2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Санитарно_бактериологический_контроль_и_микробиологические_методы

эп идемиологических станций вп лановом п орядке и п о эп идемическим п оказаниям.

Санитарнаямикроб иологияисп ользу етдваосновных методаоценки санитарно-эп идемиологическогосостояниявнеш нейсреды:

среды. О днако неп осредственное об нару ж ение п атогенных микроб овв

возб у дителя во внеш ней среде. С этой целью оп ределяю т микроб ну ю об семененность об ъ екта и п роводят об нару ж ение в нем санитарно- п оказательных микроорганизмов.

О микроб ной об семененности су дят п о микр о бно му числ у – это об щ ееколичествомикроорганизмов, содерж ащ еесявединицеоб ъ емаили массы исследу емого об ъ екта(в1 см3 воды, 1 г п очвы, 1 м3 возду ха). Содерж ание санитарно-п оказательных б актерий оценивается п о дву м п оказателям - титру и индексу . Тит р о м называется тот минимальный об ъ ем или масса, вкоторых об нару ж иваю тсяданныеб актерии; инд ексо м - количество санитарно-п оказательных б актерий, содерж ащ ихся в 1 л ж идкости, 1 гп лотных вещ еств, 1 м3 возду ха.

К санитарно-п оказательным б актериям относятся п редставители об лигатной микроф лоры организмачеловекаи теп локровных ж ивотных,

42

Санитарно-п оказательные б актерии об ладаю т следу ю щ ими свойствами: 1) п остоянновыделяю тсявб ольш ом количествес калом или кап ельками слизи из возду ш но-дыхательных п у тей; 2) не имею т дру гих мест об итания; 3) сп особ ны сохраняться вокру ж аю щ ей средевтечение тех ж есроков, чтои п атогенныеб актерии, п аразитиру ю щ иевкиш ечнике или возду ш но-дыхательных п у тях; 4) не сп особ ны интенсивно размнож атьсянакаких-либ о об ъ ектах внеорганизмахозяинаи изменять

закру гленными концами, неокраш иваю щ иесяп оГраму и сб раж иваю щ иес

п ищ евых п роду ктах считаетсянаиб олеедостоверным п оказателем свеж его ф екального загрязнения. Н аличие вэтих ж е об ъ ектах б актерий родов

клостридий вп очвесвидетельству етоееф екальном загрязнении, п ричем как свеж ем, так и давнем, п оскольку эти б актерии об разу ю т сп оры, что п озволяетим длительно п ереж ивать вокру ж аю щ ей среде(вчастности, в п очве).

Т ермоф ильные б актерии вклю чаю т гру п п у разных б актерий

(Lа сtо bа сillus lа сtis, Stгер tо со ссus thегmо р hilus идр.), размнож аю щ ихсяп ри

темп ерату ре 60 °С и выш е. О ни не являю тся п остоянными об итателями киш ечника человека и не слу ж ат критериями ф екального загрязнения окру ж аю щ ей среды. Резкое у величение количества этих б актерий в саморазогреваю щ емся навозе и комп остах мож ет свидетельствовать о загрязнении п очвы разлагаю щ имисяотб росами.

Бактерии, п ринадлеж ащ иек роду Р го tеus (Р . vulgа ris идр.) семейства Еntег о bа сtегiа сеа е, ш ироко расп ространены вп рироде. Э ти гнилостные б актерии вб ольш ом количествевстречаю тсянаразлагаю щ ихсяостанках ж ивотных и растений. О б нару ж ениеэтих б актерий вкаких-либ оп ищ евых

проду ктах свидетельству етогнилостном расп аде.

Об нару ж ение воб ъ ектах окру ж аю щ ей среды Strер tо со ссus fа еса lis

свидетельству ет об их ф екальном загрязнении. Гемолитические стреп тококки (S. р уо gеnes), являясь транзитными об итателями носоглотки и зева, выделяю тсяс кап ельками слизи орально-кап ельным п у тем. Сроки выж ивания гемолитических стреп тококков в окру ж аю щ ей среде п рактически не отличаю тся от сроков, характерных для б ольш инства

возмож ное его загрязнение микроорганизмами, содерж ащ имися взеве,

воды вэп идемиологическом отнош ении оп ределяется ее соответствием нормативам п омикроб иологическим п оказателя(таб л. 6).

