2 курс / Биохимия / Клиническая_биохимия_Арипов_А_Н_,_Фесенко_Л_М_2000

(если результаты содержания отдельных фракций хотят выразить в абсолютных процентах, т.е. г%).

Сухие электрофореграммы разрезают по числу фракций, ориентируясь на самый светлый участок между ними. Полоску каждой фракции помещают в отдельную пробирку и заливают 3 мл элюирующего раствора. К альбуминовой фракции добавляют 9 мл этого раствора, на основании чего величину оптической плотности первой пробирки умножают на 3. Можно в каждую пробирку вносить и по 5 мл элюирующего раствора. Контролем служит участок фореграмм, не содержащий белок. Содержимое пробирок осторожно встряхивают и оставляют в затемненном месте на 40 — 60 мин. Определение плотности испытуемых растворов производят на ФЭКе любого типа при зеленом светофильтре. В контрольные кюветы наливают элюирующий раствор, по которому устанавливают нулевое положение гальванометра. Растворы для элюации краски из окрашенных электрофореграмм (экстрагирующие растворы) имеют следующий состав:

а) для извлечения бромфенолового синего применяют 0,01 н раствор едкого натра (0,4 г NaOH растворяют в 1000 мл дистиллированной воды). Лучше использовать 5% раствор карбоната натрия (Na2C03), так как он дает более устойчивую окраску, чем раствор едкого натра;

б) для извлечения кислотного сине-черного красителя берут 0,1 н раствор едкого натра ( NaOH).

Определение процентного соотношения белковых фракций методом элюирования с последующим фотометрированием считается более точным, чем проведение его с помощью денситометра.

Расчет. Сумма цифр оптических плотностей составляет 100%, а каждая фракция — X от 100.

Пример. Оптическая плотность (Е) фракции альбуминов 0,52, глобулинов

: а, — 0,02, 02 — 0,05, р —0,10, у —0,15, в сумме равна 0,84 (100%), тогда

0,52 составит X, X = (0,52х100)/0,84 = 61,9%. Следовательно, альбумины составляют 61,9%.

Подобным же образом рассчитывают процентное содержание всех остальных фракций. Полученный ответ выражают в относительных процентах.

Следует отметить, что более правильным считается выражение результатов не в относительных, а в абсолютных процентах (г/л). К нему можно прийти, если сумму экстинций всех фракций отнести к концентрации общего белка сыворотки крови, тогда, пользуясь аналогичным расчетом, легко найти действительную концентрацию альбуминов и всех подфракций глобулинов.

Пример. Общее количество белка в сыворотке крови 82 г/л.

Сумма экстинций всех фракций составляет 0,84. На долю альбуминов приходится 0,52 ед оптической плотности. Если Е=0,84 соответствует 82 г/л, то Е=0,52-Х . Отсюда: Х=(82х0,52)/0,84=50 г/л; т.е. концентрация альбуминов в сыворотке крови равна 50 г%.

Нормальное соотношение белковых фракций в сыворотке крови:

Клинико-диагностическое значение: Повышение всех фракций может наблюдаться при гипогидратации или обезвоживании, снижение всех фракций — при массивной потере белка через кишечник (например, при гастроэнтеропатиях).

Содержание альбуминов повышается при: 1) избыточном введении альбумина; 2) состояниях, сопровождающихся гипогидратацией.

Содержание альбуминов понижается при пониженном синтезе и повышенном катаболизме: врожденная анальбуминемия, недостаток белка в питании, нарушения всасывания, кишечная непроходимость, диффузное поражение печени (цирроз, гепатоцеребральная дистрофия, острый и подострый некроз паренхимы печени, хронический активный гепатит), ревматическая лихорадка, кахексия, карциноматоз, панкреатит, коллагенозы.

В сыворотке крови увеличение содержания альбумина наблюдается после длительного наложения жгута. Вертикальное положение тела вызывает гемоконцентрацию и увеличение среднего уровня альбумина на 3 г/л.

Концентрация альбумина <20 г/л сопровождается отеками. Линии Мюрке (парные, тонкие, белые полоски, расположенные поперек ногтевой пластины) появляются при длительной тяжелой гипоальбуминемии (<22 г/л).

Содержание а,- глобулина повышается при острых, подострых и хронических воспалительных процессах, некоторых злокачественных опухолях. Понижается при: дефиците а, -антитрипсина, гипо-cXj - липидемии, в несвежих пробах сыворотки.

