменьшение kdeg

Радахлорина, что свидетельствует об антиоксидантных свойствах конъюгата GO-

1.57.

Табл. 3.20. Константы фотодеградации (kdeg) Радахлорина в присутствии GO-1.57 и

азида натрия. С — концентрация в пересчёте на содержание соединения 1.57.

—— 0,0123 ± 0,0017 10 0,0124 ± 0,0015

3.8.2.3. Связывание NO-радикалов

Из данных, представленных на Рис. 3.54 видно, что конъюгат GO-1.57

поглощает NO-радикалы, хотя и в меньшей степени, чем азид натрия и индивидуальное соединение 1.57 (Раздел 3.5.3.4) [116]. Следовательно,

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

(ж)

Рис. 3.55. ДНК-кометы после электрофореза клеток в микрогеле: (а) —

положительный контроль (H2O2), (б) — отрицательный контроль (PBS), (в–ж) —

GO-1.57 (в молярных концентрациях в пересчёте на соединение 1.57, C = 10, 25,

50, 75 и 100 мкМ).

3.8.4. Изучение термодинамических параметров связывания GO-1.57 с ЧСА калориметрическим методом

Термические эффекты, наблюдаемые в процессе титрования ЧСА водными дисперсиями GO-1.57 (C = 5·10−3 М в пересчёте на содержание вещества 1.57) (Рис. 3.56), представляют собой теплоты смешения титранта и титруемого вещества.

Аналогичный результат был получен при титровании ЧСА соединением 1.57.

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

108

Можно сделать вывод, что отсутствие связывания как соединения 1.57, так и его конъюгата GO-1.57 с ЧСА свидетельствует о том, что ЧСА не будет выполнять транспортную функцию в кровотоке [117].

Рис. 3.56. Зависимость теплового эффекта реакции взаимодействия конъюгата GO-

1.57с ЧСА от времени при 298,15 К.

3.8.5.Цитотоксичность конъюгата GO-1.57

Анализ полученных данных по цитотоксичности GO-1.57 показывает дозозависимое снижение выживаемости клеток линий A549 (Рис. 3.57а), PANC-1

(Рис. 3.57б) и HeLa (Рис. 3.57в). Из представленных данных следует, что максимальная цитотоксичность GO-1.57 была достигнута на клеточной линии HeLa

при IC50 = 2,5 мкМ. Данный эффект сопоставим с доксорубицином (IC50 = 1,5 мкМ)

и более чем в 4,5 раза превосходит цитотоксическое действие индивидуального соединения 1.57 (IC50 = 11,8 мкМ) [116,117]. Важно отметить, что GO-1.57 обладает значительно меньшей цитотоксичностью в отношении клеточной линии HEK 293 по сравнению с доксорубицином, а также по сравнению с соединением 1.57 (более, чем в 1,5 раза).

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Рис. 3.57. Влияние GO-1.57 на выживаемость клеток опухоли шейки матки HeLa

(a), влияние GO-1.57 на выживаемость клеток опухолевой линии альвеолярной аденокарциномы человека A549 (б), влияние GO-1.57 на выживаемость клеток опухолевой линии рака поджелудочной железы человека PANC-1 (в).

3.8.6. Изучение механизмов эндоцитоза конъюгата GO-1.57

Механизмы эндоцитоза изучались в присутствии следующих ингибиторов:

CK-636 (ингибитор актин-зависимого эндоцитоза), нистатин (ингибитор кавеолин-

зависимого эндоцитоза), диносор (ингибитор динамин-зависимого эндоцитоза),

хлорпромазин (ингибитор клатрин-зависимого эндоцитоза), амилорид (ингибитор пиноцитоза). Ингибиторы эндоцитоза использовались в концентрации C = 10 мкM.

110

Данные по цитотоксичности в присутствие ингибиторов сравнивались с контролем в отсутствие ингибиторов.

Анализ полученных данных показывает, что в присутствии ингибитора эндоцитоза амилорида увеличивается выживаемость клеток линии HeLa при добавлении конъюгата GO-1.57 (Рис. 3.58). Также выживаемость клеток линии HeLa

увеличивается в присутствии хлорпромазина. Следовательно, транспорт конъюгата

GO-1.57 в клетки возможен по двум механизмам: пиноцитоз и клатрин-зависимый эндоцитоз.

Рис. 3.58. Влияние ингибиторов эндоцитоза на выживаемость клеточной линии HeLa в присутствии конъюгата GO-1.57 (C = 2,5 мкМ в пересчёте на индивидуальный цитостатик).

Так, синтезированный конъюгат являются гемосовместимым, имеет потенциал применения в фотодинамической терапии, и обладает клеточно-

специфической цитотоксичностью, следовательно, GO может быть эффективно использован для разработки системы адресной доставки соединения 1.57 к

опухолевым мишеням [117].

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/