Серебрение бактерий в мазках — метод Фонтана

1. Мазки, фиксированные нагреванием (или в парах формалина, спирте, формоловых смесях, жидкости Карнуа), ополаскивают в воде.

2. Нагревают 10 мин в растворе Люголя до появления паров, просветляют 2 мин в 5 % растворе тиосульфата натрия.

3. Ополаскивают дистиллированной водой 30 с.

4. Нагревают до появления паров в растворе аммиачного серебра 30 с.

5. Промывают в дистиллированной воде, высушивают и заключают в бальзам.

Выявление жгутиков и ресничек Метод Леффлера

1. Мазок кладут на 0,5—1 мин в слегка нагретую протраву (100 мл 12 % водного раствора танина + 50 мл насыщенного на холоде раствора сульфата железа + 50 мл спиртового раствора фуксина).

2. Хорошо промывают мазок водой и ополаскивают в спирте.

3. Окрашивают насыщенным раствором фуксина в анилиновой воде, к которому по каплям добавляют 1 % гидроксида нутрия до тех пор, пока раствор не станет мутным и не начнет выпадать, осадок красителя. Раствор красителя наливают на часовое стекло, мазок пускают плавать, подогревая краситель на спиртовке до появления паров. Окрашивают в течение 1—2 мин.

4. Промывают в воде, сушат и исследуют при иммерсии или заключают в бальзам.

Метод Лайфзона

Смешивают равные объемы 1,5 % хлорида натрия, 3 % таниновой кислоты и 0,9 г парарозанилина ацетата + 0,3 г парарозанилина гидрохлорида + 100 мл 96 % спирта. Хорошо размешивают, рН смеси должен быть от 4,8 до 5,2. При комнатной температуре краску можно хранить несколько дней, при 4 °С  -  до 2 мес., а при минус 10 °С — неопределенно долго.

Мазки с культур или из жидкостей не фиксируют на огне, можно пользоваться другими методами фиксации.

Методика окраски

1. На мазок наливают светлую надосадочную жидкость красителя.

2. Окрашивают 8—15 мин до появления на стекле металлического оттенка.

3. Промывают в воде, высушивают и изучают при иммерсии.

Результат: бактерии и жгутики — красные.

Выявление капсул бактерий

Метод Клетта

Мазки окрашивают разбавленным в 10 раз насыщенным спиртовым раствором метиленового синего, подогревая краску на огне до кипения. Затем промывают в воде и окрашивают в течение 5 с 10 % спиртовым раствором фуксина, разбавленным водой в 10 раз. Промывают водой, сушат и изучают при масляной иммерсии.

Результат: бактерии окрашиваются в синий цвету а их капсулы — в красный.

Метод Джоне

Фиксированные над огнем мазки окрашивают при подогревании до появления паров в течение 2 мин 20 % водным раствором генцианового фиолетового. Затем промывают в воде и окунают на 8—10 с в 2 % раствор уксусной кислоты. Далее снова промывают водой, сушат и изучают при масляной иммерсии.

Результат: бактерии темно-синие, капсулы светло-синие.

Метод Фридлендера (для срезов)

Депарафинированные срезы окрашивают в течение нескольких часов смесью 5 частей насыщенного спиртового раствора генцианового фиолетового, 10 частей дистиллированной воды и 1 части ледяной уксусной кислоты (срезы можно оставить на ночь). Дифференцируют окраску 10—15 с 0,1 % растворе уксусной кислоты. Промывают срез водой, быстро обезвоживают в спиртах, проводят через ксилол и заключают в бальзам.

Результат: бактерии темно-синие, капсулы светло-синие.

Метод Бурри

На конец предметного стекла наносят каплю туши и петлёй — исследуемый материал. Смесь тщательно перемешивают петлей, делают мазок и высушивают его, не фиксируя. Исследуют при масляной иммерсии.

Результат: фон препарата окрашен в дымчато-темный цвет, на котором хорошо видны бесцветные микробные тела и их капсулы.

Метод Гинса

Негативно окрашенный препарат, приготовленный по методу Бурри, фиксируют любым способом, промывают водой и окрашивают карболовым фуксином, разведенным в соотношении 1:3. Промывают водой, высушивают и изучают при иммерсии.

Выявление спор бактерий

Окрашивание спор удается только в мазках.

Метод Вайсера—Хьюппе

1. Мазки окрашивают в растворе карболового фуксина или фуксина на анилиновой воде в термостате при 37 °С в закрытой посуде в течение нескольких часов.

2. Обесцвечивают 2,5 % раствором серной кислоты в течение 3 — 5 с и споласкивают 96 % спиртом, пока не перестанут отходить облачка красителя.

3. Докрашивают метиленовым синим 3 — 5 мин.

4. Ополаскивают в проточной воде, сушат на воздухе и изучают при масляной иммерсии.

Можно окрашивать карболовым фуксином, подогревая на огне мазок с красителем до появления паров 5 — 8 мин, но тогда дифференцировать следует 2,5 % серной кислотой в течение 10-20 сек.

Результат: споры окрашиваются в красный цвет, бактерии -  в синий.