Содержание а2 -глобулина повышается при нефротическом синдроме, при многих подострых и хронических воспалительных заболеваниях, злокачественных опухолях, в стадии восстановления после термических ожогов. Понижается при сахарном диабете, иногда при панкреатите.

Содержание у - глобулина повышается при поликлональных гаммапатиях: хронических заболеваниях печени, хронических инфекциях, некоторых аутоиммунных заболеваниях; моноклональных гаммапатиях: миеломная болезнь, макроглобулинемия.

46

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Понижение: физиологическое — у детей в возрасте 3

— 4 месяцев, врожденная гипогаммаглобулинемия.

Примечания. 1. Широко применяется проведение электрофореза белков сыворотки крови на ацетилцеллюлозных пленках. Замена ими бумажных полос позволяет сократить время электрофоретического деления белков сыворотки крови с 7—20 часов до 1—1,5 часов. При нанесении 0,001—0,002 мл сыворотки выявляются до 8, резко очерченных фракции (преальбумины, альбумин, три фракции у- глобулинов).

2. Определение белковых фракций методом диск-электрофореза в полиакриламидном геле. Данным методом можно получить несколько десятков фракций белков. Трудности возникают при идентификации белков.

3. При отсутствии в лаборатории аппарата для электрофореза можно использовать метод, основанный на осаждении белковых фракций нейтральными солями, с последующим фотоэлектроколориметрическим определением степени мутности растворов (турбидиметрический метод).

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГАПТОГЛОБИНА

Гаптоглобин (НЬ) играет важную роль в обменных процессах и принимает активное участие в защитных механизмах организма. Содержание его в сыворотке крови динамично отражает функциональное состояние печени. Все известные для определения содержания гаптоглобина в крови методы можно разделить на две группы — косвенные и прямые. Косвенные методы основаны на свойстве п гпгоглобина взаимодействовать с гемоглобином, образуя стс, ^ильный комплекс. Связывание гемоглобина гаптоглобине < приводит к изменению свойств и структуры белков, ч и используется при определении концентрации НЬ. К 1; <тм методам определения концентрации гаптоглобина относится иммунологический метод, который основан на реакции НЬ с антителами, полученными против него, с последующим измерением нефелометрическим способом и радиальной иммунодиффузией образованного комплекса НЬ-антитело.

Чаще используются косвенные методы. К ним относятся пероксидазный, спектрофотометрический, риваноловый методы, гельфильтрация и электрофорез на различных носителях.

ПЕРОКСИДАЗНЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГАПТОГЛОБИНА

Принцип. В основу метода положено свойство гаптоглобина существенно увеличивать пероксидазную активность гемоглобина после его связывания в НрНЬ- комплекс, особенно в кислой области pH.

Реактивы. К Гваяколовый реактив. 1,86 г гваякола растворить в 400 мл воды, содержащей 50 мл ледяной уксусной кислоты, pH раствора довести до 4,0 с помощью 0, 1 М водного раствора едкого натрия. Общий объем 500 мл.

2. Раствор метгемоглобина. К водному раствору гемоглобина (3,3 г/л) добавить равный объем 0,4 мМ раствора феррицианида калия. Раствор метгемоглобина разбавить до концентрации 0,05±0,004 мМ. Для метНЬ человека этот раствор дает следующие значения поглощения % 578 нм — 0,219, 562 нм — 0,218, 542 нм — 0,335. Раствор метгемоглобина стабилен в течение почти полугода при -20°С.

Перекись водорода. 0,04±0,001н. Раствор перекиси водорода необходимо

готовить непосредственно перед использованием. Точную концентрацию

47

исходного концентрированного раствора перекиси водорода следует устанавливать методом перманнометрии еженедельно.

Подготовка пробы. Для превращения всего гаптоглобина сыворотки в НрНЬ- комплекс необходимо смесь равных количеств сыворотки и стандартного раствора метНЬ инкубировать при 37°С в течение 30 минут. В качестве контрольного раствора используется смесь равных количеств метНЬ и физиологического раствора, инкубированная в тех же условиях.

Ход определения. 0,2 мл смеси сыворотки и метНЬ внести в пробирку, содержащую 2,8 мл гваяколового реактива и термостатированную при 20°С. К реакционному раствору добавить 3 мл 0,04 н раствора перекиси водорода, затем перенести его в кювету спектрофотометра. Измерение при 470 нм начинать через 30 секунд после добавления перекиси водорода и продолжать в течение 10 минут, определяя поглощение раствора через каждые 30 с, если измерение проводится не на сканирующем спектрофотометре. Построить график зависимости поглощения раствора от времени. За единицу активности принимается скорость превращения гваякола в тетрагваякол в присутствии НрНЬ- комплекса в начальный момент реакции, которая определяется по тангенсу угла наклона на графике.

