29. Иммунохимический анализ: реакции агглютинации, преципитации. Варианты постановки реакций.

(см. методичку)

Реакция агглютинации применяется, если антигены представляют собой крупные корпускулярные частицы в виде цельных бактериальных клеток или находятся на поверхности каких-либо корпускулярных носителей. Реагируя со специфическими антителами, частицы, несущие антиген, склеиваются между собой, образуют конгломераты и выпадают в осадок. Реакция считается положительной, если в результате реакции образуется хлопьевидный осадок (агглютинат).

Вариантами реакций агглютинации являются:

1. Прямая реакция агглютинации. При этом антитела реагируют с естественными структурами – носителями антигенов, например, бактериями.

2. Непрямая или пассивная реакция агглютинации – растворимые антигены бактерий искусственно связываются с корпускулярным инертным носителем. В качестве носителей могут использоваться эритроциты животных, частицы латекса и т.д. При добавлении специфических антител происходит взаимодействие антигенов с антителами, образование конгломератов из носителей и выпадение последних в осадок. Реакция непрямой агглютинации отличается более высокой чувствительностью, по сравнению с реакцией прямой агглютинации.

Способы постановки реакции агглютинации:

1. Реакция агглютинации на стекле.

В микробиологии применяется для изучения антигенной структуры МО (серотипирование).

Реакция ставится на предметном стекле, в разные участки которого помещают каплю физиологического раствора и каплю агглютинирующей сыворотки. Затем бактериальной петлей в каждую каплю отдельно вносят небольшое количество изучаемой бактериальной культуры и перемешивают круговыми движениями до получения равномерной взвеси. Учет результатов проводится через 1-3 минуты. Положительной считается реакция с образованием крупных хлопьев агглютината в капле с сывороткой, на фоне равномерной мутности в каше с физиологическим раствором.

2. Развернутая реакция агглютинации.

Реакция применяется для обнаружения специфических антител в сыворотке крови больных или (реже) для количественного определения антигенов. Для постановки реакции готовят серию последовательных двукратных разведений сыворотки в физиологическом растворе или фосфатном буфере. Используют пластиковый (полистероловый) планшет с лунками или пробирки.

Реакция преципитации, в отличие от агглютинации, антигеном служит растворимое соединение (коллоидные растворы). При взаимодействии антигенов со специфическими антителами образуются иммунные комплексы, что внешне проявляется в образовании мелкодисперсного осадка – преципитата, вызывающего помутнение среды.

Варианты постановки преципитации:

1. Рп в жидкой фазе (кольцепреципитация).

На дно тонкой пипеткой вносят диагностическую сыворотку, затем наслаиваю раствор с антигеном. Если присутствует антиген – на границе двух жидких сред образуется муно-белое опалесцирующее кольцо преципитата.

2. Рп в твердой среде (пример, двойная иммунодиффузия по Оухтерлони).

Твердую фазу (агаровый гель) наносят на предметное стекло и дают застыть. Делают лунки в геле, в одну вносят антиген, во вторую – антитела. В участке геля, где соотношения антигена и антитела оптимальны, образуется непрозрачная белая линия («дуга») преципитации.