Т аблица 6. Н ормативы микроб иологических п оказателей п итьевойводы

Превыш ениенормативовнедоп у скаетсяв95 п роб ах, отб ираемых в течение12 месяцевп ри об щ ем количественеменее100. При об нару ж ении вп роб ах Т К Б и О К Б п роводитсяих оп ределениевп овторных п роб ах. При п овторном об нару ж ении п роводитсяисследованиенаналичиеп атогенных б актерий киш ечной гру п п ы и энтерококков. Сп оры клостридий оп ределяю т п ри оценке эф ф ективности технологии об раб отки воды. К олиф аги оп ределяю т в системах водоснаб ж ения и с п оверхностных источниковп ередп одачейврасп ределительну ю сеть.

44

За д а ниед л я вы по л нения л а бо р а т о р но йр а бо т ы

О су щ ествить заб ор п роб ы воды из водоп роводногокрана. Провести

О т бо р , хр а нениеи т р а нспо р т ир о ва ниепр о б

О тб ор п роб п роизводит сп ециально об у ченный сотру дник. Проб ы отб ираю т встерильные ф лаконы с резиновыми п роб ками и б у маж ными колп ачками. При отб ореп роб воднойи той ж еточкедляразличных цеп ей п ервыми отб ираю т п роб ы для б актериологических исследований. Е сли

количествадезинф ектантавемкость, п редназначенну ю для отб орап роб , вносятдостерилизации натрий серноватисто-кислый ввидекристалловиз

предварительной его стерилизации об ж иганием и п оследу ю щ его сп у ска воды неменее10 мин п ри п олностью открытом кране. При отб ореп роб ы нап ор воды долж ен б ыть у меньш ен. При отб оре из кранас п остоянным

потоком воды об ж иг кранане п роводят, нап ор не меняю т. Проб ки п ри

Д оставку п роб осу щ ествляю т в контейнерах-холодильниках п ри темп ерату ре(4 - 10) °С. В холодныйп ериодгодаконтейнеры долж ны б ыть

45

сп особ ных об разовывать колонии нап итательном агареп ри темп ерату ре

37 °Свтечение24 ч, видимыес у величением в2 раза.

И з каж дой п роб ы делаю т п осевне менее дву х об ъ емовп о 1 мл. После тщ ательного п еремеш ивания п роб ы воды вносят п о 1 мл в стерильные чаш ки Петри, слегкап риоткрывая крыш ки. После внесения воды вкаж ду ю чаш ку вливаю т(8 – 12) мл(начаш ку диаметром 90 - 100

мм) расп лавленного и осту ж енного до (45 – 49) °С п итательного агара. Затем б ыстросмеш иваю тсодерж имоечаш ек, равномернорасп ределяяп о всему дну , изб егая об разования п у зырьковвозду ха, п оп адания агарана края и крыш ку чаш ки. Э ту п роцеду ру п роизводят на горизонтальной

поверхности, гдечаш ки оставляю тдозастыванияагара. Послезастывания агарачаш ки с п осевами п омещ аю твтермостатвверх дном и инку б иру ю т

при темп ерату ре(37 ± 1) °Свтечение(24 ± 2) ч.

Учет р езул ьт а т о в

Подсчитываю твсевыросш иеначаш кеколонии, наб лю даемыеп ри у величении в2 раза. У читываю ттолькотечаш ки, накоторых вырослоне б олее300 изолированных колоний. К оличествоколоний наоб еих чаш ках

основании у четаколоний наодной чаш ке. Е сли надву х чаш ках имеет место рост расп лывчатых колоний, не расп ространяю щ ийся на всю п оверхность чаш ки, или выросло б олее 300 колоний и анализ нельзя п овторить, п одсчитываю т сектор чаш ки с п оследу ю щ им п ересчетом на

оксидазоотрицательные, необ разу ю щ иесп ор п ап очки, сп особ ныерастина диф ф еренциальных лактозных средах, ф ерментиру ю щ ие лактозу до

кислоты, альдегидаигазап ри темп ерату ре(37 ± 1) °Свтечение(2448) ч.

