Добавил:

Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.

Вуз:

Тюменский государственный медицинский университет

Предмет:

[НЕСОРТИРОВАННОЕ]

Файл:

МБ методичка часть 2.docx

Скачиваний:

Добавлен:

10.03.2016

Размер:

2.79 Mб

Скачать

☆

<<< < Предыдущая 1 2 3 45 / 65 6 > Следующая >>>

Методы изучения антибиотикочувствительности

Метод бумажных дисков (диско-дуффузионный)

Методика.Бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар в чашку Петри.

На засеянную поверхность пинцетом помещают на одинаковом расстоянии друг от друга бумажные диски, содержащие определенные дозы разных антибиотиков. Посев инкубируют при 37°С до следующего дня. По диаметру зон задержки роста бактерий определяют ее чувствительность к антибиотикам.

Для получения достоверных результатов необходимо применять стандартные диски и питательные среды, для контроля которых используются эталонные штаммы соответствующих микроорганизмов.

Метод дисков не дает надежных данных при определении чувствительности микроорганизмов к плохо диффундирующим в агар полипептидным антибиотикам (например, полимиксин, ристомицин). Если эти антибиотики предполагается использовать для лечения, рекомендуется определять чувствительность методом серийных разведений.

Оценка результатов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методами дисков и серийных разведений

Антибиотик	Метод дисков: диаметры зон задержки роста на среде АГВ (агар Гурьева-Васильева)				Метод серийных разведений: минимальная ингибирующая концентрация мкг/мл
Антибиотик	Устойчивые	Умеренно устойчивые	Чувстви- тельные	Устойчивые		Чувстви- тельные
Бензилпенициллин	≤ 20	21-28	≥ 29	-		≤ 0.1
Ампициллин	≤ 20	21-28	≥ 29	-		≤ 0.2
Карбенициллин	≤ 14	15-18	≥ 19	≥ 32		≤ 16
Метициллин	≤ 13	14-18	≥ 19	-		≤ 3
Оксациллин	≤ 15	16-19	≥ 20	-		≤ 3
Цефалексин	-	-	-	≥ 32		≤ 10
Цефалотин	≤ 14	15-18	≥ 19	≥ 32		≤ 10
Стрептомицин	≤ 16	17-19	≥ 20	≥ 15		≤ 6
Неомицин	≤ 12	13-16	≥ 17	-		≤ 10
Канамицин	≤ 14	15-18	≥ 19	≥ 25		≤ 6
Мономицин	≤ 13	14-17	≥ 18	-		≤ 10
Гентамицин	≤15		≥ 16	≥ 6		≤ 4
Тетрациклин	≤ 16	17-20	≥ 22	≥ 12		≤ 2
Эритромицин	≤ 17	18-21	≥ 22	≥ 8		≤ 2
Линкомицин	≤ 19	20-23	≥ 24	≥ 8		≤ 2
Левомицетин	≤ 15	16-18	≥ 19	≥ 16		≤ 8
Рифампицин	≤ 12	13-15	≥ 16	≥ 8		≤ 2
Полимиксин	≤ 11	12-14	≥ 15	≥ 50 Ед/мл		-
Ристомицин	≤ 9	10-11	≥ 12	-		≤ 5

Метод серийных разведений

б) определить минимально-подавляющую концентрацию антибиотиков по отношению к культуре золотистого стафилококка (St. aureus). Выбрать антибиотик для лечения.

Гентамицин к.к. к. а/б к.б.

Разведения антибиотика

25 12,5 6,25 3,125 1,56 0,78 0,39

Результат:_________________________________________________________________

Ампициллин к.к. к. а/б к.б.

Разведения антибиотика

25 12,5 6,25 3,125 1,56 0,78 0,39

Результат:_________________________________________________________________

Вывод: ___________________________________________________________________

__________________________________________________________________________

Теоретическая справка

Метод серийных разведений

Данным методом определяют минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) антибиотика рост исследуемой культуры бактерий.

Методика. Готовят основнойраствор, содержащий определенную концентрацию антибиотика (мкг/мл илиЕД/мл) в специальном растворителе или буферном растворе. Из него готовят последующие разведения в бульоне (в объеме 1 мл), после чего к каждомуразведению добавляют 0,1 мл исследуемой бактериальной суспензии, содержащей 10⁶-10⁷ бактериальных клеток в 1 мл. В последнюю пробирку вносят 1 мл бульонаи 0,1 мл суспензии бактерий (контроль культуры). Посевы инкубируют при 37°С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта по помутнениюпитательной среды, сравнивая с контролем культуры. Последняя пробирка спрозрачной питательной средой указывает на задержку роста исследуемой культуры бактерий, под влиянием содержащейся в ней минимальной ингибирующей концентрации антибиотика.

