Метод визначення мікробної забрудненості молока сирого редуктазною пробою (з резазурином)

Суть методу. Метод ґрунтується на відновленні резазурину окисно-відновлювальними ферментами, що виділяються в молоко мікроорганізмами. За тривалістю зміни забарвлення резазурину оцінюють мікробну обсіяність молока.

Хід роботи

Пробу з резазурином слід проводити не раніше, ніж 2 години після доїння. У пробірки наливають по 1 см³ робочого розчину резазурину і по 10 см³ дослідженого молока, закривають гумовими корками і змішують шляхом повільного триразового перевертання пробірок. Пробірки поміщають у редуктазник за температури води (37±1) ºС.

У разі відсутності редуктазника можна використовувати водяну баню, поміщену в термостат з температурою (37±1) ºС. Вода в редуктазнику або водяній бані після занурення пробірок з молоком повинна доходити до рівня рідини в пробірці або бути трохи вище, її підтримують протягом усього часу визначення (37±1) ºС.

Пробірки з молоком і резазурином протягом аналізу повинні бути захищені від прямих сонячних променів (редуктазник має бути щільно закритим кришкою).

Момент занурення пробірок у редуктазник вважають початком аналізу.

Показання знімають через 1 годину та 1,5 год.

Появу забарвлення молока в цих пробірках при струшуванні не враховують. Через одну годину пробірки дістають із редуктазника або іншого обладнання. Пробірки з молоком, які мають забарвлення від сіро-бузкового до бузкового зі слабким сірим відтінком, залишають у редуктазнику ще на 30 хв.

Обробка результатів

Залежно від тривалості знебарвлення або зміни кольору молоко відносять до одного з чотирьох ґатунків, зазначених у таблиці.

Таблиця 2

Рівень мікробного забруднення молока за резазуриновою пробою

Ґатунок молока	Тривалість знебарвлення або зміни кольору, год.	Забарвлення молока	Орієнтовна кількість бактерій в 1 см3 молока, тис. КУО
Екстра	> 1,5	Сіро-бузкове до бузкового зі слабким сірим відтінком	до 100
Вищий	1,5	Сіро-бузкове до бузкового зі слабким сірим відтінком	до 300
Перший	1,0	Бузкове з рожевим відтінком або яскраво-рожеве	до 500
Другий	1,0	Рожеве бліде або біле	до 3000

Завдання

1. Визначити мікробну забрудненість відібраних проб сирого молока за редуктазною пробою з резазурином. Результати проведеної роботи занести в робочий зошит згідно таблиці 3.

2. Охарактеризувати молоко щодо мікробної забрудненості, якщо при визначені редуктази з резазурином зміна забарвлення проб молока відбулося а) через 10 хв; б) через 30 хв; г) через 1,5 год. д) через 3 год; е) не відбулося навіть через 5 год. і більше. Результати проведеної роботи занести в робочий зошит.

Таблиця 3

Дослідження мікробної забрудненості

молока сирого резазуриновою пробою

№ проби	Тривалість знебарвлення або зміни кольору, год.	Забарвлення проб молока	Ґатунок молока
1
2
3

Питання для самоконтролю

1. У чому сутність визначення мікробної забрудненості молока сирого чашковим методом?

2. Яка схема визначення бактеріальної забрудненості молока сирого чашковим методом?

3. Як оцінюють молоко сире молоко чашковим методом?

4. Як визначають кількість мікроорганізмів в 1см³ чашковим методом?

5. Як відбирають проби сирого молока для мікробіологічного дослідження?

6. Як відібрані проби молока готують до дослідження?

7. Які методи використовують для визначення мікробної забрудненості молока?

8. У чому полягає сутність методів визначення редуктази з метиленовим синім та резазурином?

9. Як оцінюють молоко сире методом визначення редуктази з резазурином.

6