М11-Культуральные_свойства_бактерий._Выделение_чистой_культуры

ГБОУ ВПО «Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии

Методические указания №11 к практическим занятиям для студентов

ООП специальности 060101.65 Лечебное дело Дисциплина С2.Б.10 Микробиология, вирусология

1.Тема: Культуральные свойства бактерий. Выделение чистой культуры бактерий.

2.Цели занятия: Изучить характер роста бактерий в жидких и на плотных питательных средах. Освоить технику пересева для выделения чистой культуры бактерий.

3.Задачи занятия:

3.1.Изучить характер роста бактерий в жидких и на плотных питательных средах.

3.2.Ознакомиться с основными характеристиками колоний бактерий.

3.3.Освоить технику пересева для выделения чистой культуры бактерий.

2

4.Продолжительность занятия в академических часах: 3 часа.

5.Контрольные вопросы по теме:

5.1.Характер роста бактерий на плотных питательных средах.

5.2.Характер роста бактерий в жидких питательных средах.

5.3.Методы выделения чистых культур бактерий.

6. Задания и методические указания к их выполнению.

На занятии студенту необходимо выполнить:

6.1.Ответить на вопросы преподавателя.

6.2.Принять участие в обсуждении изучаемых вопросов.

6.3.Выполнить самостоятельную работу.

Теоретическая справка.

Рост микробов на плотной питательной среде характеризуется образованием колоний. Колонии – видимые невооруженным глазом скопления бактериальных особей на поверхности или в толще плотной питательной среды. Для характеристики колоний используют следующие признаки:

1. По размеру выделяют следующие колонии:

-точечные - диаметр менее 1 мм;

-мелкие – диаметр 1-2 мм;

-средние – диаметр 2-4 мм;

-крупные – диаметр 4-6 мм и более.

2. Форма колонии:

-правильная (круглая);

-неправильная (амебовидная);

-ризоидная (корневидная, напоминающая переплетающиеся корни деревьев). 3. Контуры края колонии (определяют при рассмотрении колонии под лупой

или микроскопом с малым увеличением):

-ровные края в виде четко выраженной линии;

-неровные края (фестончатый, волнистый, эрозированный или зазубренный, бахромчатый).

3

4.Рельеф колонии характеризуется приподнятостью ее над поверхностью питательной среды и формой на вертикальном разрезе. Определяется невооруженным глазом или при помощи лупы при рассматривании сверху и сбоку:

- каплеобразные и куполообразные колонии правильной круглой формы; - плоско-выпуклые колонии; - конусообразные колонии;

- колонии с приподнятой серединой; - колонии с вдавленным центром; - плоские колонии.

5.Поверхность колонии изучают при помощи лупы или под микроскопом при малом увеличении:

- матовая или блестящая с глянцем; - сухая или влажная; - гладкая или шероховатая.

Гладкие колонии обозначают буквой S (англ. smooth – гладкий), шероховатые

-буквой R (англ. rough – шероховатый).

6.Цвет колонии. Определяется пигментом, который продуцирует культура микробов. Преобладающее большинство патогенных бактерий пигмента не образует (колонии бесцветны или молочно-мутного цвета). Пигментообразующие виды дают колонии кремовые, желтые, золотисто-оранжевые, синие, красные, сиреневые, черные и др.

7.Структура колоний. Определяется в проходящем свете при слабом увеличении микроскопа, суженной диафрагме или при несколько опущенном конденсоре:

- гиалиновые колонии; - зернистые колонии;

- нитевидные или волокнистые колонии.

8.Консистенция колоний. Исследуют прикосновением или взятием из нее части материала бактериологической петлей:

- пастообразные, вязкие или слизистые; - волокнистые или кожистые; - хрупкие сухие.

Характер роста бактерий в жидких питательных средах:

1.Рост бактерий с равномерным помутнением среды.

2.Придонный рост бактерий (образование осадка на дне).

3.Пристеночный рост бактерий (образование рыхлых хлопьев,

прикрепленных к внутренней поверхности стенок сосуда).

4.Поверхностный рост бактерий (образование пленки на поверхности жидкой питательной среды).

Рост в полужидкой питательной среде характеризуется помутнением всей толщи среды или образованием воронки цилиндрической или конической формы.

Выделение чистой культуры бактерий.

Чистая культура – культура микроорганизмов одного вида (потомство одной клетки). Методы выделения чистой культуры:

1.Метод Дригальского – последовательный пересев культуры шпателем в 3 чашки Петри с агаром.

4

2.Метод параллельных штрихов – посев культуры штрихами по поверхности агара.

3.Метод Голда – метод секторных посевов. При этом чашку с агаром делят на 3 сектора. На первый сектор засевают культуру петлей частыми штрихами, после чего петлю стерилизуют (фламбируют). Затем стерильной петлей уже более редкими параллельными штрихами переносят микроорганизмы из первого сектора во второй, после чего вновь фламбируют петлю. Аналогично стерильной петлей переносят микроорганизмы из второго сектора в третий.

4.Метод Коха (метод рассева в глубине среды). Культуру последовательно разводят в расплавленном агаре в пробирках. Затем содержимое пробирок переносят

вчашки Петри и инкубируют в термостате. Изолированные колонии вырастают в толще агара. В настоящее время этот метод используется редко.

После обсуждения теоретических вопросов преподаватель объясняет правила выполнения самостоятельной работы

Самостоятельная работа:

1.Описание бактериальных колоний, выросших на демонстрационных чашках Петри.

2.Описание характера роста бактерий в жидких питательных средах.

3.Пересев бактерий из изолированных колоний штрихом на плотные питательные среды с целью выделения чистой культуры.

7.Оценивание знаний, умений, навыков по теме занятия:

Ответы на вопросы и активность на занятии оцениваются по 5-балльной системе.

8. Литература для подготовки:

8.1.Основная:

1.Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: учебник для студентов медицинских вузов. Под ред. А.А. Воробьева. Учебники и учеб. пособия для высшей школы. Издательство: Медицинское информационное агентство, 2012. – 702 с.

2.Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. В 2-х т. Том 1 : учеб. по дисциплине «Микробиология, вирусология и иммунология» для студентов учреждений высш. проф. образования, обучающихся по специальностям 060101.65 «Лечеб. дело», 060103.65 «Педиатрия», 060104.65 «Медико-профилакт. дело» / под ред. В.В. Зверева, М.Н. Бойченко. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. – 448 с.: ил.

3.Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. В 2-х т. Том 2 : учеб. по дисциплине «Микробиология, вирусология и иммунология» для студентов учреждений высш. проф. образования, обучающихся по специальностям 060101.65 «Лечеб. дело», 060103.65 «Педиатрия», 060104.65 «Медико-профилакт. дело» / под ред. В.В. Зверева, М.Н. Бойченко. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. – 480 с.: ил.

8.2.Дополнительная:

1.Коротяев А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: Учебник для студентов мед. вузов / А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. - 5-е изд., испр. и

доп. – СПб.: СпецЛит, 2012. – 759 с.: ил.

5

2.Медицинская микробиология: учебник. 4-е изд. Поздеев О.К. / Под ред. В.И. Покровского. – 2010. – 768 с.

3.Руководство по медицинской микробиологии. Общая и санитарная микробиология. Книга 1 / Колл. авторов // Под редакцией Лабинской А.С., Волиной Е.Г. – М.: Издательство БИНОМ, 2008. – 1080 с.: ил.

Методические указания переработаны и дополнены профессором Литусовым Н.В., аспирантом кафедры Зорниковым Д.Л.

Обсуждены на заседании кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии.