2.1.5. Иммунитет и специфическая профилактика

Для профилактики ПВИС успешно используются гетерологические, аттенуированные или инактивированные вакцины против панлейкопении кошек.

Инактивированные вакцины. Применяют вакцину из ПВ-штамма кошек. В Канаде применяют формолвакцину с двойным адъювантом (гидроокись алюминия и адъювант L-80), с вирусом, выращенным в культуре перевиваемых клеток почки кошки. Формол­вакцину готовят из шт.CPV-916, репродуцированно-го в любой чувствительной культуре клеток (почек собак, кошек, легких норок). Показано, что наилучшая защита щенков обес­печивается 3-кратной иммунизацией инактивированной вакциной. Предложены ГОА формолвакцина из аттенуированных штаммов инфекционного энтерита кошек и геморрагиче­ского энтерита собак, а также метод проверки ее активности на курах. В Англии при­меняют инактивированную комбинированную вакцину CPV-2, содержащую ПВС.

Живые вакцины. Применяют живые модифицированные вакцины, приготовленные из аттенуированного штамма парвовируса собак или вируса панлейкопении кошек. Живые вакцины на­дежнее. После 2-кратного применения у 92% привитых собак иммунитета обеспечивается до года. Их можно применять на щенках, имеющих высокий уровень колостральных AT. Гетерологичная вакцина представляет собой препарат, приготовленный из вируса пан­лейкопении кошек шт.Леопард, хорошо размножающегося в культуре клеток собак ССЛ-64. Живая вакцина из модифицированного вируса панлейкопении кошек обеспечивает у собак устойчивый иммунитет продолжительностью не менее 1,5 года. Живая аттенуированная вакцина была получена в результате 80 серийных пассажей ПВСоб в культуре клеток почек собак (шт.С-780916). Аттенуированный крупнобляшечный вариант этого штамма оказался апатогенным для щенков, не вызывал инфекцию плодов и в настоящее время успешно используется в США в качестве живой вакцины. В Австралии ПВС-2, выделенный при парвовирусной инфекции собак, был аттенуирован путем культивирования в почечных клетках кошки (FK) и со­баки (МДСК). Вирус клонировали методом конечных разведений и на уровне 69-го пассажа депонировали в коллекции клеточных культур как № 890426016, а также как шт.CPV-2 Р69, и использовали для приготовления вакцины в культуре клеток FK. Вакцина слабопато­генна и индуцировала иммунный ответ у щенков, имеющих материнские AT.

В настоящее время фирма Смит Кляйн выпускает вакцину Foil-cell для иммунизации собак против парвовирусной инфекции. Вакцина содержит ослабленный вирус панлейкопении (энтерита) кошек. В Англии выпускается ассоциированная вакцина «Galaxy IV», предохраняющая со­бак от чумы, аденовируса I (гепатита), II типов и параинфлюэнцы. В основе этого препарата используют высокоиммуногенный вирус кошачьей панлейкопении. Во Франции успешно применяется 5-валентная вакцина против лептоспироза, чумы, контагиозного гепатита, бешенства и парвовирусной инфекции собак. В Венгрии используют живую вакцину Parvoven из апатогенного вируса. Препарат ареактогенен для щенков любого возраста. У щенков старше 3 мес по­ствакцинальный иммунитет сохраняется не менее года. Рекомендуется вакцинировать щен­ков в городах в возрасте 9-12 нед, а в собаководческих хозяйствах - в возрасте 6 и 9-12 нед, в инфицированном поголовье еще и в возрасте 16 нед. При наличии у щенков материнского иммунитета предпочтительнее применять вначале убитую вакцину, а затем живую. Имму­нитет начинает выявляться через неделю после вакцинации и достигает максимума на 10-14-й дн. Получена субъединичная вакцина, которая содержит белок VP2, продуцируемый при репликации рекомбинантного бакуловируса в клеточной культуре насекомых или насе­комых, которые являются пермиссивными хозяевами для размножения соответствующих бакуловирусов.

Разработан метод интраназальной вакцинации щенков с материнскими AT живым модифицированным ПВС шт.CPV-17-80. Щенков от вакцинированных матерей прививали 1-й раз в 4-нед возрасте и далее каждые 2 нед до достижения 11-нед возраста. Иммунологи­ческую эффективность вакцинации определяли в РТГА в сыворотках крови, полученных пе­ред каждой вакцинацией. Показано, что иммунный ответ зависел от исходного уровня мате­ринских AT: при исходном уровне в 40 ед. иммунологическая эффективность составляла 100%, при титре 80 ед. - 72,2 и при титре 160 ед. - 17,6%.

