2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Хламидийно_ассоциированные_инфекции_Хворик_Д_Ф_

Рекомендации

Рекомендации СДС

Европейские рекомендации

ВОЗ

Микроскопия;

Микроскопия (до 70%);

Нативный

препарат

культуральное

культуральное

иссле-

(40–80%); микроскопия;

исследование.

дование.

цитология (60%);

культуральное исследование

(95%).

Микроскопия

на-

При увеличении микроскопа х100, затем х400.

тивного препарата

Трихомонады в виде грушевидных подвижных

клеток.

При увеличении х400 видны жгутики.

Большое количество полиморфно-ядерных лей-

коцитов (при увеличении х100).

Микроскопия

пре-

При увеличении микроскопа х1000.

парата, окрашен-

Наличие большого количества лейкоцитов и три-

ного метиленовым

хомонад подтверждает диагноз.

синим

Культуральная ди-

Сбор содержимого уретры или влагалища в про-

агностика

бирки с питательной средой. Посев на среду

должен проводиться в момент взятия материала.

Посев при +35-37ºC 24-72 часа.

Название

Описание

Принцип

Выявление воспалительных изменений в первичных

образцах, поиск и обнаружение T.vaginalis.

Материал для

Отделяемое из уретры.

исследования

Отделяемое заднего свода влагалища.

Необходимое

1)

бинокулярный микроскоп с возможностью увели-

оборудование

чения до х1000 с обычным или темнопольным кон-

и материалы

денсором;

2)

пипетки пластиковые или дозатор полуавтомати-

ческий с наконечниками;

3)

перчатки медицинские;

4)

емкости для сбора и обработки стекол;

5)

предметные стекла;

6)

покровные стекла;

7)

маркер.

Реагенты

- изотонический раствор хлорида натрия стерильный;

- антисептические и дезинфицирующие средства, раз-

решенные к применению.

Подготовка к

Приготовление препарата:

проведению

На предметное стекло поместить каплю теплого (+18

анализа

– 22°С) изотонического раствора хлорида натрия сте-

рильного.

Поместить инструмент с исследуемым материалом на

поверхность капли и перемешать содержимое.

Взвесь накрыть покровным стеклом и микроскопиро-

вать при увеличении х100, х400 с опущенным кон-

денсором или в темном поле зрения.

Учет и оценка

При увеличении микроскопа х100 оценивают:

результатов

- наличие и состояние клеток вагинального эпителия

(эпителия уретры);

- количество и морфологию лейкоцитов;

- наличие и морфологию микрофлоры;

- наличие T.vaginalis.

При увеличении микроскопа х400 оценивают морфо-

логию и движение T.vaginalis: размер T.vaginalis при-

близительно равен размеру ядра эпителиальной клет-

ки или сегментоядерного нейтрофила, форма груше-

видная, овальная, реже – округлая, движения – толч-

кообразные, поступательные и вращательные за счет

жгутиков и ундулирующей мембраны. Необходимо

дифференцировать движение T.vaginalis от пассивно-

го (броуновского) движения клеток во влажной среде.

Критерием для лабораторного заключения о наличии

T.vaginalis является обнаружение хотя бы одного ор-

ганизма с четко различимыми жгутиками.

T.vaginalis может быть обнаружена при общеклини-

ческом исследовании осадка мочи.

Заключение

1. Подвижные организмы, сходные с T.vaginalis, об-

лабораторного

наружены.

исследования

2. Подвижные организмы, сходные с T.vaginalis, не

обнаружены.

Контроль ка-

На преаналитическом этапе оценивается:

чества

- взятие биологического материала в соответствии с

требованиями, наличие материала в препарате, нали-

чие в исследуемом материале клеток многослойного

плоского эпителия;

- выполнение требований хранения и доставки мате-

риала в лабораторию; наличие в препарате кристал-

лов свидетельствует о его подсыхании;

- выполнение требований маркировки проб и соответ-

ствия маркировки пробы маркировке направления.

Мероприятия аналитического этапа:

- соблюдение технологии приготовления нативного

препарата;

- учет результатов с контрольным материалом в соот-

ветствии с официально признанными критериями.

Мероприятия постаналитического этапа:

- правильность внесения результатов в бланк иссле-

дования;

- своевременное доведение информации до врача, на-

значившего исследование.

Источники

- нарушение техники взятия клинического материала;

ошибок

- использование холодного физиологического раство-

ра;

- нарушение условий транспортировки клинического

материала в лабораторию (неоптимальная температу-

ра и высыхание образца);

- неудовлетворительное техническое состояние мик-

Название

Описание

Принцип

Выявление воспалительных изменений в пробах, по-

иск и обнаружение T.vaginalis.

