6 курс / Клинические и лабораторные анализы / Лабораторные_методы_исследования_системы_гемостаза_и_диагностика

Принцип метода: инкубация нормальной плазмы с активатором протеина С вызывает активацию эндогенного протеина С и протеина S, что удлиняет время свертывания нормальной плазмы в тесте активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ). Без добавления активатора АЧТВ этой же плазмы не изменено.

В плазме больных с дефицитом системы протеина С или при наличии мутантного ф. V (Лейден) удлинение АЧТВ при добавлении активатора менее выражено, чем в норме.

Интерпретация результатов: у здоровых лиц НО составляет 1,1± 0,3. Значение НО ниже 0,8 свидетельствует о возможном наличии мутантного ф. V (Лейден), резистентного к действию активированного протеина С.

Ложноположительные результаты могут быть получены при анализе образцов плазм больных:

·с повышенным содержанием гепарина;

·с наличием красной системной волчанки;

·при использовании антикоагулянтов непрямого действия (МНО выше 3,0).

Окончательное подтверждение наличия мутации Лейдена может быть сделано ПЦР-диагностикой.

НАБОРЫ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ ГЕПАРИНА

Определение содержания гепарина в плазме проводится с целью контроля антикоагулянтной терапии гепарином, которую проводят при инфаркте миокарда, легочной эмболии, остром тромбозе глубоких вен, гемодиализе, использовании аппарата сердце-легкие, при дооперационной и послеоперационной профилактике тромбоэмболии.

НПО «РЕНАМ» производит 2 диагностических набора реагентов для определения активности гепарина в плазме крови пациентов, а также набор плазм-калибраторов для построения калибровочных графиков и набор контрольных плазм для проверки правильности исследований.

Набор реагентов для определения анти Ха активности гепарина оптическим методом (Реахром-гепарин)

Состав набора:

1. Антиромбин III, лиофильно высушенный, 2. Фактор Xa, лиофильно высушенный, 3. Буфер концентрированный, 4. Хромогенный субстрат, лиофильно высушенный.

Принцип метода: метод определения активности гепарина основан на способности комплекса АТ III-гепарин нейтрализовать активированный фактор Ха. Активность гепарина определяют в плазме, добавляя к ней избыток антитромбина III и ф. Xa. При этом происходит ингибирование ф. Xa комплексом АТ III-гепарин пропорционально количеству гепарина в плазме. Оставшееся количество ф. Xa катализирует отщепление паранитроанилина (рNА) от синтетического хромогенного субстрата. Абсорбция свободного pNA, определяемая при 405 нм, обратно пропорциональна активности гепарина в плазме.

Процесс идет по следующей схеме:

АТ III (избыток) + гепарин = АТ III-гепарин;

АТ III-гепарин + Xa (избыток) = АТ III-гепарин-Xa+Xa (остаток); Субстрат-рNA + Xa (остаток) = Пептид + рNA.

Интерпретация результатов: терапевтическая область - 0,3-0,7 антиXa активность.

Профилактическая область - 0,1-0,3 антиXa активность.

Замечание: Образцы исследуемой плазмы с высоким уровнем активности гепарина могут полностью нейтрализовать фактор Xa в системе, что приводит к искажению результатов. Поэтому точные значения активности гепарина для таких образцов могут быть получены при разведении исследуемой плазмы в 4 или в 8 раз рабочим буферным раствором (Раствор 1). При этом результат, считанный из калибровочного графика, должен быть умножен на 2 или 4 соответственно.

Завышенные результаты могут быть получены при анализе образцов плазм больных:

·с повышенным содержанием липидов;

·с повышенным содержанием билирубина.

Набор реагентов для определения анти Ха активности гепарина коагулологическим методом (Реаклот-гепарин)

Состав набора: 1. Субстратная плазма, лиофильно высушенная, 2. Реагент 1 - смесь ф. Ха

èфосфолипидов, лиофильно высушенная, 3. Хлорида кальция 0,035M. Принцип метода: процесс происходит в два этапа:

1.инактивация избытка ф. Xa комплексом АТ III-гепарин;

2.измерение коагулологической активности остаточного ф. Xa на фосфолипидной мембране в присутствии ионов кальция.

Источником АТ III, фибриногена и ф. V служит субстратная плазма.