Эффективно применение специфической иммунной сыворотки при лечении ПВИСоб у щенков. Для получения такой сыворотки клинически здоровой собаке, имевшей в крови анти-ГА против ПВС в титре 1:512, дважды с 2-нед интервалом вводят внутривенно по 2-10 ТЦД₅о ПВСоб. Кровь для приготовления сыворотки берут через неделю после 2-й инъ­екции ПВС, когда титр AT в РТГА в крови собак достигает 1:8192. Полученную сыворотку инактивировали при 56°С 30 мин, фильтровали через фильтр с диаметром пор 450 нм и контролировали на авирулентность с использованием культуры клеток. У всех щенков, экс­периментально инфицированных ПВС и проявивших признаки ПВИС после инъекции 2 мл иммунной сыворотки, наблюдали лишь легкую форму болезни с последующим полным вы­здоровлением. Среди инфицированных щенков, которым сыворотку не вводили, отмечено тяжелое течение ПВИСоб с геморрагической диареей, сопровождающейся гибелью полови­ны больных щенков. При естественном течении ПВИСоб у щенков после применения им­мунной сыворотки наблюдали, как правило, быстрое выздоровление.

Разработана субъединичная вакцина против ПВИСоб и других родственных вирусов (EPL, MEV). Для этого получают рекомбинантный белок VP2 ПВСоб посредством реплика­ции рекомбинантного бакуловируса, содержащего ген этого белка. Полученный таким обра­зом белок VP2 способен образовывать пустые химерные капсиды с высокой иммуногенностью. Кроме того, в белки можно вводить эпитопы других вирусных белков (методами хи­мической или генетической инженерии) и использовать их для приготовления поливалентных вакцин. Синтетическая пептидная вакцина также защищала собак против виру­лентного парвовируса собак.

Серологическая оценка поствакцинального иммунитета. Основными реакциями для обнаружения поствакцинальных AT являются РТГА и РН.

Длительность циркуляции поствакцинальных AT. После применения аттенуированной вакцины у собак со 2-го дня появлялись анти-ГА, уровень которых достигал максимума к концу 1-й нед. После вакцинации живой вакциной ВНА обнаруживали в максималь­ном титре в течение 6 мес. Спустя 3 дн в крови вакцинированных щенков титр ВНА был 1:20, к 21-му дню он достигал максимума (1:1042) и спустя 114 дн средний титр со­ставлял 1:64.

Связь титров AT с резистентностью. Установлена прямая корреляция между титрами антител и устойчивостью щенков к экспериментальному заражению. Невосприимчивость их к парвовирусам, имевшим после вакцинации титр анти-ГА выше 1:80, сохранялась более 1 г. Иммуни­тет обусловлен наличием анти-ГА в титре выше 1:80, которые сохранялись не менее 2-х лет. Однако наличие колостральных специфических антител, которые сохраняются в крови до 13 нед, снижает эффективность вакцинации щенков живыми вакцинами. Так, вакцина у серонегативных щенков индуцировала иммунитет более чем у 90%, при наличии титров 1:10 - бо­лее 95%, при титрах 1:20 - только у 50%, а при титрах перед вакцинацией выше 1:80 ни одно из животных не приобрело активного иммунитета. Защиту щенят от парвовирусной инфекции собак до 4-мес воз­раста обеспечивает материнский иммунитет. Щенки получают AT с молозивом, колостральные AT подавляют репродукцию вакцинного вируса, в связи с чем щенков рекоменду­ется вакцинировать не ранее 4-х мес после рождения.

Связь титров AT с вирусоносительством и внрусовыделением. Обстоятельно этот вопрос не изучен, однако известно, что собаки с титром AT 1:80 и выше после перорального введения им вируса в количестве 10⁶ ТЦД₅₀ не заболевают и не выделяют его с фекалиями. Сообщалось о наличии у собак, выделяющих парвовирус, состояния иммунодепрессии. Иммунная реакция на парвовирус собак включает и секреторный компонент слизистой оболочки кишечника и системный компонент периферической лимфоидной ткани. Поэтому эффективная вакцина должна стимулировать как местный, так и системный иммунитет.