Качественные реакции на кетоновые тела в моче

Задание. Провести качественные реакции на кетоновые тела в моче.

А) Проба Легаля на ацетон и ацетоуксусную кислоту (АУК).

Принцип. Ацетон и АУК образуют с нитропруссидом натрия оранжево-красное окрашивание в щелочной среде. После подкисления ледяной уксусной кислотой образуется соединение вишневого цвета.

Ход работы. На стекло наносят 1 каплю мочи, 1 каплю 10% раствора натрия гидроксида и 1 каплю свежеприготовленного 10% раствора нитропруссида натрия, появляется оранжево-красное окрашивание. Прибавляют 3 капли ледяной уксусной кислоты, появляется вишнево-красное окрашивание.

Б) Реакция Герхарда на АУК.

Принцип. Метод базируется на взаимодействии Fe³⁺ с енольной формой АУК с образованием комплекса красно-фиолетового цвета.

Ход работы. К 5 каплям мочи прибавляют каплями 5% раствор феррум (III) хлорида; при этом выпадает осадок фосфатов в форме феррум (III) фосфата. При наличии АУК от дальнейшего добавления феррум (III) хлорида появляется вишнево-красное окрашивание. При стоянии окраска бледнеет вследствие спонтанного декарбоксилирования АУК. Реакция неспецифичная. Креатин мочи с нитропруссидом натрия дает аналогичное окрашивание, но в этом случае при добавлении концентрированной уксусной кислоты жидкость не окрашивается в вишневый цвет.

В. Экспресс-тест на ацетон и АУК.

Принцип. Полуколичественное определение кетоновых веществ в моче и сыворотке крови проводят с помощью диагностических полосок «Кетофан». Кетофан содержит щелочной буфер в смеси с нитропрусси-дом натрия, что дает с ацетоном и АУК фиолетовое окрашивание, интенсивность которого прямопропорциональна концентрации кетоновых тел в исследуемой жидкости.

Ход работы. Полоску погружают на 1-2 с в исследуемую жидкость и через 1 мин сравнивают окрашивание зоны индикации с цветной шкалой сравнения, которая напечатана на этикетке. Отдельные оттенки шкалы сравнения от едва фиолетового до темно-фиолетового соответствуют приблизительно от 1,2 до 1,5 г/л и выше АУК.

Клинико-диагностическое значение. Содержание кетоновых тел в крови здорового человека составляет 0,85-1,70 ммоль/л. В нормальной моче их количество незначительное (не больше 0,01 г/сут) и не выявляются качественными реакциями; эти реакции являются положительными лишь при выведении большого количества кетоновых тел при сахарном диабете, голодании, исключении углеводов из пищи. Кетонурия может наблюдаться при заболеваниях, связанных с усиленной затратой углеводов (тиреотоксикоз), кровоизлияниях, черепно-мозговых травмах, инфекционных заболеваниях (скарлатина, грипп, туберкулёз, менингит). В раннем детском возрасте продолжительные заболевания пищеварительного тракта (дизентерия, токсикозы) могут сопровождаться кетонемией и кетонурией в результате голодания и истощения.

Литература

1. Губський Ю.І. Біологічна хімія. – Київ-Тернопіль: Укрмедкнига, 2000. – С. 194-209.

2. Губський Ю.І. Біологічна хімія. Підручник. – Київ-Вінниця: Нова книга, 2007. – С. 241-259.

3. Гонський Я.І., Максимчук Т.П., Калинський М.І. Біохімія людини: Підручник. – Тернопіль: Укрмедкнига, 2002. – С. 366-377.

4. Вороніна Л.М. та ін. Біологічна хімія. – Харків: Основа, 2000. – С. 306-313.

5. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: Медицина, 1998. – С. 373-389.

6. Биохимия: Учебник / Под ред. Е.С. Северина. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003. – С. 399-417.

7. Николаев А.Я. Биологическая химия. – М.: ООО Медицинское информационное агентство, 1998. – С. 271-279.

8. Практикум з біологічної хімії / Бойків Д.П., Іванків О.Л., Кобилянська Л.І. /За ред.О.Я. Склярова. – К.: Здоров’я, 2002. – С. 119-145.