- •Микробиология. Лабораторный практикум Волгоград 2012
- •Тема №2. Микроскопический метод исследования микроорганизмов.
- •Тема №3 «Бактериологические красители. Техника приготовления окрашенных препаратов бактерий. Простые и сложные методы окраски»
- •Тема №4. Специальные методы окраски и определение подвижности бактерий.
- •Тема №5. Питательные среды и приготовление их.
- •Тема №6. Техника посева бактериологических культур на жидкие и плотные питательные среды.
- •Тема №7. Культуральный рост микроорганизмов. Рост аэробов.
- •Тема №8. Биохимические свойства микробов и методы их изучения.
- •Тема №9. Заражение лабораторных животных. Определение патогенности микроорганизмов
- •Тема №10. Бактериофаги (биологические факторы)
- •Тема №11. Антибиотики и антибиотикочувствительность
- •Тема №12. Реакция агглютинации и ее модификации.
- •Тема №13. Реакция преципитации и ее модификации.
- •Тема №14. Реакция связывания комплемента (рск).
- •Тема №15. Метод флуоресцирующих антител (мфа). Реакция нейтрализации (рн).
- •Тема №16. Грамположительные, аэробные и факультативные кокки
- •Тема №17. Бактерии рода Streptococcus
- •Стрептококки группы в
- •S. Pneumoniae (пневмококк)
- •Лабораторная диагностика
- •Негемолитические стрептококки
- •Лабораторная диагностика
- •Тема №18. Бактерий рода Erysipelothrix
- •Питательные среды для культивирования е. Rhusiopathiae
- •Лабораторная диагностика бактерий рода Listeria
- •Лабораторная диагностика
- •Тема №19. Бактерии рода Mycobacterium
- •Лабораторная диагностика
- •Биологическая проба
- •Серологические исследования
- •Кожные пробы с туберкулином
- •Bacillus anthracis - Возбудитель сибирской язвы у человека и животных. Морфология возбудителя
- •Тема №20. Бактерии рода Clostridium
- •Возбудитель столбняка Clostridium tetani
- •Лабораторная диагностика
- •Возбудитель ботулизма Clostridium botulinum
- •Тема № 21. Бактерии рода Pasteurella
- •Лабораторная диагностика. Основана на выделении и индикации возбудителя. В мазках из клинического материала выявляют грамотрицательные мелкие палочки, часто окрашивающиеся биполярно.
- •Питательные среды для культивирования пастерелл
- •Тема № 22. Бактерии рода Brucella
- •Лабораторная диагностика
- •Тема № 23. Бактерии рода Pseudomonas
- •Pseudomonas aeruginosa (синегнойная палочка)
- •Морфология и тинкториальные свойства возбудителя
- •Биохимические свойства
- •Морфология и тинкториальные свойства
- •Культуральные свойства. Растет на простых средах, дополненных 4-5% глицерина; растет в интервале 20-45°с (оптимум 37°с); оптимум рН 6,5-7,2. Строгий аэроб.
- •Тема № 25. Бактерии рода Salmonella
- •Тема № 26.Возбудитель аспергиллеза.
Тема № 25. Бактерии рода Salmonella
Цель занятия: Усвоить правила отбора и пересылки патологического материала в лабораторию, порядок и методику исследования его для выделения и идентификации возбудителей сальмонеллезов.
Материалы и оборудование: Посевы, сделанные студентами на прошлом занятии; питательные среды МПА, МПБ, агар Эндо, агар Плоскирева, среды Кларка и Симмонса, среда с лактозой, среды индикаторные для определения индола и сероводорода, диагностические агглютинирующие сыворотки для серогрупповой типизации Е coli и сыворотки агглютинирующие для видовой дифференциации сальмонелл. Для демонстрации: таблица — схема проведения исследования на сальмонеллез. Биопрепараты.
Возбудители сальмонеллезов (паратифозов) к роду Salmonella, семейству Enterobacteriacea. Род сальмонелл по новой классификации (Берги, 1984) включает пять подродов и большое количество видов. Здесь приведены лишь те виды, которые входят в первый подрод и имеют наибольшее значение в заболевании животных: Salmonella enteritidis (dublin), S. choleraesuia (suipestifer). S. typhisuis. S. typhimurium. S. Abortusegui, S. abortusovis. S.pullorum (S. gallinarum). Родовая дифференциация сальмонелл основана на определении их культурально-биохимических свойств и антигенной структуры. Биохимические свойства их разнообразны как у отдельных подродов, так и в пределах одного и того же серологического варианта. Различие биохимических признаков сальмонелл положено в основу их подразделения на подроды и виды. Определение же серовариантов сальмонелл проводят на основе изучения их антигенной структуры.
Патологический материал. При септической форме сальмонеллеза посылают для исследования либо целый свежий труп, либо трубчатую кость, долю печени с желчным путём, почку, селезенку, брыжеечные лимфоузлы, сердце.
Микроскопия. Из тканей органов готовят препараты-отпечатки, после выделения культуры возбудителя болезни препараты-мазки окрашивают по Граму. Препараты, приготовленные методом «висячая» или «раздавленная» капля, микроскопируют для выявления подвижности сальмонелл (или их подвижность определяют посевом в полужидкий
МПА). Окрашенные препараты исследуют под микроскопом. Сальмонеллы окрашиваются грамотрицательно. Форма их палочковидная, величина 2—4 мкм. спор и капсул не образуют, располагаются обычно одиночно, иногда попарно. В основном подвижные (перитрихи), заисключением S. pullorum.
Культуральные свойства. После получения чистой культуры лактозоотрицательных бактерий различают по родовой принадлежности, затем дифференцируют до вида и серовара. Первичные посевы из поступившего в лабораторию материала осуществляют на элективные среды. Наиболее часто используют: агар Эндо, среду Плоскирева, агар Левина, висмут-сульфит-агар. Засевают также в МПБ и на МПЖ. Оптимальньй рН среды 7,2—7,4. На средах Эндо, Плоскирева и Левина сальмонеллы растут в виде бесиветных или серовато-голубых колоний, на висмут-сульфит-агаре — образуют черные колонии. Вжидкой среде (МПБ) рост сальмонелл проявляется помутнением среды на МПА — гладкими бесцветными прозрачными или серо-голубоватыми колониями с ровными краями. Оптимальная температура роста 37—38 °С. При исследовании испражнений на наличие сальмонелл рекомендуется делать посевы на среды обогащения, способствующие подавлению роста кишечной палочки и накоплению сальмонелл (среды Шустовой и др.). При наличии протея (часто присутствует в фекалиях) происходит подавление роста сальмонелл. Выделенную чистую культуру для установления родовой принадлежности засевают в набор дифференциально-диагностических питательных сред для определения биохимической характеристики. Сальмонеллы ферментируют глюкозу, манит, растут на агаре Симмонса (усваивают цитратно-аммонийные соли), не сбраживают лактозу, сахарозу, не расщепляют мочевину, не гидорлизуют не разжижают желатину, не образуют индол. Большинство вилов сальмонелл образуют сероводород, даютположительную реакцию с метиловым красным (среда окрашивается в розово-красный цвет), отрицательную реакцию Фогеса — Проскауэра (желтое окрашивание среды).