НИИ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЫ МИНЗДРАВА РОССИИ НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННАЯ ФИРМА “ЛИТЕХ”

Кудрявцева Л.В., Конарева Т.Н.,Горбатенко Е.В., Попова Т.И.,Говорун В.М.

ПРАВИЛА

взятия и доставки биологического материала для лабораторных исследований

Для получения достоверных результатов любого из существующих на сегодняшний день методов лабораторных исследований необходимо учитывать ряд факторов, оказывающих негативное влияние на его результаты.

К этим факторам можно отнести:

I. Состояние пациента, предшествующее взятию у него биологического материала для исследования. II. Свойства биологического материала.

III. Условия взятия, временного хранения и транспортировки биологического материала.

Первая группа факторов должна приниматься во внимание прежде всего врачом, назначающим лабораторное исследование пациенту и указываться в направлении на исследование. Все факторы, входящие в эту группу можно разделить на две категории:

1.факторы, которые должны быть указаны при любом виде лабораторного исследования – пол, возраст, основной диагноз;

2.факторы, которые указываются при некоторых видах лабораторных исследований - национальность, физиологическое состояние (беременность, наличие сопутствующих заболеваний, фаза менструального цикла), прием лекарственных препаратов, прием пищи, голодание, курение, прием алкоголя.

Ко второй и третьей группе факторов относятся - стабильность анализируемого биологического материала и его возможный метаболизм in vitro. От этого зависят необходимость использования специальных контейнеров с консервантами и транспортных сред для временного хранения, а также условия транспортировки биологического материала в лабораторию (соблюдение температурного режима и влажности).

Так, наиболее простой и в то же время эффективной мерой служит соблюдение единого правила взятия крови натощак, утром, в положении пациента лежа или сидя. Существенную помощь при этом может оказать применение различных устройств типа “вакутейнеров”. При использовании “вакутейнеров” сокращается время взятия крови за счет ее ускоренного всасывания в вакуумную пробирку, где кровь немедлен-

но вступает в контакт с необходимым для сохранения аналита консервантом.

При проведении цитологического исследования влагалищного отделяемого на бактериальный вагиноз для правильного приготовления мазков полученное отделяемое наносится на предметное стекло и равномерно мягким движением, не применяя грубого втирания, равномерно распределяется на предметном стекле. После чего, мазок фиксируют высушиванием при комнатной температуре.

При исследовании методом ПЦР взятие материала для анализа производится только одноразовыми инструментами (иглами, тампонами, зондами, одноразовыми стерильными щетками для соскоба эпителия) в пластиковые пробирки одноразового использования с реактивом из набора “ДНК-ЭКСПРЕСС”.

Взятие биологического материала и его транспортировка для проведения бактериологического исследования являются наиболее ответственными этапами, обеспечивающими успех микробиологических исследований по выделению микроорганизмов из различного клинического материала. При взятии биологического материала медицинский персонал должен использовать спецодежду – халаты, перчатки. При опасности возникновения аэрозолей должны использоваться защитные очки и маски.

Нарушение правил взятия биологического материала чревато нежелательными последствиями экономического (излишняя трата расходных материалов) и медицинского характера (повторное взятие биологического материала у пациента, задержка результатов лабораторного исследования, возможность медицинских ошибок).

Общими требованиями к взятию и транспортировке биологического материала являются:

1.Соблюдение оптимальных сроков для взятия биологического материала на исследование.

2.Взятие биологического материала должно осуществляться с учетом места максимальной локализации возбудителя и возможных путей его выделения в окружающую среду.

3.Биологический материал для исследования должен быть взят в необходимом и достаточном объеме с обеспечением условий, исключающих его контаминацию резидентной микрофлорой. Недостаточное количество материала может определять ложноотрицательный результат исследования.

4.Взятие биологического материала должно производиться строго до начала применения антибактериальных и химиотерапевтических препаратов или не ранее чем через 10-14 дней после их отмены.

5.Отобранный биологический материал должен быть промаркирован. В сопроводительном докумен- те-направлении необходимо указать: пол, фамилию, имя, отчество, возраст пациента, предполагаемый диагноз или показания к обследованию, дату взятия пробы, какое учреждение направляет материал. При необходимости указывается и дополнительная информация – физиологическое состояние пациента, курение, прием алкоголя и т.д.

6.Контейнеры для транспортировки материала должны обеспечивать герметичность, стерильность, целостность образцов, а также – исключать при открытии образование аэрозоля.

