41

Министерство здравоохранения Украины Днепропетровская государственная медицинская академия Клинико-диагностическая лаборатория

Полимеразная цепная реакция: принципы и практические рекомендации по использованию в клинической практике врача

(руководство для врачей)

Днепропетровск 2002 г.

Авторы: ШОСТАКОВИЧ-КОРЕЦКАЯ ЛЮДМИЛА РОМАНОВНА, доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой факультетской педиатрии и детских инфекционных заболеваний МАВРУТЕНКОВ ВИКТОР ВЛАДИМИРОВИЧ, кандидат медицинских наук, доцент кафедры факультетской педиатрии и детских инфекционных заболеваний БРАТУСЬ ЕЛЕНА ВАСИЛЬЕВНА, кандидат биологических наук, заведующая клинико-диагностической лабораторией МАВРУТЕНКОВА ТАТЬЯНА ВИКТОРОВНА, кандидат биологических наук, зав. ПЦР-отделением клинико-диагностической лаборатории

Введение

Молекулярная клиническая диагностика -  наука, выявляющая причины и механизмы  инфекционных и соматических заболеваний на молекулярном уровне, который включает в себя определение  генов и  продуктов их деятельности – протеинов и  нуклеиновых кислот.

Как отдельное направление она начала бурно развиваться в начале 70-х годов после фундаментальных открытий в области молекулярной биологии: во-первых, создание моноклональных  антител, взаимодействующих только с определёнными эпитопами (антигенными детерминантами); во-вторых, изобретение метода гибридизации на фильтрах (Саузерн-блотт), названного так по фамилии учёного, предложившего данный способ разделения нуклеиновых кислот (НК). И, наконец, ещё одним “критическим'' научным событием стало открытие в 1985 году метода полимеразной цепной реакции (ПЦР). Эти достижения коренным образом изменили содержание всей молекулярной клинической диагностики.

В современной лабораторной диагностике ПЦР занимает особое место. Метод ПЦР поднял клиническую лабораторную диагностику на принципиально иную высоту - уровень определения нуклеиновых кислот (ДНК и РНК), что позволяет провести прямое обнаружение инфекцион­ного агента или генетической мутации в любой биотической или абиотической среде. При этом  способом  ПЦР, теоретически, может быть обнаружена всего одна искомая молекула НК среди миллионов других молекул НК. В связи с этим возникает один немаловажный вопрос, принципиальный для инфектологии, насколько тождественны понятия  - “НК”  и “возбудитель”. С точки зрения общей микробиологии это неравнозначные понятия, т.к. возбудитель это сложная биологическая система, включающая в себя НК, цитоплазму, оболочку и продукты жизнедеятельности микроорганизма. Но при этом НК не может обойтись вне этой сложной структуры, как и сам патоген не может существовать без НК. Поэтому с позиции клинической медицины определение  НК является эквивалентом обнаружения/не обнаружения  возбудителя  в объекте исследования.

Разнообразны области применения метода ПЦР: общая и частная биология, ветеринария, фармация, экология - как способ контроля за качеством объектов окружающей среды и продуктов пита­ния, криминалистика (идентификация личности и отцовства). Особенно эффективным оказалось применение метода в клинической медицине.

Цель данного методического пособия ознакомить широкий круг практикующих врачей различных специальностей (клиницистов, лаборантов, судебных и санитарных медиков и т.п.) с принципами и практическими возможностями метода ПЦР для диагностики различных инфекционных, генетических  и онкологических заболеваний.