Концентрация гаптоглобина в исследуемом растворе определяется по калибровочному графику, который строится по данным, полученным при измерении пероксидазной активности стандартных растворов очищенных препаратов гаптоглобина. Такие растворы гаптоглобина, сохранившие свою функциональную активность, не всегда доступны, поэтому калибровочный график можно построить, используя смесь сывороток от 10 здоровых индивидуумов. Вначале определяют гемоглобинсвязывающую способность этой смеси сывороток. Для этого определяют пероксидазную активность растворов (не менее 5), состоящих из одного и того же количества метНЬ известной концентрации и увеличивающегося количества сыворотки. По полученным значениям строят график зависимости пероксидазной активности от количества сыворотки. На основании этого определяют гемоглобинсвязывающую способность 1 или 100 мл сыворотки. Концентрацию НЬ рассчитывают, исходя из того, что 1 моль метгемоглобина связывает 1 моль гаптоглобина. Затем определяют пероксидазную активность реакционных растворов, состоящих из точного количества метНЬ и увеличиваемого количества стандартной смеси сывороток, с известной концентрацией гаптоглобина. Строят график зависимости пероксидазной активности от концентрации Нр, которую выражают в виде гемоглобинсвязывающей способности. Этот график используется как калибровочный.

Примечание. Гемолизированные сыворотки дают завышенные результаты.

Нормальные значения. Суммарные гаптоглобины: 83—267 мг/100 мл

(0,83—2,67 г/л). Новорожденные: 0—20 мг/100 мл (0 — 0,2 г/л).

Влияющие факторы: прием андрогенов (анаболических стероидов) приводит к повышенным результатам.

Клиническое значение. Значения гаптоглобина служат чувствительным показателем гемолитических состояний. Острофазовый ответ при воспалительных заболеваниях и злокачественных опухолях лучше

выявляется при серийном определении гаптоглобина и других белков

48

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

«острой фазы».

Резкое повышение наблюдается при ожогах, нефротическом синдроме. Умеренное повышение отмечено при острых и хронических воспалительных состояниях, при икфекции (сепсис), злокачественных

образованиях, некрозе тканей.

Снижение синтеза: при тяжелом поражении паренхимы печени (плохой прогноз) и наследственное.

2.6. ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГАПТОГЛОБИНА

Метод основан на различии электрофоретической подвижности Hp-Hb- комплекса и свободного гемоглобина.

Для электрофореза используются различные носители: крахмальный гель (Smithies, 1955), агаровый гель (Огоновский, 1966), целлюлозноацетатные полоски (Pantlitschko, Weipple, 1968), полиакриламидный гель (Zwaan, Maki, 1968). Фореграммы окрашиваются реактивом, специфически проявляющем гемсодержащие белки. Концентрация гаптоглобина определяется одним из следующих способов: денситометрированием электрофореграммы или элюированием окрашенных фракций, соответствующих Нр-НЬ- комплексу и гемоглобину, вычислением отношения количества связанного в комплекс Нр-НЬ гемоглобина к сво-' бодному белку, определяя количество НЬ, требуемое для полного насыщения всего гаптоглобина сыворотки. Для этого проводится электрофорез одновременно нескольких смесей, содержащих равные количества одной и той же сыворотки и разные количества гемоглобина. Появление свободного гемоглобина на фореграмме свидетельствует о полном насыщении всего гаптоглобина сыворотки.

2.7. КАЧЕСТВЕННЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГАПТОГЛОБИНА

Качественный метод определения гаптоглобина в сыворотке крови заключается в электрофоретическом разделении на крахмальном, полиакриламидном или агаровом гелях. Фореграммы окрашиваются на гемсодержащие компоненты, при этом проявляются Нр-НЬ-комплекс и свободный гемоглобин. Электрофоретическая подвижность гемоглобина намного выше, чем Hp-Hb-комплекса. Ок-

раска фореграмм проводится следующим образом: гели после электрофореза погружают в 1% раствор бензидина в 10% уксусной кислоте. На электрофореграмме появляются голубые полосы, интенсивность которых зависит от концентрации НЬ и Нр-НЬ. Однако окраска нестойкая и быстро исчезает особенно при низком содержании гаптоглобина. Более прочную окраску дает фиксация в 0,001% растворе амидо-черного. Для этого гели после окраски бензйдином быстро промывают дистиллированной водой и опускают в 0,001% раствор амидо-черного.

