Тема №6. Техника посева бактериологических культур на жидкие и плотные питательные среды.

Цель занятия: научиться производить засев на различные питательные среды.

Материалы: питательные среды, чашки Петри, бактериальные петли, бактериальные шпатели, спиртовки, штативы с пробирками.

Посев микроорганизмов, один из основных приемов микробиологической техники, с помощью которого осуществляется выделение микроорганизмов из их естественной среды обитания, получение чистых культур, поддержание культур в активном состоянии, изучение их физиолого-биохимических свойств.

Для посевов применяют микробиологические петли, реже — иглы и шпатели. Чаще всего используются пробирка и чашка Петри. Универсальным инструментом для засева культуры является бактериальная петля. Помимо неё, для посева уколом применяют специальную бактериальную иглу, а для посевов на чашках Петри — металлические или стеклянные шпатели. Для посевов жидких материалов наряду с петлёй используются градуированная и пастеровская пипетки.

Материалом для посева могут служить культуры микроорганизмов, пересеваемые из жидких и плотных сред, различные природные субстраты.

Жидкий материал для посева берут петлей или пипеткой. При взятии петлей жидкость должна образовать в кольце петли тонкую прозрачную пленку — "зеркало". Пипетками пользуются в случае, когда материал засевают в большом или точно отмеряемом объеме.

Способ взятия плотного материала определяется его консистенцией. Для проведения посевов необходимы: подлежащий исследованию материал, питательные среды, стеклянный или металлический шпатель, бактериологические петли, иглы разного диаметра, пипетки, газовая или спиртовая горелка.

На чашках Петри со стороны дна, на пробирках в верхней трети указывают номер анализа и дату.

При посеве в жидкую питательную среду петлю с находящимся на ней материалом погружают в эту среду. Если материал вязкий и с петли не снимается, его растирают на стенке сосуда, а затем смывают жидкой средой. Жидкий материал, набираемый в пипетку, вливают в питательную среду.

Посев на плотную питательную среду осуществляют петлей и шпателем.

Посев петлей на среду в чашки Петри. Небольшое количество исследуемого материала вносят бактериальной петлей на поверхность питательной среды у края чашки и штрихом растирают внесенный материал. При необходимости штрихи проводят по секторам, предварительно разделив дно чашки на 4,8 или 16 равных частей. Чтобы удлинить общую линию посева, штрихи располагают как можно ближе друг к другу. При посеве на скошенный суслоагар петлю с находящимся на ней материалом вводят в пробирку до дна и скользящим движением делают штрихи на поверхности от стенки к стенке снизу вверх.

Посев на плотную среду шпателем. Исследуемый материал наносят шпателем и растирают по поверхности агаровой пластины. В зависимости от количества нанесенного материала и его инфицированности получают сплошной рост микроорганизмов, газонный или в виде отдельных колоний.

Посев на скошенный МПА (в пробирке)

Петлю с находящимся на ней материалом вводят в пробирку до дна, опуская на питательную среду плашмя и скользящим движением по скошенной поверхности среды наносят штрихи от одной стенки пробирки к другой снизу вверх. Пробирки с посевами подписывают заранее, указывая дату посева, номер исследования и название культуры.

Колония - это популяция микробных клеток одного вида, сформировавшаяся в результате деления одной микробной клетки в условиях культивирования на плотной питательной среде при оптимальной температуре.