51

Интерпретация результатов: профилактическая область – 0,1–0,3 анти-Xa ед/мл. Терапевтическая область – 0,3–0,7 анти-Xa ед/мл.

Замечание: Образцы исследуемой плазмы с высоким уровнем активности гепарина могут полностью нейтрализовать фактор Xa в системе, что приводит к искажению результатов. Поэтому точные значения активности гепарина для таких образцов могут быть получены при предварительном разведении исследуемой плазмы субстратной плазмой в 2 или 4 раза. При этом результат, считанный из калибровочного графика, должен быть умножен на 2 или 4 соответственно.

Плазма-калибратор (3 уровня активности гепарина)

Плазмы-калибраторы с тремя различными уровнями активности гепарина применяют при количественном определении анти-Ха активности низкомолекулярного гепарина в плазме крови пациентов для контроля гепаринотерапии. Плазмы-калибраторы используются для построения калибровочных графиков при определении анти-Ха активности гепарина при использовании наборов Реахром-Гепарин или Реаклот-Гепарин НПО «РЕНАМ».

Плазма-калибратор, пулированная, собрана от 20 доноров в возрасте 20-40 лет, стабилизирована HEPES-цитратным буфером, содержит 3 уровня активности: 0; 0,3-0,5; 0,5-0,7 антиХа МЕ/мл низкомолекулярного гепарина, лиофильно высушена (1,0 мл).

Флаконы силиконированы для предотвращения контактной активации.

Плазма контрольная (2 уровня активности гепарина)

Проверку правильности построения калибровочных прямых необходимо осуществлять с помощью контрольных плазм, выпускаемых НПО «РЕНАМ». Плазма контрольная анализируется одновременно с исследуемой плазмой больного при выполнении соответствующего теста. Исследуемый контрольный материал должен укладываться в диапазон значений, указанных в паспорте на данную серию плазмы контрольной.

Плазма контрольная, пулированная, собрана от 20 доноров в возрасте 20-40 лет, стабилизирована HEPES-цитратным буфером, содержит 2 уровня активности: 0,3-0,5; 0,5-0,7 антиХа МЕ/мл низкомолекулярного гепарина, лиофильно высушена (1,0 мл). Флаконы силиконированы для предотвращения контактной активации.

НАБОРЫ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ ФИБРИНОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ КРОВИ

Количественное определение содержания фибриногена в плазме крови человека по методу Клаусса проводят с целью выявления наследственнной и приобретенной гиперфибриногенемии, гипо- и дисфибриногенемии.

Набор реагентов для определения фибринолитической активности плазмы крови человека (XIIа-зависимый фибринолиз)

Состав набора: 1.Буфер имидазоловый концентрированный, 2.Кальция хлорида 0,025М раствор, 3.Уксусная кислота 1%-й раствор, 4.Каолин 0,5% суспензия (5мл) – 2 фл.

Принцип метода: тест основан на измерении времени полного лизиса эуглобулиновой фракции, полученной из плазмы крови при осаждении в кислой среде и содержащей факторы свертывания крови и фибринолиза. Из плазмы крови выделяют эуглобулиновую фракцию, содержащую плазминоген, фибриноген, факторы свертывания и не содержащую ингибиторов фибринолиза; при добавлении кальция хлористого образуется сгусток фибрина, который лизируется плазмином за 5-12 минут реакция активируется фактором XIIа. Время от момента образования сгустка до его растворения выражает фибринолитическую активность исследуемой плазмы крови.

Интерпретация результатов анализа. В норме полный лизис эуглобулиновой фракции происходит в течение 5-12 минут.

При нарушении процесса фибринолиза время лизиса сгустка увеличивается. Замедление лизиса происходит за счет снижения уровня или недостаточной активации участвующих в реакции компонентов: ф.XII, прекалликреина, высокомолекулярного кининогена, плаз-миногена, либо наличием в плазме ингибиторов фибринолиза. В связи с высокой лабильностью этой системы ХПа-зависимый фибринолиз может нарушаться при многих видах патологии: у больных с тромбозами, при синдроме ДВС, заболеваниях печени, при заболеваниях, связанных с недостаточностью иммунной системы и др. При ДВС - синдроме начинается закономерное угнетение данного вида фибринолиза уже в 1 стадии.

