Бабьева И. П., Чернов И. Ю. Биология дрожжей. М. Товарищество научных изданий КМК, 2004

размножению. Сходный цикл наблюдается и у почвенных дрожжей

Williopsis saturnus.

Гапло-диплоидные дрожжи

Существуют дрожжи, у которых вегетативное размножение может происходить как в гаплоидной, так и в диплоидной фазах (рис. 33). Длительностьтойилидругойфазызависитотвидаиотусловийроста. Среди этих дрожжей есть как гомоталличные, так и гетероталличные виды.

Рис. 33. Жизненные циклы гапло-диплоидных аскомицетовых дрожжей; обозначения см. на рис. 31.

Saccharomyces cerevisiae. Эти гомоталличные дрожжи вегетируют преимущественно в диплоидном состоянии, но у них имеется короткая вегетативная гаплоидная фаза. Диплоидная клетка в условиях дефицита легкодоступныхисточниковуглеродапрекращаетпочковаться, иядроее делится мейотически. В результате она превращается в аск с 4 гаплоидными аскоспорами, которые после освобождения из аска прорастают и образуютгаплоидноепоколение. Гаплоидныеклеткиобычномельчедиплоидныхиимеютболееокруглуюформу. Шрамыпочкованияунихсближены, почки образуются группами в одном локусе. После нескольких циклов почкования две клетки конъюгируют и сливаются, восстанавливая диплоидное состояние.

Metschnikowia pulcherrima. Диплоидныеклеткиэтоговидаразмножаются вегетативно почкованием, но отдельные клетки увеличиваются в

51

размерах, образуют утолщенные оболочки и превращаются в диплоидныехламидоспоры. Припрорастаниихламидоспорыееядромейотически делится, и непосредственно из хламидоспоры при ее прорастании обра- зуетсяаскс1-2 игловиднымиаскоспорами. Зрелыеаскоспорыпрорастаютидаютначалогаплоиднымпочкующимсяклеткам. Гаплоидныеклетки после копуляции восстанавливают диплофазу. Все эти стадии довольно стабильны, поэтому в культурах Metschnikowia pulcherrima присутствуют одновременно мелкие гаплоидные клетки, более крупные диплоидные, а также хламидоспоры.

Базидиомицетовые дрожжи

Вотличие от аскоспоровых дрожжей, все дрожжи, которые относят

кбазидиомицетам, образуют экзогенные половые споры (базидиоспоры). Плазмогамия и кариогамия, как правило, разделены во времени и значительную часть жизненного цикла занимает дикариотическая фаза, представленная дикариотическим мицелием с пряжками. Большинство видовгетероталличныипоэтомумногиеизнихдолгоевремябылиизвестны только в гаплофазе как несовершенные дрожжи.

Базидиомицетовыегрибы, которыеимеютдрожжевуюстадиювцикле развития, часто называют гетеробазидиомицетами. Это название было предложено Н.Патулляром еще в 1900 г. Основной признак таких грибов - наличие септированной или глубокорасчлененной базидии. Сейчас этот термин сохраняют для диморфных базидиомицетовых грибов с гаплоидной дрожжевой стадией. Их дикариотический мицелий часто паразитирует на растениях или плодовых телах других грибов.

Активноеисследованиежизненныхцикловбазидиомицетовыхдрож- жейначалосьлишьвконце60-х- начале70-хгодовXX в., послетогокак японский миколог Исао Банно опубликовал результаты открытия полового цикла у хорошо известных и ранее считавшихся несовершенными «красных» дрожжей Rhodotorula glutinis. Ему удалось подобрать типы спариваниясредибольшогочислапроверенныхштаммов, иврезультате их скрещивания он наблюдал образование дикариотического мицелия, на котором формировались структуры, морфологически сходные с хламидоспорами, тоестькрупныеклеткиссильноутолщеннымиоболочками и большим запасом внутриклеточных липидов. Именно в них затем

52

происходилослияниедвухядерипоследующиймейозсвосстановлением гаплоидного состояния. Эти клетки получили название телиоспор. При прорастании они образовывали промицелий с поперечными септами, делящими его на 4 клетки. Эти клетки отпочковывали гаплоидные споридии, которыеможнобылоотождествитьсбазидиоспорамигетеробазидиальных грибов. Весь наблюдаемый цикл оказался очень сходным сцикломразвитияголовневыхгрибов. СовершеннаястадияRhodotorula glutinis была названа Банно Rhodosporidium toruloides (рис. 34). Позже сходный цикл был описан для некоторых баллистоспоровых дрожжей и длянесколькихвидовнесовершенногородаCandida. Ихтелиоспоровые стадии получили соответственно родовые названия Sporidiobolus и Leucosporidium. Сейчас похожие полные или не завершенные жизнен-

Рис. 34. Примеры жизненных циклов базидиомицетовых грибов с анаморфными дрожжевыми стадиями (диморфных базидиомицетов); стадии: В– вегетативноеразмножение, П – плазмогамия, ДМ – дикариотическиймицелий, К– кариогамия, М – мейоз, Б – базидия.