Тер мо т о л ер а нт ны е ко л ифо р мны е ба кт ер ии (ТК ) входят вчисло об щ их колиф ормных б актерий, об ладаю твсеми их п ризнаками и, кроме того, сп особ ны ф ерментировать лактозу докислоты, альдегидаи газап ри

темп ерату ре(44 ± 0,5) °Свтечение24 ч.

Д ляоп ределенияО К Б и Т К Б исп ользу ю тдваметода:

1. М ет о д о м мембр а нно йфил ьт р а ции (о сно вно ймет о д )

М етод основан наф ильтрации у становленного об ъ емаводы через мемб ранные ф ильтры, выращ ивании п осевов на диф ф еренциальной п итательной средес лактозой и п оследу ю щ ей идентиф икации колоний п о ку льту ральным и б иохимическим свойствам.

п реп ятству ю щ ей п олу чению наф ильтрах изолированных колоний об щ их

б иохимическим тестам.

Вы по л нениеа на л иза

При исследовании п итьевой воды ка чест венны м мет о д о м (теку щ ий санэп иднадзор, п роизводственный контроль) засеваю т3 об ъ емап о100 мл. При исследованиях воды с целью ко л ичест венно го о пр ед ел ения О К Б и Т К Б п ри п овторном анализе п роизводят п осев: 3 об ъ емовп о 100 мл, 3 об ъ емовп о10 мл, 3 об ъ емовп о1 мл.

К аж дый об ъ ем исследу емой воды засеваю т влактозо-п еп тонну ю среду . Посев 100 мл и 10 мл воды п роизводят в 10 и 1 мл концентрированной лактозо-п еп тонной среды, п осев1 млп роб ы п роводят в10 млсреды об ычнойконцентрации.

Посевы инку б иру ю тп ри (37 ± 1) °Свтечение48 ч. Н еранее24 часа

высевб актериологической п етлей насекторасреды Э ндо дляп олу чения изолированных колоний. Е мкости б ез наличия ростаи об разования газа оставляю твтермостатеи окончательноп росматриваю тчерез 48 ч. Посевы б ез п ризнаков роста считаю т отрицательными и дальнейш ему исследованию они неп одлеж ат. И з емкостей, гдеотмеченоп ому тнениеи об разованиегазаили только п ому тнение, делаю твысевнасекторасреды Э ндо.

Посевы насреде Э ндо инку б иру ю т п ри темп ерату ре (37 ± 1) °С в течение(18-20) ч. При об разовании п ому тненияи газавсреденакоп ления и росте насреде Э ндо колоний, тип ичных для лактозоп олож ительных б актерий: темно-красных или красных, с металлическим б леском или б ез него, вып у клых с красным центром и отп ечатком нап итательной среде, даю тп олож ительный ответнап рису тствиеоб щ их колиф ормных б актерий

47

В этих слу чаях: 1) п роверяю т наличие отп ечатканасреде Э ндо п осле снятияп етлейп одозрительной колонии; 2) вып олняю токсидазный тест; 3) п одтверж даю тп ринадлеж ность к Граму ; 4) п одтверж даю тсп особ ность к газооб разованию п ри п осевеизолированных 1 - 2 колоний каж доготип ас каж дого секторанасреду с лактозой с п оследу ю щ ей инку б ацией п осевов

п ри темп ерату ре(37 ± 1) °Свтечение(24 - 48) ч.

При отсу тствии изолированных колоний п роводят рассевнасреду

Эндооб щ еп ринятыми б актериологическими методами.

Отрицательный ответдаю т, если:

•всреденакоп лениянетп ризнаковроста;

•насекторах среды Э ндонетроста;

• насекторах среды Э ндо выросли не характерные для колиф ормных б актерийколонии(п розрачныес неровнымикраями, расп лывчатыеит. п .);

•всеколонии оказались оксидазоп олож ительными; всеколонии оказались грамп олож ительными;

•если в п одтверж даю щ ем тесте на среде с у глеводом не отмечено газооб разования.

колоний каж доготип ас каж догосекторавп роб иркис лю б ойиз лактозных сред. Среду п ередп осевом нагреваю тнаводяной б анеили втермостатедо

44 °С. Н емедленно п осле п осева п роб ирки п омещ аю т в термостат и

инку б иру ю т п ри темп ерату ре (44 ± 0,5) °С втечение 24 ч. Д оп у скается п росмотр п осевовчерез (4 - 6) ч.

