1.2 Методы определение фенола и его соединений

1.2.1 Подготовка патологического материала к исследованиям

Исследуемый объект (вода, измельченное содержимое желудка и др.) в количестве не менее 500 мл или 500 г. помещают в колбу и подкисляют винной или уксусной кислотой до кислой реакции пo лакмусу и затем производят перегонку с водяным паром. Для этого колбу устанавливают наклонно (для предотвращения выбрасывания жидкости из колбы в холодильник) и закрывают пробкой с 2-мя пропущенными через нее стеклянными трубками, причем одну трубку, доходящую до дна колбы, присоединяют к парообразователю, а другую, отводную трубку – к холодильнику Либиха. Образующийся дистиллят исследуют.

1.2.2 Качественные реакции

1. Проба с формалинсерной кислотой (Реактив Марки). В пробирку помещают 2 мл формалинсерной кислоты (1 мл серной кислоты, уд. вес 1,84 +1 капля формалина) и осторожно наслаивают по стенке пробирки исследуемый дистиллят. При наличии карболовой кислоты – фенола в месте соприкосновения растворов образуется красное кольцо.

2. Проба с бромной водой. В пробирку помещают 5 мл исследуемого дистиллята и добавляют 5–7 мл бромной воды. При наличии фенола выпадает кристаллический осадок желтовато-белого цвета (трибромфенол):

С₆Н₅ОН + 3Вr = С₆Н₂Вr₃ · ОН + 3НВr.

Чувстви­тельность реакции 1:25 000. Аналогичную реакцию дают салициловая кислота, салициловый спирт, салициловый ангидрид, крезолы и анилин.

Примечание. Бромную воду – насыщенный водный раствор брома –готовят встряхиванием 3 мл брома в 100 мл дистиллиро­ванной воды. Перед употреблением жидкость встряхивают и после отстаивания сливают прозрачный раствор. Хранят в темной склянке с притертой пробкой.

При отсутствии брома для получения бромной воды можно использовать бромид калия. Для этого в круглодонную колбу ем­костью 50 мл помещают 10 г бромида калия и 5 г перманганата калия, предварительно по отдельности тщательно растертых в поро­шок. Колбу закрывают пробкой, в которую вмонтированы капель­ная воронка и изогнутая стеклянная отводная трубка. Конец отвод­ной трубки помещают в приемник, в который налито 50 мл дистил­лированной воды. Колбу опускают в кипящую воду и через капель­ную воронку добавляют серную кислоту (1:1) по 3–5 мл за один раз, всего около 20 мл. При этом образуются пары брома, последние проходят через слой воды и образуют бромную воду. Избыток брома под водой осаждается в виде черно-красных капель.

3. Проба с хлоридом окисного железа. В пробирку помещают 5 мл исследуемого дистиллята и добавляют по каплям 5%-ный раствор (свежеприготов­ленный) хлорида окисного железа (FеС1₃). При нали­чии фенола получается синее или сине-фиолетовое окра­шивание раствора (образуется фенолят железа). С добавлением спирта ректификата или при избытке воды или соляной кислоты окраска исчезает (чувствительность реакции 1 : 1000). Аналогичную реакцию дает салицило­вая кислота, но при прибавлении спирта или кислоты окраска не исчезает.

Учитывая, что в дистиллят переходят органические кислоты (молочная и др.) и салициловая кислота, даю­щие с хлоридом окисного железа реакцию, сходную с фенолом, следует при испытании на фенолы нейтрализо­вать дистиллят гидрокарбонатом натрия (NаНСО₃), последний не реагирует с фенолами, но переводит орга­нические кислоты в их соли. После нейтрализации про­изводят извлечение дистиллята с эфиром. Эфир отде­ляют, по испарении эфирной вытяжки при комнатной температуре остаток растворяют в возможно малом ко­личестве воды (3-4 мл). С полученным раствором производят реакции с бромной водой и с 5%-ным раство­ром хлорида окисного железа (свежеприготовленного).