Неспорообразующие анаэробы Бактероиды
Условно-патогенные бактерии рода Bacteroides. Представители нормальной микрофлоры, главным образом кишечника. (Норма 108-109). Их количество в кишечнике возрастает при употреблении жирной, богатой белком пищи. Грам - палочки, неподвижные, короткие, правильной формы с закругленными краями, полиморфные. Есть много разновидностей бактероидов, но ведущим патогеном гнойных внутрибрюшных инфекций является В. fragilis , а полости рта и мочеполового тракта- В. melogenes.
Факторы патогенности бактероидов:
Токсины - эндотоксин, лейкоцидин.
Ферменты - коллагеназа, гиалуронидаза, фибринолизин и др.
Пили - адгезия к субстрату
Капсула - защищает от фагоцитоза
Метаболиты - летучие жирные кислоты угнетают хемотаксис. Цитотоксическое, канцерогенное действие.
Вызывают гнойно-воспалительные заболевания различных органов, посттравматические остеомиелиты, хроническую патологию костей, гнойные артриты (после эндопротезирования), гнойно-воспалительные процессы урогенитальной сферы, в стоматологии, абдоминальный сепсис.
Лабораторная диагностика
Методы диагностики:
Микробиологический
Микроскопический
Биологический (реакция нейтрализации токсина) Микробиологический метод диагностики
Основной принцип - создание бескислородных (анаэробных) условий, для чего применяется комплекс технических приемов и бактериологических методов, направленных на защиту микроорганизмов от токсического действия кислорода на всех этапах работы с анаэробными бактериями
Материал для исследования: содержимое при пункции или вскрытии абсцессов, пункции полостей и органов, отделяемое из глубоких отделов ран, кровь.
Оборудование для культивирования анаэробных бактерий.
а) микроанаэростаты для хранения питательных сред и культивирования посевов;
б) вакуумный насос, создающий разрежение - 1 атм;
в) газ, свободный от примеси кислорода. Лучшей для культивирования анаэробов является трехкомпонентная газовая смесь (80% азота, 10% водорода и 10% двуокиси углерода), но м.б использован чистый азот, аргон, гелий.
Вакуумный насос и баллон с газом с помощью резиновых шлангов через тройник соединяют с микроанаэростатом. Цилиндр микроанаэростата закрывают крышкой, завинчивают крепежный винт и откачивают воздух до отметки на вакууме - 1атм: Вакуумирование проводят медленно, чтобы предотвратить вспенивание жидкости в пробирках и смачивание пробок. Перекрывают зажимом шланг, ведущий от тройника к вакуумному насосу и открывают кран для заполнения микроанаэростата бескислородным газом. Такую процедуру повторяют трижды для удаления следовых количеств кислорода. Микроанаэростат закрывают и отсоединяют от системы. При использова нии природного газа выброс газа из микроанаэростата во внешнюю среду осуществляется при условии соблюдения правил техники безопасности; после заполнения микроанаэростата природный газ, оставшийся в шлангах, также откачивается и только после этого отключают вакуумный насос.
Более удобны для работы с анаэробами системы Gas Pak , производимые многими зарубежными фирмами. Это герметически закрывающийся сосуд, внутрь которого помещается поглотитель кислорода и генератор углекислого газа и водорода. Для контроля анаэробиоза в анаэростате применяются специальные среды с красителями, культуру синегнойной палочки, которые при наличии кислорода изменяют свой цвет.
Другие условия создания анаэробных условий:
Регенерация питательной среды: кипячение среды с последующим быстрым ее охлаждением.
Культивирование в высоком столбике агара с герметизацией пробки вазелином, парафином.
• Добавление в питательные среды редуцирующих веществ- мясо, печень, кровь.. Для культивирования в анаэробных условиях используют:
а) свежеразлитые (в течение 2 часов после приготовления) или прередуцированные (не менее суток выдержанные в анаэростате) чашки с анаэробным гемагаром (рец. 1 или 2). Использование этих сред позволяет получить рост не только всех групп клинически значимых анаэробов, но и рост факультативно - анаэробных бактерий;
б) селективные среды - для выделения только анаэробных бактерий. Для этого в анаэробный гемагар добавляют один из следующих антибиотиков: неомицин, канамицин (по 75-80 мкг/мл), гентамицин (50 мкг/мл) или налидик-совую кислоту (невиграмон, неграм - 40 мкг/мл). Вместо добавления антибиотиков в среду на засеянную поверхность
анаэробного гемагара можно накладывать по 2 - 4 диска с канамицином (1000 мкг в диске). В зоне задержки роста факультативных анаэробов вокруг дисков часто отмечается рост чистой культуры облигатно анаэробных бактерий. Однако все эти антибактериальные препараты могут подавлять рост отдельных видов анаэробов. Поэтому посев на неселективную среду обязателен;
в) обогащенную питательную среду для контроля стерильности (прокипяченную 5 мин и быстро остуженную)
г) на общепринятые элективные и селективные среды - для выделения анаэробных бактерий.
Каплю жидкого патологического материала помещают на поверхность агара и рассеивают методом " истощения", несколько раз прожигая петлю с целью получения изолированных колоний. Патологический материал с тампона (используют всю поверхность тампона) также наносят на небольшой участок и рассеивают методом "истощения". После этого тампон вносят в жидкую среду и вращают пробирки между ладонями. Фрагменты мягких тканей заливают небольшим количеством жидкой среды для анаэробов или 10%-ной лизированной кровью в физ. р-ре и измельчают в стерильной ступке. Костные фрагменты погружают в жидкую среду, встряхивают пробирку и высевают петлей на плотную питательную среду. Оставшийся материал заливают жидкой средой для анаэробов в соотношении 1:10. Немедленно после посева пробирки и чашки ( крышками вверх) укладывают в анаэростат. Туда же ставят пробирку для контроля анаэробиоза. Проводят трехкратную замену газа в микроанаэростате, помещают в термостат и инкубируют 2-7 суток при 37 град.
Наиболее употребительные питательные среды:
Среда Кита-Тароцци
Среда Вильсона-Блера
Анаэробный гемагар на основе эритрит - агара.
Анаэробный гемагар на основе сухой питательной среды для контроля стерильности.
Питательная среда для контроля стерильности
Микроскопический метод диагностики
Окраска по Граму, Окраска по Ожешко - для выявления споры и ее окрашивания.
Биологический метод (реакция нейтрализации токсина)
Используются две пары лабораторных животных ( белые мыши, морские свинки), которым вводят парентерально материал, содержащий токсин (фильтрат исследуемого материала). Одной паре мышей вводится смесь фильтрата с антитоксической сывороткой, другой- только фильтрат. За животным ведется наблюдение. Гибель животного наступает в течение 1-4 дней. Мыши, которым был введен центрифугат со специфической антитоксической сывороткой, остаются живыми. Специфическая профилактика
Столбняк. Для плановой профилактики используют адсорбированный столбнячный анатоксин в составе вакцины АКДС и АДС. Для экстренной профилактики- столбнячный анатоксин, иммуноглобулин, ПСС.
Газовая гангрена -Секстанатоксин (содержит 6 анатоксинов возбудителей заболевания).
Ботулизм- Секстанатоксин, содержащий ботулинический анатоксин. Для экстренной профилактики и лечения- противоботулиническая антитоксическая сыворотка.