52

Набор реагентов для определения активности плазминогена фотометрическим методом (Реахром-плазминоген)

Состав набора: 1. Буфер концентрированный, 2. Стрептокиназа, лиофильно высушенная, 3. Плазма-калибратор, лиофильно высушенная, 4. Хромогенный субстрат, лиофильно высушенный.

Принцип метода: метод определения активности плазминогена в образце плазмы основан на его способности образовывать комплекс со стрептокиназой, который гидролизует пептидный хромогенный субстрат. Количество высвобождаемого при этом паранитроанилина (рNА) прямо пропорционально активности плазминогена в образце плазмы.

Процесс идет по следующей схеме:

Плазминоген + стрептокиназа (избыток) = Комплекс Комплекс + Пептид-рNА = Пептид + рNА (желтый)

Образцы с высоким уровнем активности плазминогена могут выйти за пределы линейности, что приводит к искажению результатов. Поэтому точные значения активности плазминогена для таких образцов могут быть получены при разведении исходной плазмы в 40 раз. При этом результат, считанный из калибровочного графика, должен быть умножен на 2.

Завышенные результаты могут быть получены при анализе образцов плазм больных:

-с повышенным содержанием липидов;

-с повышенным содержанием билирубина.

В нормальной плазме здоровых лиц активность плазминогена составляет 80 - 135%. Дефицит плазминогена приводит к развитию инфаркта миокарда, легочной тромбоэмболии, тромбозу глубоких вен нижних конечностей. Лечение тромбозов введением активаторов плазминогена (стрептокинизы, урокиназы) зависит от исходного уровня плазминогена, который может быть активирован.

Набор реагентов для определения активности альфа-2 антиплазмина оптическим методом (Реахром-альфа-2 антиплазмин)

альфа-2- антиплазмин – ингибитор фибринолиза, быстро связывающий плазмин и необратимо ингибирующий его. Это одноцепочный гликопротеин, мигрирующий при электрофорезе как альфа- 2-глобулин. Врожденный дефицит альфа-2-антиплазмина ассоциирован с геморрагическими состояниями.

Снижение уровня альфа-2-антиплазмина наблюдается при заболеваниях печени и ДВСсиндроме, увеличение – в послеоперационном периоде.

Состав набора: 1. Плазмин, лиофильно высушенный. 2. Хромогенный субстрат, лиофильно высушенный 3. Плазма-калибратор, лиофильно высушенная. 4. Концентрат буфера.

Принцип метода: основан на способности альфа-2-антиплазмина нейтрализовать плазмин. Активность альфа-2-антиплазмина в плазме определяют, добавляя избыток плазмина. Ингибирование плазмина в плазме происходит пропорционально количеству добавленного плазмина. Оставшееся количество плазмина катализирует отщепление паранитроанилина от синтетического хромогенного субстрата. Адсорбция свободного паранитроанилина, определяемая при длине волны 405 нм, обратно пропорциональна активности альфа-2-антиплазмина в плазме.

Для 20 определений.

Завышенные результаты могут быть получены при анализе образцов с повышенным содержанием липидов и билирубина.

В нормальной плазме активность альфа-2-антиплазмина составляет 80-120%.

Набор реагентов для определения РАСТВОРИМЫХ ФИБРИН-МОНОМЕРНЫХ КОМПЛЕКСОВ (РФМК) в плазме

крови человека о-фенантролиновым методом (РФМК-тест)

Механизмы образования растворимых фибрин-мономерных комплексов:

1.активация процесса свертывания и быстрое нарастание концентрации тромбина приводит

êобразованию из фибриногена большого количества фибрин-мономеров, часть которых не успевает полимеризоваться, но может соединяться с молекулами фибриногена с образованием макромолекулярных растворимых комплексов;

2.в ответ на усиленное тромбообразование активируется фибринолиз, и в крови накапливаются продукты деградации фибрина, которые также соединяются с фибрин-мономерами, препятствуя их полимеризации.

Так образуются растворимые фибрин-мономерные комплексы (РФМК). Очевидно, что тест РФМК имеет решающее значение в диагностике ДВС-синдрома.

РФМК-тест предназначен для выявления растворимых фибрин-мономерных комплексов. Состав набора: 1. О-фенантролин, 2. Положительный контроль, 3. Отрицательный контроль.

