2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Санитарно_бактериологический_контроль_и_микробиологические_методы
.pdf61
Реа кция фл о ккул яции
Врезу льтате взаимодействия токсина или анатоксина с антитоксической сывороткой вып адаю т хлоп ья ф локку лята. Н аиб олее
интенсивная и |
ранняя («инициальная» ) ф локку ляция п роисходит в |
п роб ирке, где |
антиген и антитело содерж атся в эквивалентных |
соотнош ениях. |
|
Реакцию ставят вдваэтап а. Сначалап о стандартной сыворотке у станавливаю тп орогову ю величину ф локку ляции (Limes flocculationis) в1 мл токсина. Lf токсина оп ределяется его минимальным количеством, котороедает«инициальну ю » ф локку ляцию с 1 меж ду народной единицей
(ME) сыворотки. |
У становив силу токсина, п ристу п аю т к |
титрованию |
||
антитоксической |
сыворотки. |
И звестной |
силы токсин и |
исп ыту ему ю |
антитоксическу ю |
сыворотку |
разливаю т |
в п роб ирки в оп ределенном |
|
об ъ еме. Проб ирки выдерж иваю твводяной б анеп ри 45 °С втечение30 мин. довып аденияхлоп ьевводнойиз них.
«И нициальная» ф локку ляция п роявляется в той п роб ирке, где количество токсина соответству ет количеству меж ду народных единиц сыворотки. Н ап ример, ф локку ляцияп роизош лав3-й п роб ирке, значит, в 0,4 мл сыворотки находится 40 ME. Следовательно, 1 мл сыворотки содерж ит40:0,4 - 100 ME.
Ант ист р епт о л изино ва я р еа кция
Реакция основана на ф еномене нейтрализации гемолитического действия микроб ного токсина (О -стреп толизина) антитоксическими антителами имму нной сыворотки.
Д ляп остановки реакции п редварительно оп ределяю тминимальну ю гемолитическу ю дозу токсина(О -стреп толизина), т. е. тонаименьш ееего количество, которое вызывает гемолиз 0,2 мл5 % взвеси эритроцитов
кролика. |
Затем |
оп ределяю т |
раб очу ю дозу |
О -стреп толизина, |
т. е. |
|
наиб ольш ее количество токсина, которое |
в смеси с |
1/2 |
А Е |
|||
(антитоксической |
единицы) |
стандартной антитоксической |
сыворотки |
|||
п олностью |
нейтрализу ется и не вызывает гемолиза эритроцитов. Д ля |
|||||
п остановки основногооп ытаготовятразведенияисследу емой сыворотки,
к каж дому |
из которых доб авляю траб очу ю |
дозу токсина, инку б иру ю т45 |
||
мин. п ри |
37 °С |
и |
доб авляю т равный |
об ъ ем взвеси эритроцитов, |
инку б иру ю т ещ е 1 |
ч. |
п ри 37 °С и 18 ч. |
п ри комнатной темп ерату ре. |
|
О б язательным является контроль навозмож ность сп онтанного гемолиза
эритроцитов. |
В качестве п олож ительной у читывается реакция, где |
отсу тству ю т |
гемолиз и оседание эритроцитов на дно. С у четом |
максимального разведения сыворотки, п ри котором наб лю дается п олная задерж кагемолиза, рассчитываю т содерж ание А Е вI мл исп ыту емой сыворотки.
Р еа кция т о р мо ж ения гема ггл ют ина ции
Реакциятормож ениягемагглю тинации (РТ ГА ) основананатом, что п ри взаимодействии виру сных антигенов (гемагглю тининов) со
62
сп ециф ическими антителами имму нной сыворотки п роисходит б локирование(нейтрализация) гемагглю тиниру ю щ ейсп особ ностивиру са,
т. е. тормож ениегемагглю тинации. |
|
Разверну тая РТ ГА п роводится влу нках п ластмассовых |
п ластин. |
Предварительно оп ределяю т титр виру сного антигенавРГА |
с целью |
выб орараб очей дозы. Раб очееразведениеб еру тв16 раз меньш етитра. В лу нках готовят 2-кратные разведения исследу емой сыворотки воб ъ еме 0,25 мл, доб авляю т п о 0,25 млвзвеси виру савраб очем разведении и
инку б иру ю т 2 |
ч. п ри |
37 °С. Затем |
доб авляю т п о 0,5 мл 1 |
% взвеси |
ку риных эритроцитов, |
инку б иру ю т ещ е 2 ч. и оцениваю т резу льтат п о |
|||
ф еномену гем |
агглю тинации. При |
п олож ительной РТ ГА |
об разу ется |
|
п лотный осадок эритроцитовнадне лу нки ввиде дискаили кольцас
ровными краями. Т итр |
антител оп ределяю т п о п оследней |
лу нке с |
||
п олож ительнойРТ ГА . |
|
|
|
|
О С Н О В Н А Я Л И Т ЕР А Т У Р А |
|
|
||
Борисов Л .Б. |
М едицинская |
микроб иология, |
виру сология, |
|
имму нология / Л . Б.Борисов.-2-е изд. |
доп и п ерераб .-М .: |
М ед. |
инф орм. |
|
агенство, 2001.-734 с. |
|
|
|
|
М едицинскаямикроб иология/ А . З. Байчу рина, Г. Х . Гильманова, В . Е . Григорьевидр.; Гл. ред.: В . И . Покровский, О . К . Поздеев.-М .: ГЭ О Т А Р М Е Д И Ц И Н А , 1999.-1183,[1]с.
БорисовЛ .Б. Ру ководствок п рактическим занятиям п омедицинской микроб иологии, виру сологии и имму нологии / Л .Б. Борисов, Б.Н .К озьминСоколов, И .С.Ф рейдлин -М .: М едицина, 1994. – 240 с.
О сновы микроб иологии, виру сологии и имму нологии: У чеб ник для сту дентовмед. у чилищ / Под ред. А . А . В ороб ьева, Ю . С. К ривош еина. -
М .: Б.и., 2001.-223,[1] с.
63
Составители: СеменихинаА настасияВ ладимировна РахмановаТ атьянаИ вановна Н ехаеваГалинаИ вановна Поп оваТ атьянаН иколаевна
Редактор Т ихомироваО .А .