РЕЦЕПТОР-ОПОСРЕДОВАННЫЙ ЭНДОЦИТОЗ
|
Насос, выбрасывающий |
1. |
антибиотики и цитостатики |
через систему MDR 1 |
Антибиотики и цитостатики
- Новые лекарственные препараты
-Новые вакцины
(в контексте биобезопасности)
2. Лиганд 
Цитостатик 
Рецептор
Эндоцитоз
Мембрана
Клатриновая оболочка Эндосома
АТР АDP |
|
Pi |
Разрушение эндосомы, |
|
|
|
выход цитотоксического |
МНТЦ |
вещества |
|
|
Ин-т иммунологии Федерального управления |
|
медико-биологических и экстремальных проблем при Минздраве России
РАЗРАБОТКА НОВЫХ ПРИНЦИПОВ НАПРАВЛЕННОГО ТРАНСПОРТА ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ В ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ РЕЦЕПТОР-ОПОСРЕДОВАННОГО ЭНДОЦИТОЗА
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Скорость эндоцитоза |
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
(fmole/106 |
клеток/ час) |
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||
|
|
C |
|
|
|
|
|
|
B-цепь |
|
|
|
|
N |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
A-цепь |
|
|
|
|
|
|
|
NGF (Mr 26,5 kDa, димер) |
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
C |
|
|
|
|
|
|
|
0,3 |
|
|
|
|||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Bueker (1948) |
|
|
|
|
|
||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Levi-Montalcini (1951,1952) |
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
C-пептид |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
70 |
|
|
|
||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
Белковые |
|
|
|
N |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
EGF |
(M |
|
6 kDa) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
факторы |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
r |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
роста |
|
|
|
C |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Cohen (1962) |
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
N |
|
AFP |
(M |
r |
74 kDa) |
|
|
|
200 |
|
|
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Татаринов (1965) |
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
I |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Абелев (1971) |
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
II |
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Гликозид |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Tранспортный домен
C 
III
Создание препаратов направленного действия
ИНТЕНСИВНОСТЬ ОКРАШИВАНИЯ РАЗЛИЧНЫХ ТКАНЕЙ ЧЕЛОВЕКА МОНОКЛОНАЛЬНЫМИ АНТИТЕЛАМИ К РЕЦЕПТОРУ АФП
Этапы исследования:
1. Выделение рецептора АФП
2. Получение панели моноклональных антител к рецептору АФП 
3. Отработка метода окрашивания тканей человека моноклональными антителами
Тип опухоли |
Тип ткани и опухоли |
Интенсивность |
|
|
окрашивания |
|
|
|
Нормальные |
Здоровый яичник |
0 |
ткани |
Нормальная печень вне зоны опухоли |
0 |
|
Нормальный лимфоузел легкого |
0 |
|
|
|
Доброкачествен- |
Доброкачественный карциноид легкого |
0 |
ные опухоли |
Серозная сосочковая цистоаденома яичника |
0 |
|
|
|
Злокачествен- |
Рак желудка |
++++ |
ные |
Рак молочной железы |
++++ |
опухоли |
Рак толстой кишки |
++ |
|
Рак легкого |
+++ |
|
Рак печени (Гепатоцеллюлярный) |
+++ |
|
Рак печени (Холангиоцеллюлярный) |
+++ |
|
Рак яичника |
++ |
|
|
|
ЭКСПРЕССИЯ РЕЦЕПТОРА АФП НА ОПУХОЛЕВЫХ ТКАНЯХ
|
|
|
|
|
|
|
Рак |
молочной железы |
|
|
|
Рак печени |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Рак |
яичника |
|
|
|
Рак желудка |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
АНТИОПУХОЛЕВАЯ АКТИВНОСТЬ КОНЪЮГАТОВ АФП С ЦИТОТОКСИЧЕСКИМИ ВЕЩЕСТВАМИ
|
|
Рецептор АФП |
|
|
|
|
|
ЦТ АФП |
|
Эндоцитоз |
|
Гибель |
|
|
|
|
|
|
опухолевых клеток |
||||
|
|
Опухолевая клетка |
Концентрация меченого 125I-АФП |
||||
Анти- |
AФП |
|
|
||||
|
|
в опухоли (1) и в здоровой ткани (2) |
|||||
сенс |
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Радиоактивность (%) на 1 г веса |
|
||
|
|
|
|
6 |
|
|
|
|
|
Нормальная |
|
|
|
|
|
|
|
клетка |
|
|
|
|
|
Цитотоксические вещества: |