53

Принцип метода: при добавлении к плазме крови больных с тромбинемией о-фенантролина в плазме появляются хлопья фибрин-мономерных комплексов (РФМК), являющихся одним из основных показателей внутрисосудистого свертывания крови при тромбозах, тромбоэмболиях и ДВС-синдроме. Чем выше концентрация РФМК, тем короче время по-явления хлопьев.

Оценка результатов. При внесении положительного контроля регистрируют появление ”снежной бури’’ в течение первых 10 сек после добавления о-фенантролина.

При внесении отрицательного контроля не должно наблюдаться появления хлопьев в течение первых 120 сек после добавления о-фенантролина.

Появление в исследуемой плазме в течение первых 120 сек хорошо видимых хлопьев свидетельствует о наличии в ней растворимых фибрин-мономерных комплексов.

Интерпретация результатов: у здоровых лиц хлопья, как правило, не образуются или образуются не ранее 70-150 сек. Отсутствие в течение 150 сек наблюдения четко выраженных непрозрачных частичек паракоагулята свидетельствует, что в данной плазме содержание РФМК не выше нормы (3-4 х 10-2 ã/ë).

Появление частичек паракоагулята в течение первых 50 сек наблюдения свидетельствует о высоком содержании РФМК в плазме крови больного, что характерно для активации свертывания крови.

НАБОРЫ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ АКТИВНОСТИ ФАКТОРОВ VIII, IX, XIII

Ô.VIII – это гликопротеид, локализованный, кроме плазмы, в печени, селезенке и лимфоцитах.

Âплазме фактор VIII циркулирует в нековалентно связанном комплексе с фактором фон Виллебранда. Фактор VIII активируется тромбином и ф. Xa, и является кофактором ф. IХa в процессе активации ф. X в присутствии фосфолипидов и ионов кальция.

Область применения: набор предназначен для измерения активности ф. VIII в: - в плазме доноров; - в плазме больных гемофилией А;

- в плазме больных с ингибиторной формой гемофилии А; - в плазме больных с тромбофилическими состояниями, обусловленными высоким уровнем

активности ф. VIII;

- в лечебных препаратах криопреципитата.

Набор реагентов для определения активности VIII фактора свертывания крови (Фактор VIIIтест)

Состав набора: 1. Эрилид (кефалин), 2. Каолин 0,5% суспензия, 3. Кальция хлорида 0,025М раствор, 4. Буфер имидазоловый концентрированный, 5. Плазма субстрат дефицитная по фактору VIII, 6. Плазма-калибратор.

Принцип метода: время свертывания в тесте АЧТВ смеси разведенной исследуемой и субстрат-дефицитной по фактору VIII плазм зависит только от активности ф. VIII в исследуемой плазме. При добавлении к разведенной исследуемой плазме субстрат дефицитной плазмы происходит коррекция всех факторов свертывания кроме ф. VIII.

Интерпретация результатов: уровень активности ф. VIII в плазме в норме и патологии.

54

За единицу активности принимается активность ф. VIII, содержащегося в пуле донорской плазмы, взятой не менее чем от 300 здоровых доноров мужчин. Активность ф. VIII выражается в международных единицах (МЕ) или в процентах, причем 1 МЕ/мл соответствует 100% активности.

Набор реагентов для определения активности IX фактора свертывания

крови (Фактор IX-тест)

Коагуляционный ф. IX – это витамин К-зависимый плазменный белок. Активированный ф. IXа участвует в активации ф. X в присутствии ионов кальция, анионных фосфолипидных мембран и кофактора VIIIa. Дефицит ф. IX является причиной гемофилии В – одного из наиболее распространенных врожденных заболеваний, проявляющихся кровотечением.

Область применения. Набор предназначен для измерения активности ф. IX в:

-в плазме доноров;

-в плазме больных гемофилией В;

-в плазме больных с ингибиторной формой гемофилии В;

-в плазме больных с тромбофилическими состояниями, обусловленными высоким уровнем активности ф. IХ.

Состав набора: 1. Эрилид (кефалин), 2. Каолин 0,5% суспензия, 3. Кальция хлорида 0,025М раствор, 4. Буфер имидазоловый концентрированный, 5. Плазма субстрат дефицитная по фактору IX, 6. Плазма-калибратор.