53

ные циклы известны для многих базидиомицетовых дрожжей. Они различаютсяформойтелиоспор (рис. 35), характеромихпрорастанияиморфологией образующегося при этом промицелия (рис. 36).

Рис. 35. Телиоспоры у базидиомицетовых дрожжей: 1 – Rhodotorula fujisanensis, 2 – Udeniomyces puniceus, 3 – Rhodosporidium babjeviae.

Рис. 36. Прорастание телиоспор промицелием со споридиями у различных видов базидиомицетовых дрожжей: 1 – Leucosporidium scottii, 2- Mrakia frigida, 3 – Cystofilobasidium capitatum.

Иной тип жизненного цикла базидиомицетов с дрожжевой анаморфой известен для дрожалковых грибов порядка Tremellales, относящихся к группе гименомицетов (см. рис. 34). Эти грибы известны достаточ-

54

но давно, так как в онтогенезе этих организмов есть стадия образования макроскопических плодовых тел (рис. 37), которые в природе обычно развиваются на старой древесине, на стволах мертвых деревьев. То, что базидиоспорытремелловыхгрибовспособныкпочкованию, былозамечено микологами еще в конце XIX в., однако наличие самостоятельной дрожжевой фазы в цикле развития тремелловых было установлено после детального изучения видов рода Tremella в 1960-х гг. В культурах отдельныебазидиоспорыгетероталличныхвидовдаютначалодрожжевым стадиям. Мицелий обычно развивается только при смешивании штаммовсовместимыхтиповспаривания. Смешениесоответствующихтипов спаривания приводит к быстрой реакции клеток на выделяющиеся феромоны; почкованиепрекращается, развиваютсяконъюгационныетрубки, через которые клетки копулируют, происходит плазмогамия и развивается мицелиальная дикариотическая стадия. У многих видов в подходящихусловияхвскорепослеформированиядикариотическогомицелия начинается развитие плодовых тел. Плодовые тела обычно студенистые

Рис. 37. Плодовые тела различных видов дрожалковых грибов.

55

или хрящеватые, в виде бесформенных комочков или корочек. В плодовых телах образуются 2-4-клеточные базидии. Каждая клетка базидии несет почковидную, пассивно освобождающуюся спору или трубчатый вырост (эпибазидию), на котором формируются базидиоспоры. Освободившиеся базидиоспоры могут размножаться вегетативно почкованием или формированием баллистоспор.

В70-хгодахамериканскойисследовательницейКвон-Чангбылобнару- жен сложный жизненный цикл с образованием несептированных и нерасчлененныхбазидийудрожжейCryptococcus neoformans (см. рис. 34), которыедолгоевремябылиизвестнытольковнесовершеннойформеипривлекали большое внимание медицинских микологов как возбудители опасной болезни - криптококкоза. Серотипы этого вида, обозначаемые A, B, C и D, оказались штаммами разных типов спаривания, которые при скрещивании формировалидикариотическиймицелийснесептированнымибазидиямиголобазидиями. Набазидиивозникалиапикальныевздутияинанихформировались гаплоидные базидиоспоры путем базипетального почкования с образованием цепочек. Совершенная стадия этих дрожжей была названа Filobasidiella neoformans. Позже подобные жизненные циклы были найдены и у некоторых других представителей рода Cryptococcus, в частности у

Cryptococcus uniguttulatus (=Filobasidium uniguttulatum).

Характеристикижизненногоциклаиграютбольшуюрольвсистематикебазидиомицетовыхдрожжей. Однакооченьчастоубазидиомицетовых дрожжей, изолируемых из природных местообитаний, не удается наблюдатьполныйжизненныйциклприкультивированииналабораторныхсредах, поэтомуихидентификацияиклассификациявызываютбольшие трудности. Значительные успехи в систематике таких анаморфных базидиомицетовых дрожжей достигнуты в последние десятилетия, особенно в связи с внедрением в таксономическую практику молекулярнобиологических методов. Как оказалось, группирование базидиомицетовых дрожжей на основе молекулярно-биологических признаков, в частности нуклеотидных последовательностей рРНК, часто не совпадает с характеристиками их жизненного цикла, особенно такими, как способность к образованию телиоспор, морфология базидий. Поэтому классификация базидиомицетовых дрожжей еще далека от завершенности и требует дальнейших исследований.

56

ОСОБЕННОСТИ МЕТАБОЛИЗМА

Хотя дрожжи и не так разнообразны по своему метаболизму, как бактерии, различные виды дрожжей могут катаболизировать разные соединения углерода и азота и образовывать различные конечные продукты (рис. 38).