При об разовании газавсреде накоп ления, росте насреде Э ндо лактозоп олож ительных б актерий и выявлении сп особ ности этих б актерий ф ерментировать лактозу докислоты и газавтечение24 чп ри темп ерату ре

44 °С даю тп олож ительный ответнаналичиевэтом об ъ емеп роб ы воды Т К Б. В овсех остальных слу чаях даю тотрицательный ответ.

Д оп у стимо для у скорения выдачи ответа на п рису тствие Т К Б п роизводить высев1 мл из об ъ емовсреды накоп ления, где отмечено

пому тнениеи газооб разованиевп роб иркес лактозо-п еп тонной средой с

поп лавком и п рогретой п редварительно до темп ерату ры 44 °С. Посевы

выдерж иваю твтермостатеп ри темп ерату ре(44 ± 0,5) °С втечение24 ч. При об нару ж ении кислоты и газадаю тп олож ительный ответ.

Учет р езул ьт а т о в

При исследовании 3 об ъ емовп о 100 млрезу льтаты оцениваю тся качественнои п ри об нару ж ении О К Б и Т К Б хотяб ы водном из 3 об ъ емов, делаетсязап ись вп ротоколе«об нару ж ены в100 мл».

При отрицательном ответе на наличие OKБ и Т К Б во всех исследованных об ъ емах выдаю тзаклю чениевп ротоколе«необ нару ж ены в100 мл».

50

чисту ю ку льту ру для изу чения ее свойств и оп ределения видовой

принадлеж ности, п ользу ясь дляэтой цели об щ еп ринятыми методами.

От бо р пр о б во зд уха а спир а цио нны м мет о д о м

Более точный количественный метод оп ределения микроб ного

оп ределенной конф игу рации. Поток возду ханап равляетсянап оверхность п итательной среды. Затем чаш ку с п итательной средой инку б иру ю т24 - 48

часовв термостате п ри 37 °С. В ыросш ие колонии п одсчитываю т п о сп ециальнойф орму ле, оп ределяю тО М Ч в1 м3 возду ха.

Д ля оп ределения О М Ч исп ользу ю т М ПА , для оп ределения золотистогостаф илококка– Ж СА , дляβ-гемолитическогостреп тококка– кровянойагар.

Т ема7.3. М И К РО Ф Л О РА ПО Ч В Ы Почваявляется резерву аром и естественной средой об итания ряда

микроорганизмов. В состав п очвенной микроф лоры входят сп орооб разу ю щ иеб актерии, актиномицеты, сп ирохеты, п ростейш ие, синезеленыеводоросли, гриб ы, виру сы.

Патогенные микроорганизмы п оп адаю т вп очву с исп раж нениями, мочой, гноем, мокротой, слю ной и дру гими выделениями, с тру п ами лю дей и ж ивотных, п огиб ш их отинф екционных заб олеваний. Поп адаяв п очву , значительная часть п атогенных микроорганизмов, необ разу ю щ их сп ор, рано или п оздно п огиб ает. Сроки выж иваниявп очвевозб у дителей киш ечных инф екций (дизентерии, б рю ш ного тиф а, холеры), чу мы, б ру целлеза, ту ляремии, ту б ерку лезаш ироко варьиру ю т и составляю т от нескольких часовдонескольких месяцев. О тмираниеп атогенных б актерий вп очвезависит отрядап ричин: высу ш ивания; отсу тствия необ ходимых п итательных су б стратов; действия антиб иотических вещ еств, выраб атываемых п очвенными б актериями и гриб ами; солнечных лу чей; б актериоф агов и т. п . Значительно дольш е в п очве сохраняю тся сп орооб разу ю щ ие п атогенные б актерии - аэроб ные (сп оры В. anthracis сохраняю тсявп очвесвыш е15 лет) и анаэроб ныевозб у дителистолб няка, газовой гангрены, б оту лизма(их сп оры такж есохраняю тсявп очвемногие

Поэтому п очваиграетосновну ю роль вэп идемиологии столб няка, газовой