21. Методы пипетирования

Прямой метод

Нажмите на операционную кнопку до первой остановки.

Погрузите наконечник в дозируемый раствор и плавно отпустите кнопку. Извлеките наконечник, аккуратно снимая излишки раствора о край посуды.

Выпустите взятый раствор, плавно нажимая на кнопку до первой остановки. После короткой паузы дожмите операционную кнопку до второй остановки (до упора). После этого действия наконечник полностью опустошается.

Отпустите кнопку в исходное положение. При необходимости смените наконечник и продолжайте пипетирование.

Обратный метод

Обратный метод используется для работы с жидкостями, имеющими высокую вязкость или склонность к вспениванию, а так же при работе с малыми объемами.

Держа пипетку вертикально, нажмите операционную кнопку до второй остановки (до упора).

Погрузите наконечник в дозируемый раствор и плавно отпустите кнопку (при этом наконечник заполняется). Извлеките наконечник из раствора, аккуратно снимая излишки о край посуды.

A — исходное положение

B — первая остановка

C — вторая остановка Нажав на операционную кнопку до первой остановки, выпустите раствор. По окончании этого действия немного раствора останется в наконечнике. Этот остаток раствора не должен включаться в дозируемый объем и должен быть удален вместе с наконечником при его сбросе или слит обратно в резервуар путем нажатия операционной кнопки до упора (до второй остановки.)

86.Пф и оф распределительная хроматография

Распределительная хроматография. При распределительном варианте жидкостной хроматографии разделение смеси веществ осуществляется за счет различия их коэффициентов распределения между двумя несмешивающимися фазами - элюентом (подвижной фазой) и фазой, находящейся на сорбенте (неподвижная фаза).

При нормально-фазовом варианте распределительной жидкостной хроматографии используются неполярный элюент и полярные группы, привитые к поверхности сорбента (чаще всего силикагеля). В качестве модификаторов поверхности силикагеля (привитых фаз) используются замещенные алкилхлорсиланы, содержащие полярные группы, такие как нитрильная, аминогруппа и т. д. Применение привитых фаз позволяет тонко управлять сорбционными свойствами поверхности неподвижной фазы и добиваться высокой эффективности разделения.

Обращенно-фазовая жидкостная хроматография основана на распределении компонентов смеси между полярным элюентом и неполярными группами (длинными алкильными цепочками), привитыми к поверхности сорбента

Использование оф хроматографии: Фармацевтическая промышленность — стероидные гормоны, практически все продукты органического синтеза, антибиотики, полимерные препараты, витамины, белковые препараты(определение).

Медицина — определение биохимических и лекарственных веществ и их метаболитов в биологических жидкостях (аминокислоты, пурины и пиримидины, стероидные гормоны, липиды) при диагностике заболеваний, определении скорости выведения лекарственных препаратов из организма с целью их индивидуальной дозировки.

Гель-фильтрационная хроматография является также вспомогательным методом для оценки молекулярной массы молекул (рис. 2.11). Несмотря на то, что для этого существуют гораздо более точные методы, например, масс-спектрометрия, гель-фильтрация оказывается полезной для измерения равновесий мономер-мультимер при микромолярных (мкМ) концентрациях биом

Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЖКХ)

Высокоэффективная жидкостная хроматография – наиболее эффективный метод анализа органических проб сложного состава. Процесс анализа пробы делится на 2 этапа:

разделение пробы на составляющие компоненты;

детектирование и измерение содержания каждого компонента.

Задача разделения решается при помощи хроматографической колонки, которая представляет собой трубку, заполненную сорбентом. При проведении анализа через хроматографическую колонку подают жидкость (элюент) определенного состава с постоянной скоростью. В этот поток вводят точно отмеренную дозу пробы.

Компоненты пробы, введенной в хроматографическую колонку, из-за их разного сродства к сорбенту колонки двигаются по ней с различными скоростями и достигают детектора последовательно в разные моменты времени.

Таким образом, хроматографическая колонка отвечает за селективность и эффективность разделения компонентов. Подбирая различные типы колонок можно управлять степенью разделения анализируемых веществ. Идентификация соединений осуществляется по их времени удерживания. Количественное определение каждого из компонентов рассчитывают, исходя из величины аналитического сигнала, измеренного с помощью детектора, подключенного к выходу хроматографической колонки.

При анализе соединений с низкими ПДК (биогенные амины, полиароматические углеводороды, гормоны, токсины) из-за трудоемкости подготовки реальных проб особенно важной характеристикой становится чувствительность и селективность метода. Применение флуориметрического детектора позволяет не только снизить пределы обнаружения, но и селективно выделить анализируемые вещества на фоне матричных и сопутствующих компонентов пробы.

Метод ВЭЖХ применяется в санитарно-гигиенических исследованиях, экологии, медицине, фармацевтике, нефтехимии, криминалистике, для контроля качества и сертификации продукции