3. Практическая часть:

3.2.Лабораторная работа №1 «Обмен липидов. Определение количества β – и пре –β – липопротеинов в сыворотке крови по Бурштейну и Самаю».

Принцип метода: В присутствии СаСI₂ и гепарина нарушается коллоидная устойчивость белков сыворотки крови, в связи с чем осаждаются почти чистые β – и пре –β – липопротеины. Считают, что гепарин способен образовывать с β – и пре –β – липопротеинами комплекс, который под действием хлористого кальция выпадает в осадок. По степени помутнения раствора судят о концентрации β – и пре –β – липопротеинов в сыворотке.

Реактивы и оборудование: Раствор хлорида кальция 0,25 или 0,025 М; гепарин- активность 1000 ед. в 1 мл; Химические стаканы, колбы, стеклянные палочки, ФЭК.

Материал исследования: Сыворотка крови.

Примечание:

1. Кровь для исследования нужно брать натощак.

2. Сыворотка устойчива в течение 2 суток при хранении ее в холодильнике.

3. В случае, если при измерении экстинции не хватает шкалы правого барабана, определение можно вести в 0,1 мл сыворотки (при последующем умножении конечного результата на 2) или на левом барабане ФЭК-М.

4. При исследовании липемических сывороток следует измерить мутность до и после добавления гепарина.

Во всех остальных случаях из показаний экстинции опытных проб сразу же вычитают 2 фотометрические единицы. Это относится и к желтушным сывороткам, которые благодаря значительному разбавлению дают такую же поправку – 0,02 («ед.).

Проведение анализа

Ход определения в моче

Отмерить, мл	Правая кювета (опыт)		Левая кювета (контроль)
0,28 % (0,025М) СаСI2	2		2
Сыворотка крови	0,2	0,2
Перемешать полоской рентгеновской пленки Измерить экстинцию, которая обычно составляет 0,01; 0,02; 0,03
Гепарин	0,04 мл Перемешать и через 4 минуты отметить экстинцию (время засекают секундомером)		-

Длина волны 720 нм, красный светофильтр, кювета 5 мм.

Расчет:

Результат выражают в ед. экстинции ( Е = Е_оп – Е_к) или в условных фотометрических единицах, полученных путем умножения значений экстинции на 100.

Нормальные величины:

Содержание β- липопротеидов в ед. экстинции составляет 0,35 – 0,55 или 35 – 55 условных ед., или 3,5 – 5,5 г/л.

4. Закрепление знаний, умений и навыков.

4.1. Выполнение лабораторной работы

4.2. Учет результатов.

5. Контроль конечного уровня знаний и умений.

5.1. Оформление лабораторной работы. Вывод. Запись КДЗ.

Установление у больного вида нарушения липопротеидного обмена должно проводится в соответствии с классификацией Д. Фридриксона и соавторов, В основу которой положены не только характер фракционного распределения, но и содержание в сыворотке больного триглицеридов и холестерина. По классификации выделяют 5 типов отклонения липидного обмена от нормы.

Тип I – гиперхиломикронемия - характеризуется наличием большого количества хиломикронов, нормальным или слегка повышенным содержанием пре – β –липопротеидов и резким увеличением уровня триглицеридов. Клинически проявляется ксантоматозом. Встречается редко, преимущественно в детском возврасте.

Тип II – гипер – β –липопротеинемия – обусловлена высоким содержанием в крови β- липопротеидов. Распадается на подтипы II a и II б. Первый характеризуется высоким содержанием уровня β- липопротеидов, нормальным содержанием пре -β- липопротеидов, а также повышением уровня холестерина при нормальном содержании триглицеридов, второй сопровождается увеличением содержания β- липопротеидов, пре - β- липопротеидов, холестерина и триглицеридов.

Тип III – гипер β- и гипер – пре- β- липопротеинемия. Она сопровождается повышением уровня холестерина и триглицеридов. Часто обнаруживается у больных атеросклерозом, сочетающимся с развитием коронарной недостаточности.

Тип IV – Гипер - пре -β- липопротеинемия. Характеризуется повышением уровня триглицеридов при нормальном или слегка увеличенном содержании холестерина. Выявляется у больных диабетом, ожирением, ишемической болезнью сердца.