Принцип метода: время свертывания в тесте АЧТВ смеси разведенной исследуемой и субстрат дефицитной по ф. IX плазм зависит только от активности ф. IX в исследуемой плазме. При добавлении к разведенной исследуемой плазме субстрат дефицитной плазмы происходит коррекция всех факторов свертывания, кроме ф. IX.

Интерпретация результатов:

За единицу активности принимается активность ф. IX, содержащегося в пуле донорской плазмы, взятой не менее чем от 300 здоровых доноров мужчин. Активность ф. IX выражается в международных единицах (МЕ) или в процентах, причем 1МЕ/мл соответствует 100% активности.

Набор реагентов для определения активности фибрин-стабилизирующего фактора (ф. XIII) (Фактор XIII-тест)

Состав набора: 1. Фибриноген, очищенный от XIII ф., 2. Суспензия каолина 1%-ая, 3. Тромбин, 4. Кальция хлорида 0,1М раствор, 5. Буфер имидазоловый концентрированный, 6. Монохлоруксусная кислота 50%, 7. Плазма-калибратор.

Принцип метода: определение активности ф. XIII основано на оценке лизиса фибринового сгустка, содержащего различное количество исследуемого ф. XIII, в 5%-ой монохлоруксусной кислоте.

Интерпретация результатов: наименьшее разведение плазмы-калибратора, при котором фибриновый сгусток после инкубации с монохлоруксусной кислотой разрушается на мелкие фибриновые нити, обычно составляет 1:128 – 1:256. Уровень ф. XIII можно рассчитать по формуле:

Òïë

55

Àïë - активность ф. XIII в исследуемой плазме в %;

Àê - активность ф. XIII в плазме-калибраторе в % (указано в паспорте); Тïë – титр исследуемой плазмы; Тê – титр плазмы-калибратора.

В нормальной плазме здоровых лиц уровень активности ф. XIII составляет 60 – 150%.

НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВОЛЧАНОЧНОГО АНТИКОАГУЛЯНТА (ВА-ТЕСТ)

Набор реагентов ВА-тест предназначен для выявления в плазме крови человека волчаночного антикоагулянта, группы аутоантител класса IgG и IgM, направленных против фосфолипидов и вызывающих артериальные и венозные тромбозы различной локализации.

Название «волчаночный антикоагулянт» имеет условное значение, отражающее лабораторный феномен, а не патофизиологическую сущность этого вида антител.

Несмотря на то, что in vitro волчаночный антикоагулянт вызывает удлинение времени свертывания, in vivo его присутствие ассоциируется с развитием тромбозов. Это обусловлено тем, что волчаночный антикоагулянт вызывает изменения в противосвертывающих системах протеина С, бета-2-гликопротеина I, аннексина V и простациклина. Эти изменения повышают свертывающую активность крови и вызывают артериальные и венозные тромбозы различной локализации, повышают риск тромбоэмболии, могут быть причиной тромбоза плацентарных сосудов, неблагоприятно влияют на процесс имплантации зародыша, течение всей беременности, развитие плода, могут явиться причиной повторных самопроизвольных абортов во II триместре беременности.

Набор предназначен для проведения 40 макроили 80 микроопределений при расходе по 0,1 или по 0,05 мл реагентов на один анализ.

Принцип метода.

Метод качественный.

Метод основан на свойстве волчаночного антикоагулянта в системе in vitro ингибировать фосфолипид-зависимые коагуляционные тесты: активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), протромбиновое время (ПВ), время активированного ф. Х (ВА). В результате ингибирования время свертывания плазмы крови в этих тестах удлиняется.

Однако удлинение времени свертывания может быть вызвано не только неспецифическими ингибиторами (волчаночным антикоагулянтом), но также недостаточностью факторов свертывания или присутствием специфических ингибиторов факторов свертывания (например, к фактору VIII). Для выяснения природы ингибирования проводят 3 типа тестов:

1.Сначала в скрининговых тестах (АЧТВс, ПВс, ВАс) исследуют, происходит ли в анализируемой плазме увеличение времени свертывания при проведении этих тестов с реагентами с низким содержанием фосфолипидов (АЧТВс-реагент, ПВс-реагент, ВАс-реагент). Низкое содержание фосфолипидов усиливает чувствительность тестов к волчаночному антикоагулянту.

