Лабораторна діагностика.

Лабораторна діагностика передбачає виявлення антигена в епі­телії фолікулів піря та викриття антитіл у сироватці крові.

Для цього використорують слідуїочі методи:

1. Ракція дифузної преципітації у агаровому гелі (РДП);

2. Метод флуорисцуючих антитіл (МФА);

З. Реакція нейтралізації (РН);

4. Реакція непрямої гемаглютінації ;

5. Методи індикації вірусу хвороби Марека у біопробі на курчатах, курячих ембріонах та культурі клітин;

б. Реакція гіперчутливості сповільненого типу (РГСТ),

РДП

Її використовують для ретроспективної діагностики хвороби Марека. Метод високоспецифічний, чутливий. 3 його допомогою можна знайти специфічні антитіла у сироватці крові хворих птахів через 4 тижні після зараження.

У ветеринарну лабораторію направляють 5-10 хворих курчат, де від них відбирають пір'я для виявлення вірусного антигена, кров та вражені ділянки шкіри, мязів, периферічних нервів, клоакальної сумки, тімусу.

Вражені пухлинами печінку, нирки, селезінку, серце розтирають у ступці і готують 10% суспензію на розчині Хенкса, середовищі Ігла або фізрозчині.

Якщо пухлини у внутрішніх органах не були знайдені, то для зараження використовують тільки стабілізовану кров.

Щоб знайти антитіла до вірусу хвороби Марека досліджують не менше 10 проб сироватки крові. Специфічна преципітуюча сироватка, контрольна негативна сироватка, специфічний антіген, контрольний негативний антіген, дослідний матеріал - компоненти реакції.

У шарі застиглого агару за допомогою спеціального штампу нарізають лунки. Найкраща відстань між лунками з антигеном та антитілом дорівнює 5-8 мм.

Лінії преципітації чітко та швидко формуються при темпера­турі 37°С. Після наповнення лунок антигеном та сироватками проби видержують у вологтй камері 48 годин при +37°С, а потім добу при кімнатній температурі. Результати реакції вираховують попередньо через 24-48 годин і заключно – через 72 години.

Реакцію вважають позитивною при наявності чітко виражених смуг преципітації між лунками з випробуваним антигеном та специфічною сироваткою, а також між контрольним позитивним антигеном та специфічною сироваткою, при негативному результаті з негативною сироваткою.

Мікрометод постановки РДП пропонують для кількісного визначення специшчішх антитіл. Метод має ряд позитивних якостей: швидкість постановки, можливість стандартизації стандартизації компонентів, потреба у незначній кількості дослідного матеріалу, можливість одночасного випробування великої кількості проб

У польових умовах.

МФА

Він відрізняється від РДП тим, що цей метод дозволяє виявити вірусний антиген через 24 годцпш після зараження культури клітин та задовго до зявлення чітких морфологічних змін у культурі. У звязку з цим МФА може бути викориотаний для експрес - діагностики хвороб Марека. цей метод дозволяє проводити індикацію збудника хвороби у первісному патматеріалі, інфікованій культурі тканини, а також виявляе антитіла.

Біопроба на курчатах.

Індикація віруса хвороби Марека на основі встановлення уражень при постановці на курчатах менш специфічна, ніж виявлення вірусоспецифічного антигену та антитіл, тому що при інокуляції вірусу низької патогенності зміни о органах та тканинах можуть і не розриватися.

Для зараження добових куртат використовують різний матеріал: клітинний та клітинно вільний, приготований із тканини хворих курчат. Реціпієнти повинні бути вільним від антитіл до вірусу хвороби Марека та генетично чутливими до зараження збуд­ником даної хвороби.

Біопробу на курячих ембріонах ставлять у двох варіантах: Перший варіант. Заражають 11-12 добові ембріони, наносячи на хоріоналантоїсну оболонку.

При наярності у дослідному матеріалі вірусу хвороби Марека на хоріоалантоіснтй оболонці розвиваються пустули - вогнища проліферації.

Варіант другий. Заражають 4-добові ембріони у жовтковий міх. У позатігних випадках зявляються вогнища проліферації - пустули. При зараженні курячих ембріоніт кровю хворих хворобою Марека курчат або інфікованих культурою клітин кількість пустул на оболонці прямо пропоційна інфікуючій дозі.