Рис. 38. Общая схема метаболизма дрожжей.

57

Спиртовое брожение

Наиболееизвестноесвойствомногихдрожжейспособностькспиртовому брожению. Многие виды дрожжей могут переключаться с бродильного метаболизма на дыхательный и обратно в зависимости от условий: при наличии кислорода брожение ингибируется и дрожжи начинают дышать, в отсутствие кислорода включается механизм спиртового брожения. Так как кислородное дыхание - энергетически более выгодный процесс, чем брожение, то выход биомассы дрожжей в расчете на единицу используемого субстрата выше при выращивании их в аэробныхусловиях, чемванаэробных. Этоявлениеназываетсяэффек-

том Пастера.

Спиртовоеброжениеможетидтинетолькованаэробныхусловиях. Если выращиватьдрожживприсутствиикислорода, нопривысокомсодержании глюкозы в среде, то в этом случае дрожжи также сбраживают глюкозу. Такимобразом, глюкозаподавляетпроцессыанаэробногодыхания. ЭтоявлениеполучилоназваниеэффектаКребтри, иликатаболитнойрепрессии.

Многие дрожжи вообще не способны бродить. По соотношению между этими двумя процессами в метаболизме можно выделить следующие группы дрожжей.

1.Дрожжи, существующие только за счет брожения и не способные расти в аэробных условиях. К ним относится, например, вид Arxiozyma telluris, обитающий в кишечном тракте грызунов.

2.Активные бродильщики: интенсивно сбраживают различные субстраты, но в аэробных условиях переключаются на дыхательный обмен. Представители- Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces pombe.

3.Слабые бродильщики - в основном существуют за счет аэробного дыхания, но в анаэробных условиях могут бродить, однако значительно менее интенсивно, чем виды из предыдущей группы. Это аскомицетовыедрожжиизродовPichia, Debaryomyces, атакжевсеспособныекброжению базидиомицетовые дрожжи.

4.Дрожжи, существующие только за счет дыхания и не способные расти в анаэробных условиях. К этой группе относятся аскомицетовые дрожжиизродаLipomyces имногиенесовершенныедрожжибазидиоми-

цетового аффинитета - Cryptococcus, Rhodotorula, Sporobolomyces.

58

При росте в анаэробных условиях дрожжи превращают глюкозу в пировиноградную кислоту по гликолитическому пути, получая 2 моля АТФ на 1 моль глюкозы. Процесс гликолиза включает реакцию окисленияфосфоглицериновогоальдегида, вкоторойобразуетсявосстановленный пиридиннуклеотид НАД·Н. В аэробных условиях последний окисляетсячерезсистему переносаэлектронов кислородом. Вотсутствиеже кислорода для сохранения окислительно-восстановительного равновесия необходимо окислить НАД·Н каким-либо другим путем. В дрожжевой клетке это окисление включает декарбоксилирование пирувата и превращение образовавшегося при этом ацетальдегида в этанол с одновременным окислением НАД·Н до НАД+. Образовавшийся НАД+ может принимать участие в окислении следующей молекулы фосфоглицеринового альдегида (рис. 39).

Ход брожения может сильно меняться в зависимости от условий. Если, например, в культуру бродящих дрожжей добавить бисульфит, то образующийся из пирувата ацетальдегид связывается в бисульфитный аддукт, тем самым блокируя образование этанола. Дрожжевые клетки в ответнаэтоиспользуютдляокислениянакапливающегосяНАД·Нполовину образующегося триозофосфата. Последний, восстанавливаясь, превращается в глицерин. Хотя при этом суммарный выход АТФ становитсяравнымнулю, итакое брожение неможетобеспечитьростклеток, его можно использовать для промышленного получения глицерина.

В типичном же случае основные продукты спиртового брожения - этанолиуглекислота, однако, вмикроколичествахобразуетсятакжемножество побочных соединений.

Субстраты брожения. Все бродящие дрожжи сбраживают глюкозу и фруктозу, поскольку именно с этих сахаров начинается гликолитическое расщепление. Кроме глюкозы и фруктозы могут сбраживаться другие соединения, которые легко превращаются в интермедиаты гликолитического пути. В основном к ним относятся гексозы и олигосахариды, включающие остатки гексоз. Из моносахаридов наиболее часто сбраживается галактоза, из дисахаридов - сахароза, мальтоза, трегалоза. Значительно реже встречаются дрожжи, сбраживающие лактозу и мелибиозу.

Некоторые дрожжи способны также сбраживать полисахариды, состоящие из гексозных остатков. Например Kluyveromyces fragilis сбра-

59

Рис. 39. Пути катаболизма различных типов соединений дрожжами.

60