Ход работы.

1

F1

. Кнопкой «MODE» выбрать режим работы «F1». При этом индикатор будет иметь вид: .

2. В кювету с магнитным якорем внести 0,2 мл исследуемой плазмы, предварительно разведённой буфером (или физраствором) в соотношении: 1 объёмная часть плазмы и 9 объёмных частей буфера (или физраствора).

3. Кювету поместить в кюветное отделение.

4. Нажать кнопку «WARM». С этого момента начат обратный отсчёт 120 секунд – времени инкубации плазмы в автоматическом режиме при работающей мешалке. На индикаторе отражается время оставшееся до внесения последнего реагента – высокоактивного раствора тромбина, индуцирующего образование тромбина фибрина.

5. После окончания времени инкубации, о чём известит звуковой сигнал и символ «Add» на индикаторе, набрать дозатором 0,1 мл предварительно прогретого до 37°C рабочего раствора тромбина и внести реагент в кювету. Коагулометр автоматически начнёт регистрацию времени образования первых нитей фибрина.

6

20,5

. После окончания исследования результат (в секундах) отображается на индикаторе: . Результат исследования распечатать на принтере нажатием кнопки «PRINT».

7. После нажатия кнопки коагулометр возвращается в исходное состояние (при этом индикатор очищается). Удалите кювету из кюветного отделения. Коагулометр готов для выполнения следующего исследования.

8. Каждый образец плазмы исследовать дважды. Если результаты параллельного исследования отличаются между собой на 5% и более, необходимо повторное исследование данного образца плазмы.

Причины ошибок:

♦ отсутствие стабильной активности прогретого раствора тромбина при длительной инкубации;

♦ несоответствие объёмного соотношения используемых реагентов условиям инструкции;

♦ неправильно выбранная степень разведения исследуемой плазмы;

♦ нарушение объёмных характеристик используемых реагентов и плазмы, а также техники пипетирования.

3.2. Лабораторная работа № 1: «Определение концентрации фибриногена в плазме крови по методу Рутберг».

ПРИНЦИП: Образовавшийся после свёртывания плазмы фибрин быстро высушивается, и по его массе определяется концентрация фибриногена в плазме. Количество образовавшегося фибрина эквивалентно содержанию фибриногена в плазме.

Оборудование и реагенты: 1% суспензия тромбопластина, 5% раствор хлорида кальция, фильтры, торсионные весы, пинцет, стеклянная палочка.

Материал для исследования: плазма крови.

Ход определения.

В центрифужную пробирку внести 1,0 мл плазмы крови, 0,1 мл 5% раствора хлорида кальция и 0,1 мл 1% раствора тромбопластина. Перемешать и оставить на 30 минут при комнатной температуре. Извлечь стеклянной палочкой сгусток фибрина, отжать и высушить на беззольном фильтре. Взвесить на торсионных весах с точность до 1 мг. Норма массы сгустка – 9-15 мг.

ПРИМЕЧАНИЯ:

1. Можно брать 0,5 мл плазмы, а результат умножать на 2.

2. Фильтр – обязательно беззольный; сгусток взвешивать сразу.

Расчёт. Для определения концентрации фибриногена в г/л массу сгустка воздушно-сухого фибрина умножают на экспериментально установленный коэффициент 0,222.

Референтные пределы содержания фибриногена – 2-4 г/л.