Для окрашивания Hp-Hb-комплекса можно использовать также 0,1% раствор о-дианизидина в 0,5% уксусной кислоте.

Пробы колловдоустойчивости белков сыворотки крови

В клинико-диагностических лабораториях широко используются методы, при которых простыми коллоидными реакциями косвенно обнаруживаются изменения в составе белков сыворотки крови. Все эти методы основаны на изменениях, наступающих в коллоидной устойчивости сыворотки, поэтому и

49

получили известность под названием проб коллоидной устойчивости. Эти пробы, благодаря несложной технике их постановки и достаточной информативности, получили широкое распространение в диагностической практике.

2.8. ТИМОЛОВАЯ ПРОБА

Принцип. При взаимодействии сыворотки с тимолововероналовым буфером появляется помутнение вследствие образования глобулино-тимоло- лйпидного комплекса.

Реактивы.

1.10% спиртовый раствор тимола. 10,0 г очищенного тимола растворяют

в96° этиловом спирте в мерной колбе на 100 мл.

Очистка тимола. 100,0 г тимола растворяют в 100 мл 96° этилового спирта, фильтруют. К фильтрату прибавляют 1 л холодной дистиллированной воды, сильно встряхивают и оставляют стоять 20 минут. Затем фильтруют; кристаллы, оставшиеся на фильтре, промывают 2 раза холодной дистиллированной водой, сушат — вначале на фильтровальной бумаге, потом — в течение 2—3 дней в эксикаторе над безводным хлористым кальцием до постоянного веса.

2. Буферный раствор. 2,76 г веронала (точно) и 2,06 г мединала (веронала натрия) доводят до 1 л дистиллированной водой. Хранить в холодильнике; при появлении осадка раствор не годен к употреблению.

3.Тимол ово-вероналойый буфер pH 7,55-7,6. В мерной колбе на 100 мл смешивают 80 мл буферного раствора и 1 мл 10% спиртового раствора тимола, встряхивают и доливают буферным раствором до метки. Проверяют pH.

4.Стандартный раствор:

а) раствор хлористого бария. 1,175 г хлористого бария ВаС12 х 2Н20 доводят до 100 мл дистиллированной водой;

б) 0,2 н серная кислота; в) суспензия сернокислого бария: 3 мл хлористого бария наливают в

мерную колбу на 100 мл и доводят до метки 0,2 н серной кислотой при температуре +10°С (при этой температуре размеры частиц преципитированного сернокислого бария дают относительно стабильный результат). Суспензию сернокислого бария готовят перед употреблением.

Ход определения.

К 4,5 мл тимолово-вероналового буферного раствора прибавляют 0,075 мл сыворотки, оставляют стоять 30 минут и затем измеряют при длине волны 630—690 нм (красный светофильтр) против тимолово-вероналового буфера, в кюветах с толщиной слоя 10 мм. Реакцию проводят при комнатной температуре.

Расчет ведется по калибровочному графику.

Построение калибровочного графика. Из стандартного раствора сернокислого бария (суспензии) готовят разведения, соответствующие единицам помутнения по Shank и Hoagland (S-H) (см. табл.2.4).

50

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Таблица 2.4

Растворы для построения калибровочного графика

Стандартные растворы смешивают, хорошо встряхивают и тотчас же измеряют при длине волны 630—-690 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм против воды.

Норма — 0—4 ед (S-H).

Клинико-диагностическое значение. Тимоловая проба выше нормы

(положительная) отмечается при гепатитах различной этиологии, хронических инфекционных заболеваниях

(туберкулезе, бруцеллезе), коллагенозах, т.е. заболеваниях, сопровождающихся диспротеинемией с увеличением у-глобулинов.

При механических желтухах, неосложненных вторичным гепатитом, тимоловая проба остается в пределах нормы (отрицательная).

СУЛЕМОВО-ОСАДОЧНАЯ РЕАКЦИЯ (СУЛЕМОВАЯ ПРОБА ПО ГРИНСТЕДТУ)

Принцип. Сулема в присутствии мелкодисперсных коллоидов (белков) образует коллоидный раствбр солей ртути. Нарушение дисперсности белковых фракций сыворотки крови вызывает осаждение грубодисперсных частиц.