2.При удлинении времени свертывания в анализируемой плазме выясняют, связано это с дисфункцией факторов свертывания или с присутствием ингибиторов. Для этого проводят те же тесты (АЧТВс, ПВс, ВАс) с теми же реагентами (АЧТВс-реагент, ПВс-реагент, ВАс-реагент), но

ñдобавлением в инкубационную среду нормальной плазмы. Укорочение времени свертывания, происходящее при добавлении к исследуемой плазме нормальной плазмы, свидетельствует о том, что в исследуемой плазме наблюдается недостаточность отдельных факторов свертывания. При наличии в исследуемой плазме ингибиторов (специфических или неспецифических) время свертывания продолжает оставаться удлиненным.

3.Для установления наличия волчаночного антикоагулянта в исследуемой плазме проводят подтверждающие тесты (АЧТВп, ПВп, ВАп) с реагентами, содержащими повышенное количество фосфолипидов (АЧТВп-реагент, ПВп-реагент, ВАп-реагент). Инкубация исследуемой плазмы с такими реагентами приводит к потреблению антифосфолипидных антител, к которым относится волчаночный антикоагулянт, поэтому, при наличии в исследуемой плазме пациента волчаночного антикоагулянта, время свертывания после инкубации с избытком фосфолипидов укорачивается.

При наличии специфических ингибиторов свертывания в исследуемой плазме укорочения времени свертывания не происходит.

Состав набора:

Реагенты для скрининга: 1. АЧТВс-реагент, лиофильно высушенный реагент на основе фосфолипидов и эллаговой кислоты. 2. ПВс-реагент, лиофильно высушенный экстракт из мозга кролика (тромбопластин) в буфере со стабилизаторами. 3. ВАс-реагент, лиофильно высушенная смесь активатора ф. Х и фосфолипидов.

56

Реагенты для подтверждения: 1. АЧТВп-реагент, лиофильно высушенный реагент на основе избытка фосфолипидов и эллаговой кислоты. 2. ПВп-реагент, лиофильно высушенный тромбопластинкальциевый реагент в буфере со стабилизаторами. 3. ВАп-реагент, лиофильно высушенная смесь активатора ф. Х и избытка фосфолипидов.

Контрольный реагент: Плазма контрольная, содержащая волчаночный антикоагулянт, лиофильно высушенная.

Интерпретация полученных результатов: в нормальной плазме здоровых лиц: АЧТВс – 30-40 сек АЧТВп – 25-35 сек ПВс – 45-60 сек ПВп – 14-18 сек ВАс – 22-29 сек ВАп – 20-26 сек

При наличии в исследуемой плазме волчаночного антикоагулянта время свертывания может удлиниться хотя бы в одном тесте до следующих значений:

АЧТВс – 40-150 сек АЧТВп – 35-120 сек ПВс – 60-140 сек ПВп – 18-100 сек ВАс – 29-120 сек ВАп – 26-100 сек

Окончательное суждение о наличии волчаночного антикоагулянта в исследуемой плазме крови делают на основании расчета нормализованного отношения (НО).

НО в исследуемой плазме, не содержащей волчаночный антикоагулянт, менее 1,2.

НО в исследуемой плазме, содержащей волчаночный антикоагулянт, равно или более 1,2.

57

ЛИТЕРАТУРА

1.Бокарев И.Н., Аршинова А.В., Мельников А.П. Антифосфолипидный синдром и его современные проблемы. Тромбы, кровоточивость и болезни сосудов. 2007, ¹ 7. – с. 4 – 9.

2.Бокарев И.Н., Козлова Т.В., Попова Л.В. Лабораторная диагностика системы гемокоагуляции. Тромбы, кровоточивость и болезни сосудов. 2007, ¹ 7. – с.53 – 56.

3.Вавилова Т.В. Гемостазиология в клинической практике (пособие для врачей). – СПб.: Изд-во СПбГМУ им. Акад. И.П. Павлова; 2005. – 92 с.