Материал для

Отделяемое из уретры.

исследования

Отделяемое заднего свода влагалища.

Необходимое

1) бинокулярный микроскоп с возможность увели-

оборудование

чения до Ч1000;

Подготовка

к Перед окрашиванием препараты фиксировать 96%

проведению

этиловым спиртом (погружением на 1–2 мин.), при

анализа

окраске по Леффлеру предварительная фиксация не

требуется.

Зафиксированные препараты можно хранить при

комнатной температуре в течение нескольких дней.

Приготовление растворов красителей:

Проведение

Окраска мазков водным раствором метиленового си-

анализа

него:

на фиксированный препарат нанести 1% водный рас-

твор метиленового синего на 1-2 мин. (в зависимости

от толщины мазка). Тщательно смыть оставшийся

краситель струей холодной воды.

Препарат высушить на воздухе. Окраска мазков

спиртовым раствором метиленового синего по Леф-

флеру:

высушенный препарат опустить в стакан с 1% мети-

леновым синим по Леффлеру на 10–15 сек., промыть

погружением в другой стакан с водопроводной во-

дой, препарат высушить на воздухе.

Учет и оценка

Оценка мазков, окрашенных водным и спиртовым

результатов

раствором метиленового синего:

- при микроскопии препарата видны: ядра клеток,

окрашенные в синий цвет; цитоплазма, окрашенная в

голубой цвет разной интенсивности; бактериальная

микрофлора, окрашенная в синий цвет разной интен-

сивности;

- T. vaginalis в препарате, окрашенном метиленовым

синим, имеет различную форму:

- грушевидную, овальную или округлую, контуры

клетки хорошо выражены, ядро, как правило, распо-

ложено эксцентрично, овальное или вытянутое, име-

ет вид «сливовой косточки» окрашено интенсивнее,

чем «пенистая» цитоплазма.

Заключение

1. Подвижные организмы, сходные с T. vaginalis, об-

лабораторного

наружены.

исследования

2. Подвижные организмы, сходные с T. vaginalis, не

обнаружены.

Контроль каче-

На преаналитическом этапе оценивается:

ства

- взятие биологического материала в соответствии с

требованиями;

- выполнение требований хранения и доставки мате-

риала в лабораторию;

- выполнение требований маркировки проб и соот-

ветствия маркировки пробы маркировке направле-

ния;

контроль растворов красителей (внешнее состояние,

срок годности), условия и сроки хранения;

- качество лабораторной посуды.

Мероприятия аналитического этапа:

- соблюдение технологии окраски препарата. Прове-

дение визуального анализа качества окрашивания

препарата по Граму включает оценку интенсивности

окрашивания клеток, при этом ядра эпителиальных

клеток и лейкоцитов окрашены в фиолетовый цвет, а

цитоплазма – в розовый цвет. Каждая новая серия

реактивов для окрашивания по Граму должна быть

проверена на качество при помощи грамположи-

тельных и грамотрицательных штаммов бактерий;

- учет результатов в соответствии с официально при-

знанными критериями.

Мероприятия постаналитического этапа:

- правильность внесения результатов в бланк иссле-

дования;

- своевременное доведение информации до врача,

назначившего исследование.

Источники

— неудовлетворительное техническое состояние

ошибок

микроскопа;

— нарушение правил получения биологического ма-

териала для исследования;

— использование загрязненной лабораторной посу-

ды, старых, поцарапанных стекол;

— нарушение методики приготовления препарата;

— слишком толстый препарат;

— нарушение методики окраски препаратов;

— нарушение методики проведения микроскопиче-

ского анализа.

Устранение

— поддержание микроскопа в надлежащем техниче-

ошибок

ском состоянии;

— следование данной инструкции;

— при неправильной окраске надо повторить взятие

материала и окраску мазка.

Название

Описание

Принцип

Выделение культуры T.vaginalis с использовани-

ем специальных питательных сред с последую-

щей идентификацией по морфологическим при-

знакам.

Биологический

-

отделяемое из уретры;

материал для

ис-

-

отделяемое заднего свода влагалища;

следования

-

центрифугат первой порции мочи.

Подготовка проб к

Дополнительная подготовка проб, полученных из

исследованию

уретры, цервикального канала, влагалища, не

проводится.

Первичную пробу первой порции мочи центри-

фугировать при скорости вращения ротора 1000-

1500 оборотов в минуту в течение 10 минут. На-

досадочную жидкость удалить, осадок центрифу-

гата подлежит дальнейшему исследованию.