Aнтисенсы: |
3 |
|
|
|
||
|
|
|
(1) |
||||
- блеомицетин |
- калихемицин |
- AS c-myc |
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|||
- карбофосфамид |
- хлоробутин |
- AS bcl-2 |
|
|
|
(2) |
|
- дауномицин |
- винбластин |
0 |
|
|
|||
|
|
|
|||||
- метотрексат |
- эсперамицин |
- AS tel |
0 |
1000 |
2000 |
3000 |
|
- |
|
|
|||||
цис-диаминплатинум (II) дихлорид |
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
Время, мин. |
|
Создание препаратов направленного действия
КОНЪЮГАТ АЛЬФА-ФЕТОПРОТЕИНА С ЭСПЕРАМИЦИНОМ
Конъюгат АФП с эсперамицином
|
Влияние ESP A1b и |
|
S |
ковалентного конъюгата |
|
AFP:ESP A1b на рост |
||
|
||
|
модельной опухоли (P388) |
|
|
у мышей линии DBA |
|
|
3 |
|
|
опухоли, мм |
|
|
1-Контроль |
|
|
2-ESP A1b |
|
|
3- AFP:ESPA |
|
|
10 мкг/кг |
Влияние ESP A1b и
ковалентного конъюгата AFP:ESP A1b на
продолжительность жизни мышей DBA с модельной опухолью (P388)
|
|
|
|
|
|
|
|
|
продолжи |
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Увеличение %жизни, |
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
120% |
|
|
|
||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
100 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
92% |
|
|
|
|
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
|
|
|
|
|
48% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
|
50 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
26% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Перспективы: получение новых более
технологичных конструкций с фрагментами АФП
|
|
|
|
Контроль ESP 0,75 1,00 1,25 |
|
|
|
|
|
|
|
||
|
Время наблюдения, |
|
|
|
||
|
|
|
|
|
||
Введенное количество, мкг/кг |
||||||
|
сутки |
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Минимальное увеличение для |
||
|
|
|
|
клинических испытаний 25% |
||
|
|
|
|
|
|
|
Создание препаратов направленного действия
ОБРАЩЕНИЕ МНОЖЕСТВЕННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТИ КОНЪЮГАТОМ АФП С ДОКСОРУБИЦИНОМ
Выявление белка MDR1 в опухолевых клетках (коричневое окрашивание)
|
Рак молочной железы человека |
|
|
Рак яичника человека |
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
MCF-7 |
|
MCF-7 |
AdrR |
|
SKOV3 |
|
SKVLB |
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Резистентны к ДР |
Резистентны к ДР |
|
Резистентность MDR1+ клеток к доксорубицину и высокая чувствительность к конъюгату АФП с доксорубицином
IC50, |
9 |
|
ДР |
IC50, |
9 |
|
ДР |
|
10 |
|
|
|
10 |
|
|
мкг/мл |
8 |
|
|
мкг/мл |
8 |
|
|
|
7 |
|
|
|
7 |
|
|
|
6 |
|
|
|
6 |
|
|
|
5 |
|
|
|
5 |
|
|
|
4 |
|
|
|
4 |
|
АФП-ДР |
|
3 |
ДР |
АФП-ДР |
|
3 |
ДР |
|
|
2 |
|
2 |
|
|||
|
1 |
|
|
|
1 |
|
|
|
0 |
|
|
|
0 |
|
|
|
|
MCF-7 |
MCF-7AdrR |
|
|
SKOV3 |
SKVLB |
|
|
|
|
Создание препаратов направленного действия |
|||
Цитотоксическая активность конъюгата нового специфического |
|||
транспортного пептида (STP) с доксорубицином в отношении клеток рака |
|||
яичников линии SKOV3 и лимфоцитов периферической крови |
|||
I |
II |
III |
Опухолевая |
|
|
|
|
AФП |
|
|
клетка |
|
|
|
ДР |
|
|
|
Нормальная |
Гибель клеток, % |
|
клетка |
|
80 |
|
|
|
20 |
|
|
|
Опухолевые |
Лимфоциты |
||
|
клетки |
|
|
|
|
Создание препаратов направленного действия |
|
|
|
|
|
Эндоцитоз (1 час, 37oC) нового специфического транспортного пептида (STP) клетками рака яичников человека линии (SKOV3)
и нормальными лимфоцитами периферической крови человека
Средняя интенсивность флуоресценции, усл.ед. |
||||
8 |
|
|
|
|
7 |
|
|
|
|
6 |
|
|
|
|
5 |
|
|
|
|
4 |
|
|
SKOV3 |
|
3 |
|
|
||
|
|
лимфоциты |
||
2 |
|
|
|
|
1 |
|
|
|
|
00,0 |
0,5 |
1,0 |
1,5 |
2,0 |
|
Концентрация STP-FITC, мкМ |
|||
Клетки линии SKOV3 через 4 часа инкубации с конъюгатом доксорубицина с STP
Создание препаратов направленного действия
ОСНОВНЫЕ НАПРАВЛЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ ПО СОЗДАНИЮ НОВЫХ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ НАПРАВЛЕННОГО ДЕЙСТВИЯ
5. Разработка систем избирательной активации |
иммунного ответа организма |