Реактивы. 1.0,1 % раствор сулемы. Готовят из кристаллической сулемы, растворяя соль в горячей дистиллированной воде. 2. 0,85% раствор хлористого натрия.

Ход определения. К 0,5 мл негемолизированной сыворотки крови добавляют 1 мл физиологического раствора и титруют 0,1 % раствором сулемы до появления стойкого помутнения. Результаты сулемовой реакции выражают количеством мл раствора сулемы, израсходованного на титрование.

Нормальные значения. У здоровых людей на титрование идет 1,6 — 2,2 мл Сулемы. Еслй на титрование уходит меньшее количество сулемы, реакция расценивается как положительная.

Клинико-диагностическое значение. Повышена при: заболеваниях печени, особенно циррозах, при хроническом нефрите, нефрозе, пневмонии, туберкулезе легких, миеломной болезни, инфекционных заболеваниях и др.

2.9. ПРОБА ВЕЛЬТМАНА

Принцип. При добавлении к сыворотке крови раствора хлористого кальция и нагревании происходит нарушение коллоидоустойчивости белков сыворотки.

Реактивы. 0,5% раствор хлористого кальция. Готовят из 10% раствора хлористого кальция (СаС12 • 6Н20) , что соответствует 5% раствору безводного хлористого кальция. Точно определить вес хлористого кальция невозможно из-за его гигроскопичности; поэтому концентрацию раствора

51

хлористого кальция определяют по относительной плотности. 5% раствор безводного хлористого кальция имеет относительную плотность 1,040.

Для приготовления 10% раствора хлористого кальция 99,14 г СаС12 - 6Н20 доводят до 1 литра дистиллированной водой и проверяют относительную плотность, доводя до 1,040. Из полученного раствора путем разведения в 10 раз готовят 0,5% раствор хлористого кальция.

Приготовление 0,5% раствора из ампульного 10% раствора хлористого кальция. Если относительная плотность ампульного раствора хлористого кальция — 1,040, то 0,5% раствор готовят разведением ампульного раствора в 10 раз.

Ход определения. К 0,1 мл сыворотки прибавляют 4,9 мл воды. Перемешивают путем опрокидывания пробирки и прибавляют 0,1 мл 0,5% хлористого кальция, встряхивают и нагревают пробирку над пламенем до однократного закипания смеси. Пробирку смотрят на свету: если хлопьев нет, то в эту же пробирку добавляют еще 0,1 мл хлористого кальция и вновь кипятят. Процедуру повторяют, пока не выпадут хлопья.

Результат оценивают, подсчитывая общее количество пошедшего на реакцию хлористого кальция.

В норме коагуляция наступает при прибавлении 0,4— 0, 5 мл хлористого кальция.

Примечание. Сыворотка должна быть негемолизированной.

Клинико-диагностическое значение. Если в ходе исследования затрачивается менее 0,4 мл раствора хлористого кальция, то это относят за счет повышения содержания у-глобулинов в сыворотке крови, что характерно, прежде всего, для хронических заболеваний — цирроза, малярии, хрони- . ческой пневмонии, плеврита, туберкулеза легких.

Если затрачивается больше 0,5 мл раствора хлористого кальция, то это связано с увеличением а,- и а2- глобулинов сыворотки (появлением в крови белков «острой фазы»

— СРБ, гаптоглобина). Отмечается при острых воспалительных процессах" — активная фаза ревматизма, экссудативный туберкулез легких, нефриты, нефрозы, острые инфекционные заболевания, злокачественные опухоли в стадии метастаз, перитонит, инфаркт миокарда.

2.10. ОСАДОЧНАЯ РЕАКЦИЯ НА РАК - ОРР (МЕТОД В.П.КОРОТКОРУЧКО)

Принцип. Под действием соляной и азотной кислот определенной концентрации белки сыворотки крови здоровых людей подвергаются обратимой денатурации, а парапротеинемический белок сыворотки крови раковых больных — необратимой денатурации. В последнем случае в реакционной смеси

образуются белковые коагулянты, что проявляется стойкой мутностью различной степени интенсивности.

Реактивы.

1. Раствор соляной кислоты с относительной плотностью при 20° С— 1,0039—1,0055. Можно готовить из фиксанала НС1 (0,1 г-э), растворив содержимое ампулы дистиллированной водой в мерной колбе на 500 мл. Готовность реактива определяют, измеряя относительную плотность

52

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

раствора ареометром.

2. Раствор азотной кислоты с относительной плотностью при 20° С 1,0450—1,0575. Готовность реактива определяют с помощью ареометра или, что еще лучше — пикнометра.