4.Вавилова Т.В., Добровольский А.Б. Рекомендации по лабораторным методам исследования системы гемостаза. Тромбы, кровоточивость и болезни сосудов. 2007, ¹ 7. – с. 49 – 52.

5.Долгов В.В., Луговская С.А., Почтарь М.Е. Применение вакуумных систем BD Vacuteiner для лабораторного анализа. Методические рекомендации, РМАПО, М.- 2007. – 32 с.

6.Долгов В.В., Свирин П.В. Лабораторная диагностика нарушений гемостаза. - М.-Тверь:

ООО «Издательство «Триада», 2005. – 227 с.

7.Казначеева Е.И. Определение волчаночного антикоагулянта. Справочник заведующего КДЛ. – 2008, ¹ 6. – с. 7-10.

8.Кишкун А.А. Руководство по лабораторным методам диагностики. – М.: ГЭОТАР – Медиа, 2007. – 800 с.

9.Луговская С.А., Почтарь М.Е. Гематологический атлас. – М.-Тверь: ООО «Издательство «Триада», 2004. – 523 с.

10.Руководство по гематологии. Под ред. А.И. Воробьева. – М.: - Издательство «Ньюдиамед».

–2005. – Ò. 3, ñ. 9-147.

11.Schiffman F.J. (Шиффман Ф.Дж.) Патофизиология крови. – М.: Издательство БИНОМ. – 2007. – 446 с.

12.www.bsmu-all.narod.ru/mats/biochem. Схема свертывания крови.

Пособия НПО “РЕНАМ”

Пособие по изучению адгезивно-агрегационной активности тромбоцитов. – М.: - 2001. – 28 с.

Пособие для врачей-лаборантов по методам исследования плазменного гемостаза: фактор свертывания крови. – М.: - 2005. – 28 с.

Пособие для врачей-лаборантов по методам исследования плазменного гемостаза: АЧТВ, протромбиновый комплекс, тромбиновое время, фибриноген. – М.: - 2005. – 20 с.

Пособие для врачей-лаборантов по методам исследования плазменного гемостаза: противосвертывающая система, система фибринолиза. – М.: - 2005. – 24 с.

Пособие для врачей-лаборантов. Работа с отечественными коагулометрами и реагентами НПО “РЕНАМ” – М.: - 2007. – 44 с.

Клиническая и лабораторная диагностика наиболее часто встречающихся нарушений гемостаза.

– Ì. - 2008. – 42 ñ.

58

Приложение. НЕКОТОРЫЕ АЛГОРИТМЫ ДИАГНОСТИКИ НАРУШЕНИЙ ГЕМОСТАЗА

Дифференциальная диагностика нарушений свертывания

(В.М. Городецкий, 2008)

Показатели гемостаза при различных стадиях ДВС-синдрома

(по Е.П.Иванову, с изменениями)

59

Диагностический алгоритм развернутого синдрома ДВС

(предложен Подкомитетом по изучению ДВС Международного общества по тромбозу и и гемостазу, приведено по Т.В. Вавиловой, 2005, с изменениями)

1. Оцените риск развития ДВС: имеет ли Ваш больной заболевания или расстройства, которые могут явиться причиной ДВС?

Если ДА, продолжайте использование алгоритма. Если НЕТ, откажитесь от заполнения следующих граф.

2.Выполните основные коагуляционные тесты, определите: количество тромбоцитов, протромбиновое время, содержание фибриногена, растворимые фибрин-мономерные комплексы (РФМК) или продукты деградации фибрина.

3.Проведите расчет по результатам выполненных тестов

3.1.Количество тромбоцитов (>100 = 0; <100 = 1; <50 = 2)

3.2.Повышение РФМК или продуктов деградации фибрина (не повышены = 0; умеренно повышены = 2; значительно повышены = 3)

3.3.Удлинение протромбинового времени (< чем на 3 сек = 0; > 3 сек, но < 6 сек = 1; >6 сек = 2)

3.4.Концентрация фибриногена в плазме (> 1,0 г/л = 0; <1,0 г/л =1) 4.Подсчитайте сумму полученных баллов

5. Результат > 5 баллов соответствует острому синдрому ДВС, необходимо повторить исследование на следующий день.

Результат < 5 баллов предполагает (но не утверждает), что синдрома ДВС нет; следует повторить исследования в течение последующих 1-2 дней.

60