- •Окраска бактерий в мазках
- •Для обнаружения возбудителей используют различные методы и группы методов.
- •Окраска метиленовым синим Лефлера Методика окраски.
- •Окраска основным фуксином по Пфейферу
- •Окраска генциановым или метиловым фиолетовым
- •Окраска карболовым тионином Николя
- •Окраска акридиновым оранжевым по Дарту-Тернеру
- •Окраска по Граму Красящие растворы.
- •Красящие смеси для грамположительных бактерий:
- •Красящие смеси для грамотрицательных бактерий:
- •Методика окраски.
- •Окраска по Романовскому-Гимзе Приготовление красителя
- •Методика окраски
- •Окраска плазмодиев малярии в мазках по Романовскому-Гимза
- •Методика окраски «толстой капли».
- •Метод Френкеля
- •Флюоресцентное окрашивание мазков мокроты (метод Хагеманна) ,
- •Метод Киньуна (для срезов)
- •Метод Файта (для срезов)
- •Серебрение бактерий в мазках — метод Фонтана
- •Выявление жгутиков и ресничек Метод Леффлера
- •Метод Лайфзона
- •Метод Меллера
- •Окраска малахитовым зеленым Шеффера-Фултона
- •Метод Ожешки
- •Метод Битгера
- •Выявление возбудителей сыпного тифа и других риккетсий Выявление риккетсий в мазках (метод Маккиавелло)
- •Выявление риккетсий в срезах (метод Ника)
- •Выявление коринебактерий дифтерии
- •Выявление стрептококков
- •Выявление стафилококков
- •Выявление пневмококков
- •Выявление менингококков
- •Выявление гонококков
- •Выявление возбудителей чумы
- •Выявление анаэробных спорообразующих бактерий группы клостридии
- •Выявление возбудителей сибирской язвы
- •Выявление возбудителей кишечной инфекции
- •Выявление спирохет и других спиралевидных бактерий
- •Выявление возбудителей возвратного тифа
- •Выявление лептоспир
Окраска основным фуксином по Пфейферу
Вместо метиленового синего можно воспользоваться карбол-фуксином либо как таковым, либо в разведенном виде (1:10). Окрашивание длится от 15—30 секунд до 2—3 минут, в зависимости от степени разведения перекрашивания допускают дифференцировку 70° спиртом (10—20—30 секунд).
Окраска основным фуксином по Пфейферу. 1 г основного фуксина растворяют в 10—15 мл этилового спирта и смешивают со 100 мл 5 % раствора фенола. Затем 3 капли полученного раствора добавляют к 10 мл дистиллированной, воды и этой смесью окрашивают мазки в течение 30 — 40 мин. После этого ополаскивают водой, дифференцируют 0,1 % раствором соляной кислоты в абсолютном спирте, ополаскивают в абсолютном спирте и заключают в бальзам.
Результат: бактерии окрашиваются в малиново-красный цвет.
Окраска генциановым или метиловым фиолетовым
Для ориентировочной окраски бактерий можно воспользоваться также карболовым генциановым фиолетовым или кристаллическим фиолетовым. Однако эти красители при дифференцировке 700 спиртом легче извлекаются из клеточных элементов и бактерий, чем фуксин, поэтому, пользуясь ими, рекомендуется сильно перекрашивать.
Смешивают 10 мл насыщенного спиртового раствора генцианового фиолетового (генцианвиолет) со 100 мл 2,5 % раствора фенола (смесь хранится долго). Мазки окрашивают в течение 2 — 5 мин через фильтровальную бумагу, промывают в проточной воде, сушат и исследуют при масляной иммерсии.
Результат: бактерии окрашиваются в густо-фиолетовый цвет.
Окраска карболовым тионином Николя
Смешивают 1 часть насыщенного спиртового раствора тионина с 10 частями 1 % водного раствора фенола, мазки окрашивают 3 - 5 мин, ополаскивают в проточной воде, дифференцируют 30 секунд в 96 % спирте, снова ополаскивают в воде и высушивают. Препарат изучают при масляной иммерсии.
Результат: бактерии окрашиваются в темно-синий цвет.
Окраска акридиновым оранжевым по Дарту-Тернеру
1. Мазки фиксируют в смеси равных частей диэтилового эфира и 95 % этилового спирта в течение 1ч.
2. Проводят через спирты нисходящей концентрации (80 %, 70 %, 50 %) и дистиллированную воду, окуная мазок по 5 раз в каждую порцию.
3. Окунают 4 раза в 1 % уксусную кислоту.
4. Переносят в дистиллированную воду на 2 мин.
5. Помещают на 3 мин в ацетатный буфер (рН 3,8).
6. Переносят в 0,01 % забуференный раствор акридинового оранжевого на 3 мин.
7. Дифференцируют 4 мин в ацетатном буфере (рН 3,8).
8. Протирают концы предметных стекол, а затем осторожно удаляют избыток буферного раствора фильтровальной бумагой.
9. Заключают под покровное стекло в буферный раствор и оставляют на 2 мин. Препарат исследуют с помощью флюоресцентного микроскопа сразу либо, если мазок оставляют надолго, держат в темноте и парафинируют края покровного стекла. Флюоресценция сохраняется в течение 3 мес.
Результат: бактерии, дрожжи, грибы рода Candida окрашиваются в красный цвет, паразиты — в красный с желтыми ядрами; лейкоциты — ярко-зеленые.
Окраска по Граму Красящие растворы.
Раствор кристаллического фиолетового по Эрлиху: 1,2 г кристаллического фиолетового растворяют в 12 мл 96 % спирта и добавляют 100 мл свежеприготовленной анилиновой воды, полученной при смешивании 2 мл анилина со 100 мл воды. Эта красящая смесь может храниться 2 нед. Вместо кристаллического фиолетового можно использовать метиловый фиолетовый.