Ход определения. В химическую пробирку вносят 0,1 мл сыворотки крови, добавляют туда 0,5 мл соляной кислоты, легко встряхивают до полного перемешивания . Через 30 секунд добавляют 0,2 мл азотной кислоты, слегка встряхивают и через 20 секунд в реакционную смесь вносят 1,5 мл дистиллированной воды; Снова встряхивают до полного перемешивания и оставляют в штативе на 1—3 минуты, после чего определяют результат реакции. Временные промежутки, указанные в методике, необходимо строго выдерживать!

Оценка результатов. Можно проводить визуально в отраженном свете, либо с помощью фотоэлектроколориметра. У здоровых людей через 1—3 минуты реакционная смесь освобождается от мутности и становится прозрачной за счет обратимости денатурации белков, что отмечается как отрицательная ОРР.

У больных раком в реакционной смеси наблюдается стойкая мутность различной степени выраженности — от легкой опалесценции до крупного белкового коагулянта. Это означает положительную ОРР. Визуальную оценку можно заменить оценкой при помощи фотоэлектроколориметра. Колориметрирование выполняется как и любое нефелометрическое исследование при красном светофильтре (590 — 690 нм) в кюветах с толщиной слоя 3 мм. Полученную величину экстинции рекомендуется умножить на коэффициент “100” и результат реакции выражать в условных единицах (у.е.), при этом возможно 5 типов реакции, как и при визуальной оценке (табл. 2.5).

Типы реакций ОРР

53

Таблица 2.3

Норма.

Отрицательная ОРР.

Клинико-диагностическое значение. В крови раковых больных Короткоручко В.Н. обнаружил белок, который не выявляется в крови здоровых людей и людей с различными незлокачественными заболеваниями. То есть в данном случае имеет место патология со стороны белков крови по типу парапротеинемии. Метод обнаружения этого белка получил название осадочная реакция на рак (ОРР), а сам белок назван белком, положительно реагирующим в осадочной реакция на рак (БПРОРР), или белком, характерным для злокачественного роста. Было установлено, что данный белок по иммунологическим и физико-химическим параметрам принадлежит к иммуноглобулинам класса G.

Следует иметь в виду, что ОРР не является абсолютно достоверной. ОРР с сывороткой крови больных с неоперабельными формами рака, как правило, отрицательная. Ложноположительная ОРР нередко сопутствует целому ряду тяжелых хронических заболеваний: циррозу печени, туберкулезу, ревматизму. Ее могут спровоцировать серотерапия, вакцинация, химио- и рентгенотерапия. Поэтому при интерпретации результатов ОРР всегда необходимо соотносить полученные лабораторные данные с клиническим состоянием больного. Без этого трактовка ОРР несостоятельна!

Примечание. 1 Кровь для исследования берут натощак после двухдневной подготовки больного. Перед исследованием необходимо исключить прием антибиотиков, барбитуратов, анальгетиков, алкогольных напитков, серотерапии, вакцинации, химио- и рентгенотерапии.

2. Гемолизированные и липемические сыворотки для постановки реакции не пригодны.

Принцип. Тепловая коагуляция разведенной плазмы крови вызывает различной степени помутнение, которое прямо пропорционально содержанию в ней фибриногена.

Исследуемый материал. Плазма (цитрат натрия). Проба стабильна несколько месяцев, если хранить при температуре -20°С.

Реактивы. 1. Хлористый натрий, 10% раствор.

2. Стандартный раствор сульфата бария. Для приготовления его растворяют 1,15 г BaS04 -2Н,0 в 100 мл воды;

3 мл данного раствора переносят в колбу объемом 100 мл и доводят объем водой до метки. Мутность этого раствора принимается за 20 единиц.

Ход определения. Берут две пробирки, в каждую из которых вносят 0,2 мл плазмы, полученной из оксалатной или гепаринизированной крови и 3 мл 10% раствора хлористого натрия, затем смешивают. Одну пробирку помещают в водяную баню при температуре 56° С на 15 минут. Затем охлаждают смесь до комнатной температуры. После этого смесь колориметрируют на спектрофотометре в кювете объемом 1 мл на волне 650 нм или на ФЭКе (красный фильтр). Смесь во второй пробирке, не подвергшейся нагреванию, служит контролем.

‘ Единица мутности стандартного раствора сульфата бария (1 единица Кункеля) эквивалентна 42,8 мг фибриногена в 100 мл плазмы крови.

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/