Лабораторная работа № 2

Тема: ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ МИКРООРГАНИЗМОВ И ИХ МИКРОСКОПИРОВАНИЕ

Цель работы. Овладение техникой приготовления и микроскопирования неокрашенных и окрашенных препаратов микроорганизмов.

Содержание работы. Приготовление препарата «раздавленная капля» взвеси дрожжей; приготовление препарата «висячая капля» взвеси смешанной культуры бактерий; приготовление препарата с прижизненной (витальной) окраской микроорганизмов; приготовление фиксированного препарата микроорганизмов; овладение техникой микроскопирования препаратов.

Подготовка к проведению работы

Материальное обеспечение

• взвесь дрожжей в пробирках

• мицелиальные грибы;

• бактериологические петли;

• предметные стекла обычные, с луночкой и покровные стекла;

• красители: генцианвиолет, метиленовый голубой по Лефлеру,

фуксин Пфейфера;

• микроскопы.

Методические указания.

Во время работы учащиеся должны приготовить препараты:

• «раздавленная капля» -- из взвеси дрожжей, и микроскопируя его с объективом 10 и 40, зарисовать наблюдаемые формы клеток, среди которых могут быть клетки с почками,

• «висячая капля» -- из приготовленной смешанной культуры бактерий и микроскопируют его, применяя объектив 10 и 40; при этом обращают внимание на характер активного движения микроорганизмов.

• препараты «раздавленная капля» и «висячая капля» с прижизненной окраской дрожжей или бактерий,.

• фиксированные препараты;

• позитивно окрашенные фиксированные препараты, темноокрашенные и светлоокрашенные клетки дрожжей.

Неокрашенные препараты приготовляют в тех случаях, когда микроорганизмы рассматривают в живом состоянии, когда требуется изучить их форму, определить подвижность, размножение и т.д. Но в этих случаях практически невозможно рассмотреть детали строения клеток, особенно мелких микроорганизмов

Методика приготовления неокрашенных препаратов.

Препараты микроорганизмов готовят на чистых и обезжиренных предметных стеклах используя покровные стекла.

При исследовании микроорганизмов в живом виде готовят препараты «раздавленная капля» или «висячая капля».

1. Для приготовления препарата «раздавленная капля» на середину предметного стекла наносят каплю жидкой культуры (дрожжей) или стерильной водопроводной воды, в которую бактериологической петлей вносят немного исследуемых микробов из их колоний на плотной среде. Каплю осторожно накрывают (раздавливают) покровным стеклом. Капля должна тонким слоем заполнить пространство между предметным стеклом и покровным стеклом, но не выступать за края покровного стекла. Излишек выступившей жидкости удаляют фильтровальной бумагой.

2. Для приготовления препарата «висячая капля» взвесь микробов петлей наносят на центральное место покровного стекла и к нему прикладывают предметное стекло с «луночкой» (углублением) так, чтобы капля оказалась под центром «луночки». Перед этим вокруг луночки наносят тонким слоем вазелин. После перевертывания предметного стекла луночкой вверх капля будет «висеть» над ней. Препарат «висячая капля используют для выявления подвижности у микроорганизмов, изучения способов размножения, наблюдения за прорастанием спор.

3. Для изучения грибов с помощью двух препаровальных игл берут небольшой кусочек мицелия, который вносят в каплю воды или смеси с глицерином, осторожно расщепляя иглами.

Неокрашенные препараты бактерий и дрожжей микроскопируют, используя объектив 40, а плесневых грибов - объективы 10 и 40.