3.2.4. Исследование влияния амилацетата на активность дыхательной цепи митохондрий обонятельных клеток

Стимулирование обонятельной выстилки амилацетатом, обладающим фруктовым запахом, во всех опытах усиливало интенсивность синего свечения в среднем на 7%. Максимального значения амплитуда ответа достигала почти мгновенно после действия одоранта, а через 58 с реакция исчезала (рис. 62 а). Таким образом, видно, что амилацетат вызвал усиление собственной флуоресценции НАДН, что означает повышение содержания восстановленной формы никотинамидадениндинуклеотида в митохондриях обонятельных клеток.

Интенсивность собственной флуоресценции ФП под влиянием одоранта также увеличивалась (рис. 62 б). Однако такую реакцию на амилацетат можно было зарегистрировать в 40% случаев, а в 60% одорант не инициировал повышения уровня желто-зеленого свечения. После нанесения стимула сигнал почти мгновенно достигал своего максимума, увеличиваясь на 5% по сравнению с исходным уровнем, и возвращался к нему через 32 с. Следовательно, под действием амилацетата концентрация окисленных форм ФП в митохондриях обонятельных клеток увеличивалась.

Из полученных данных следует, что амилацетат изменяет окислительно-восстановительные процессы в митохондриях рецепторных клеток.

Роль вторичных посредников в реакциях НАДН и ФП на амилацетат исследовали посредством ингибирования аденилатциклазы 2,5-дидеоксиаденозином (n=6). Результаты исследований показали, что направленность реакций на одорант на фоне ингибитора сохранялась. Однако интенсивность собственной флуоресценции ФП увеличилась с 5% в норме до 8% в присутствии ингибитора, что обусловлено большим содержанием окисленных ФП по сравнению с препаратом, не обработанным ингибитором. При этом резко замедлялось развитие реакции до максимума – с почти мгновенной в нативном препарате до 16 с при ингибировании аденилатциклазы. Удлинялась продолжительность реакции: с 32 с до 69 с. Следовательно, выключение фермента вызывало увеличение пула окисленных флавопротеидов по сравнению с нормой и резкое замедление этого процесса.

Интенсивность синего свечения при обдувании препарата амилацетатом в 100% опытов увеличивалась. Амплитуда ответа достигала 3% от исходного уровня сигнала, что более, чем в два раза меньше, чем в интактном препарате. На фоне 2,5-дидеоксиаденозина реакция достигала максимального значения за 15 с и длилась 60 с. Таким образом, видно, что если активность аденилатциклазы угнеталась, то амилацетат-зависимое образование восстановленных форм пиридиннуклеотидов снижалось и замедлялось.

Следовательно, реакция обонятельных клеток на амилацетат зависела от состояния основного фермента системы цАМФ. Полученные данные означают, что в реакцию дыхательной цепи митохондрий на амилацетат включается сигнальная система цАМФ.

3.2.5. Исследование влияния ванилина на активность дыхательной цепи митохондрий обонятельных клеток

Стимуляция препарата ванилином, имеющим цветочный запах (n=15), в 93 % случаев усиливала собственную флуоресценцию НАДН в среднем на 7,5% (рис. 63 а). Следовательно, ванилин индуцировал повышение содержания митохондриального пула восстановленного НАДН. Под действием одоранта в 30% опытов интенсивность желто-зеленого свечения усиливалась в среднем на 4,7% (рис. 63 б), а в 50% случаев обдувание ванилином не приводило к изменению уровня сигнала. Одорант-зависимое повышение флуоресценции свидетельствует об увеличении содержания окисленных форм ФП. Следовательно, стимуляция препарата приводила к ванилин-активируемому изменению окислительно-восстановительных процесоов в митохондриях обонятельных клеток.

Для выявления участия вторичных посредников в одорант-зависимом изменении клеточного дыхания обонятельную выстилку инкубировали в неомицине, ингибиторе ФЛС, а затем обдували ванилином (n=4). Результаты исследования выявили, что на фоне неомицина интенсивность собственной флуоресценции НАДН под влиянием ванилина во всех опытах усиливалась. Амплитуда реакции на одорант достигала в среднем 5,5%. Таким образом, одорант-зависимое повышение содержания НАДН уменьшалось, если в реакции не участвовала фосфолипаза С – основной фермент фосфоинозитидного пути клеточной сигнализации.

Стимуляция препарата ванилином на фоне неомицина в 75% случаев увеличивала собственную флуоресценцию ФП на 2,5%. Это означает, что выключение из реакции ФЛС вызывало почти двукратное уменьшение одорант-индуцированного повышения содержания окисленных форм ФП.

Следовательно, ингибирование фосфолипазы С оказывало подавляющее влияние на ванилин-зависимые изменения окислительно-восстановительных процессов в митохондриях обонятельных клеток. Это означает, что в реакцию митохондрий на ванилин вовлекаются вторичные посредники, а именно, IP₃.