Оборудование,

1)

термостат на 36±1°С;

инструменты

и

2)

анаэростат или пакеты для создания анаэроб-

материалы

ных условий культивирования;

3)

бактериологический анализатор;

4)

спиртовка или газовая горелка;

5)

световой микроскоп;

6)

средства индивидуальной защиты персонала;

7)

предметные стекла;

8)

покровные стекла;

9)

бактериологические петли;

10) пробирки или флаконы для среды;

11) маркер;

12) емкость для сбора отходов.

Реагенты

Транспортные и питательные среды или коммер-

ческие наборы для выделения и идентификации

T.vaginalis, зарегистрированные в установленном

порядке на территории страны.

Вазелиновое масло.

Красители для микроскопического исследования

окрашенных препаратов (1% водный или спирто-

вой раствор метиленового синего)

Подготовка к про-

Культивирование T.vaginalis

следует проводить

ведению анализа

во флаконах или пробирках с количеством среды

не менее 5 мл. Возможно использование коммер-

ческих тест-систем, не требующих специальной

подготовки. Хранение и приготовление сред

осуществляют в соответствии с инструкцией

Процедура анали-

Пробу биологического материала засевают с по-

за

мощью бактериологической петли в питательную

среду. При использовании транспортных сред по-

сев проводится тампоном, извлеченным из фла-

кона (пробирки) с транспортной средой. Поверх-

ность среды заливают стерильным вазелиновым

маслом или используют другой способ для созда-

ния анаэробных условий (анаэростат, тест-пакеты

и др.). Пробирки с посевами инкубируют при +37

°С.

Просмотр посевов производят через 24 часа и да-

лее ежедневно.

При использовании коммерческих культуральных

систем руководствуются инструкцией произво-

дителя.

Учет и оценка ре-

Оценка вида колоний. T.vaginalis при культиви-

зультатов

ровании в жидкой питательной среде дает при-

донный рост в виде плотного или рыхлого бело-

ватого осадка, напоминающего «облачко».

При отсутствии роста посевы инкубируют до 7

суток, прежде чем окончательно выдать отрица-

тельный результат. В случае сильного загрязне-

ния посева может потребоваться повторный пас-

саж (пересев) на питательную среду для сниже-

ния контаминации.

После каждого просмотра культуры необходимо

производить ее микроскопическое исследование.

Приготовление мазка из культуры и его исследо-

вание и учет результатов производится в соответ-

ствии с требованиями данной инструкции по

микроскопическому исследованию.

Форма лабораторного заключения культурально-

го (бактериологического исследования):

- T.vaginalis выделена;

- T.vaginalis не выделена.

Контроль качества

На преаналитическом этапе оценивается:

 взятие

биологического

материала

в

соответствии с требованиями;

 выполнение требований хранения и доставки

материала в лабораторию;

 выполнение требований маркировки проб и

соответствия

маркировки

пробы

маркировке

направления;

 контроль

качества

транспортных

и

питательных сред (стерильность, ростовые

свойства,

способность

подавлять

рост

контаминирующей флоры, сроки и условия

хранения);

 проверка

среды

на

стерильность

осуществляется путем инкубации образца среды

в термостате при +37°С в течение 48 часов;

 контроль ростовых свойств проводится путем

посева референс-штамма T.vaginalis;

 контроль среды на способность подавлять рост

контаминирующей флоры

проводится

путем

посева референс-штаммов Е.coli, S.epidermidis,

N.sicca, С.albicans;

 контроль

качества

реагентов

(внешнее

состояние, срок годности), условия и сроки

хранения;

 качество лабораторной посуды;

 своевременность проведения метрологической

поверки средств измерения, используемых в

лаборатории.

Мероприятия аналитического этапа:

 выполнение

методики

в

соответствии

с

настоящей

инструкцией

или

инструкцией

производителя тест-систем;

 соблюдение

технологии

окраски

в

соответствии с инструкцией;

 учет результатов в соответствии с официально

признанными критериями.

Мероприятия постаналитического этапа:

 правильность

внесения

результатов в

бланк

исследования;

 своевременное

доведение

информации

до

врача, назначившего исследование.

Источники оши-

Нарушение сроков и температурного режима при

бок и пути их уст-

доставке материала.

ранения

Использование некачественных сред и реактивов.

Неудовлетворительное

состояние оборудования.

Средства измерения, используемые для проведе-

ния исследования, должны иметь сертификат о

государственной поверке.

Нарушение методики посева и кратности про-

смотра. Проведение исследования должно вы-

полняться в

соответствии

с

требованиями

на-