7.Материал доставляется в лабораторию с учетом правил транспортировки для различных видов исследований и лицами, получившими специальный инструктаж. При направлении материала на исследование, прежде всего, необходимо исключить вероятность контаминации собранного биологического материала.

В случае несоблюдения правил взятия и условий доставки биологического материала образцы не подлежат лабораторному исследованию и об этом сообщается врачу, направившему биологический материал на исследование.

ВЗЯТИЕ, УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ДОСТАВКИ ВЕНОЗНОЙ КРОВИ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ИФА И ПЦР

Подготовка обследуемых

Взятие венозной крови производится натощак, в утренние часы. При взятии венозной крови необходимо учитывать ряд факторов которые могут повлиять на результат гематологических исследований: физическое перенапряжение (бег, быстрая ходьба, подъем по лестнице), эмоциональное возбуждение, прием пищи накануне исследования, купение, прием алкоголя и т.д. Для исключения этих факторов, следует соблюдать следующие условия подготовки пациентов:

-взятие венозной крови осуществляется после 15-минутного отдыха обследуемого;

-пациент во время взятия сидит, у тяжелых больных взятие крови может осуществляться лежа.

-курение, прием алкоголя и пищи непосредственно перед исследованием исключаются;

Основной способ взятия венозной крови для лабораторного исследования – пунктирование вены. Венозную кровь, как правило, забирают из локтевой вены. В случае необходимости ее можно получить из любой вены (запястья, тыла ладони, над большим пальцем и т.д.). У новорожденных и грудных детей кровь обычно берется из лобной, височной или яремной вены.

При взятии крови из вены необходимо избегать: мест шрамов, гематом; вен, используемых для переливания растворов; ножных вен (у больных диабетом, при нарушениях периферического кровотока, ангиопатиях).

Оборудование

Для венепункции можно использовать три варианта пункционных систем:

-одноразовые пластиковые системы (вакутейнеры), состоящие из контейнера с навинчивающейся на него одноразовой иглой и пробирки с плотно прилегающей пробкой и вакуумом внутри;

-одноразовые шприцы с подходящим диаметром иглы;

-иглы с внутренним диаметром 0,55-0,65 мм.

Условия транспортировки венозной крови

Правильно собранная венозная кровь должна быть своевременно доставлена в лабораторию. При комнатной температуре время доставки не должно превышать 60 мин после взятия крови. Если доставка крови в лабораторию осуществляется в течении дня, то она хранится при температуре +40С-+60С (в холодильнике) и далее в специальных транспортных контейнерах в ледяной бане доставляется в лабораторию.

Во время транспортировки пробирки и контейнеры с кровью должны быть соответствующим образом защищены от вредного воздействия окружающей среды и погодных условий. При транспортировке венозной крови должны строго соблюдаться правила техники безопасности, асептики и антисептики.

Пробирки должны быть промаркированы, упакованы и плотно закрыты. Упаковка должна быть удобной для транспортировки. Сроки хранения зависят от исследуемого показателя, температуры хранения и антикоагулянта, с помощью которого осуществляется взятие крови.

Методика получения сыворотки крови (без использования разделительных или вспомогательных средств для центрифугирования)

Оборудование

1.Центрифужные стеклянные пробирки общим объемом 10-12 мл.

2.Стеклянные палочки или Пастеровские пипетки с запаянными на конце капиллярами (для отделения сгустка).

3.Центрифуга лабораторная (до 3000 об/мин).

Приготовление сыворотки

Венозная кровь, полученная без антикоагулянтов в центрифужную стеклянную пробирку, отстаивается в ней при комнатной температуре (15-200С) в течение 30 минут до полного образования сгустка. По окончании образования сгустка пробирки открывают и осторожно проводят тонкой стеклянной палочкой или запаянным капилляром Пастеровской пипетки по внутренним стенкам пробирки по окружности в верхнем слое крови для отделения столбика сгустка от стенок пробирки. Сыворотку сливают в другую центрифужную пробирку, придерживая сгусток стеклянной палочкой, и центрифугируют, либо центрифугируют в тех же, первичных, пробирках.

Центрифугирование

После ретракции сгустка пробы центрифугируют при относительной центробежной силе RCF от 1000 до 1200 xg (максимально до 1500 xg) в течение 10 минут.

В случае использования микропробирок и центрифуги для них центрифугирование проводят при 600015000 xg в течение 1,5 минут. После центрифугирования сыворотку сливают во вторичные (транспортные) пробирки. Сыворотка не должна быть гемолизированной.

Плазма получается из крови путем отделения клеток крови. Она представляет собой бесклеточную надосадочную жидкость, которая получается при центрифугировании крови, свертываемость которой инги-