Тип V – гипер – пре - β- липопротеинемия и хиломикронемией – характеризуется увеличением богатых триглицеридами пре- β- липопротеидов и хиломикронов. Содержание холестерина и триглицеридов в крови увеличивается. Обнаруживается у больных, страдающих ксантоматозом, иногда выявляется и при сахарном диабете. Ишемической болезни при этом типе не наблюдается.

Однако при отсутствии специальной аппаратуры типы гиперлипопротеинемии можно определить и косвенно, по содержанию холестерина и триглицеридов в крови, учитывая при этом, что около 40 % холестерина приходится на β- липопротеиды, а 50-60% триглицеридов – на пре- β- липопротеиды и хиломикроны соответственно.

Не потеряли своего прежнего значения для диагностики обнаруживаемые изменения в содержании α- и β- липопротеидов.

ТАК, уменьшение содержания α- липопротеидов наблюдается при острых гепатитах, циррозах печени и застойных желтухах. В последнем случае оно выражено настолько резко, что может привести к полному исчезновению фракции.

Увеличение уровня α- липопротеидов наблюдается иногда при хроническом гепатите.

Увеличение содержания β- липопротеидов – наиболее часто встречается в липограмме отклонение от нормы. Оно отмечается при атеросклерозе, при застое желчи, механической желтухе, безжелтушных и некоторых острых гепатитах, диабете, гипотиреозе, гликогеновой болезни, ксантоматозе и др.

Уменьшение β- липопротеидной фракции наблюдается при β₂- плазмоцитоме.

Увеличение липидного остатка наблюдается при алиментарной гиперлипемии и в особенности при эссенциальной гиперлипемии.

Повышение уровня липопротеидов в крови тесно связанно с гиперхолестеринемией, поскольку холестерин входит в состав β- липопротеидов.

Диспротеинемическая болезнь Бурштейна имеет значение не только при гиперлипемических состояниях, но и как функциональная печеночная проба. При сопоставлении с тимоловой этот показатель, несмотря на свою неспецифичность особенно ценен. Тимоловая проба более чувствительна к расстройствам в начальной фазе, а проба Бурштейна – в конечной фазе острого гепатита. Особое значение имеет липопротеиновая проба для оценки постгепатических состояний. В этом случае она часто является единственной флокуляционной пробой, улавливающей повреждение печени. В сочетании с тимоловой пробой она имеет большое значение для дифференциации механической желтухи от паренхиматозной. При паренхиматозной желтухе обе пробы положительны ( или либо тимоловая проба положительно, а проба на β- липопротеиды отрицательна), при механической желтухе тимоловая проба отрицательна (если нет вторичного гепатита), проба Бурштейна – резко положительна.

5.2. Фронтальная беседа

1. Что такое липопротеиды?

2. Каково строение липопротеидов?

3. Какую основную функцию выполняют липопротеиды?

4. Как они классифицируются?

5. Что такое хиломикроны? Где они образуются?

6. Каково химическое строение и состав ЛПНП?

7. Каково строение ЛПВП?

8. Чем отличаются от вышеуказанных липопротеидов пре- β- липопротеиды?

9. Почему наибольший интерес в клинике представляет метод Бурштейна и Самая?

10. В чем заключается принцип определения β- липопротеидов сыворотке крови?

11. Какова норма пробы β- липопротеидов?

12. Какие требования к забору материала для исследования?

13. Как классифицируются гиперлипопротеинемии?

14. Какое значение имеет такая классификация?

15. Назовите заболевания, при которых наиболее часто увеличивается содержание β- липопротеидов.

16. Какое значение имеет диспротеинемическая проба Бурштеина?

17. В какой связи при желтухах находится тимоловая проба и проба Бурштейна?

Приложение №6

Домашнее задание.

6.1. Изучить содержание занятия № 47

6.2. Повторить содержание практических занятий № 42, № 43, № 44, № 45, №46. (Принцип метода, ход определения, КДЗ).

6.3. Повторить следующие вопросы из темы: «Обмен липидов»:

1. Липопротеиды плазмы крови – строение, состав, характеристика.

2. Патология обмена ЛП.

3. Классификация гипо – и гиперлипопротеинемий.

4. Функции липидов.

Смотри тетрадь для практических занятий; опорный лекционный конспект; учебник В. К. Кухта «Основы биохимии» стр. 205- 206; стр. 209- 218. Подготовиться к тематической письменной работе.