Номер пробирки	Разведение антибиотика	концентрация антибиотика, мкг/мл	Исследуемая культура, мл	рост бактерий (помутнение среды)
1	1:100	100	0,1	-
2	1:200	50	0,1	-
3	1:400	25	0,1	-
4	1:800	12,5	0,1	-
5	1:1600	6,25	0,1	+
6	1:3200	3,12	0,1	+
7	1 мл бульона без антибиотика		0,1		+ (контроль)

Оценку результатов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам проводят по таблице, которая содержит значения МИК антибиотиков для устойчивых и чувствительных штаммов.

Кчувствительным относятся штаммы микроорганизмов, рост которых подавляется при концентрациях препарата, обнаруживаемых в сыворотке крови больного при использовании обычных доз антибиотиков. К умеренно устойчивым относятся штаммы, для подавления роста которых требуются концентрации,создающиеся в сыворотке крови при введении максимальных доз препарата Устойчивыми являются микроорганизмы, рост которых не подавляется препаратом в концентрациях, создаваемых в организме при использовании максимально допустимых доз.

в) классифицировать антибиотики.

Название антибиотика	Классифика-ционное положение	Действующее начало	Получение	Применение	Способ применения

Работа № 4. Методы изучения бактериальных вирусов (фагов)

Цель работы:изучить методы применения в практической медицине диагностических и лечебно-профилактических бактериофагов.

Самостоятельная работа:

а)учесть результат опыта по определению родовой принадлежности исследуемой культуры, выделенной от больного с кишечной инфекцией с помощью диагностических бактериофагов.

Метод Отто («стекающей капли»)

Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

б)определить источник инфекции у пациента с гнойным осложнением раныв хирургическом отделении.

Фаготипирование бактерий

П О С Е В Ы

стафилококка от стафилококка отстафилококкаот

пациента мед.работника 1 мед. работника 2

Теоретическая справка

Диагностические и лечебно-профилактические бактериофаги

Применяемые на практике препараты бактериофагов представляют собой фильтрат бульонной культуры соответствующих микробов, лизированных фагом, содержащий живые частицы фага, а также растворённые антигены бактерий, освободившиеся из бактериальных клеток при их лизисе. Полученный препарат - жидкий бактериофаг должен иметь вид совершенно прозрачной жидкости жёлтого цвета большей или меньшей интенсивности.

Для применения с лечебно-профилактическими целями фаги могут выпускаться в форме таблеток с кислотоустойчивой оболочкой. Таблетированный сухой фаг более стабилен при хранении и удобен при применении. Одна таблетка сухого бактериофага соответствует 20-25 мл жидкого препарата. Срок годности сухого и жидкого препарата - 1 год. Жидкий бактериофаг следует хранить при температуре + 2 +10 С, сухой- не выше +1°С, но его можно хранить в холодильнике и при отрицательной температуре.

Принятый внутрь бактериофаг сохраняется в организме в течение 5-7 дней. Как правило, прием бактериофага не сопровождается какими-либо реакциями или осложнениями. Противопоказаний к приёму нет. Применяются в виде орошений, полосканий, примочек, тампонов, инъекций, а также вводят в полости - брюшную, плевральную, суставную и в мочевой пузырь, в зависимости от места локализации возбудителя.

Диагностические фаги выпускаются как в жидкой, так и сухой форме в ампулах.Перед началом работы сухой бактериофаг разводится. Если на ампулах указан титр,тр, ДРТ (доза рабочего титра) применяют в реакции фаголизабельности (метод Отто) для идентификации бактерий, если указан тип фага, то для фаготипирования– определения источника инфекции.

Действие бактериофага на микробную культуру в жидкой среде и на плотной среде

Метод Отто (стекающая капля)

Делают густой посев газоном исследуемой культуры. Через 5-10 мин после посева на подсушенную поверхность питательной среды наносят жидкий диагностический фаг. Чашку слегка наклоняют, чтобы капля фага растеклась по поверхности агара. Чашку помещают в термостат на 18-24 часа. Учёт результата производят по полному отсутствию роста культуры в месте нанесения капли фага.

Опыт на жидкой питательной среде

Делают посев исследуемой культуры в две пробирки с жидкой средой. В одну пробирку («О») добавляют петлёй диагностический бактериофаг. Через 18-20 часов в пробирке, куда бактериофаг не добавлялся («К»), наблюдается сильное помутнение бульона — произошел рост посеянной культуры. Бульон в пробирке, куда был добавлен бактериофаг, остался прозрачным вследствие лизиса культуры под его влиянием.

Фаготипирование бактерий

По спектру действия различают следующие бактериофаги: поливалентные, лизирующие родственные виды бактерий; моновалентные, лизирующие бактерии определенного вида; типовые, лизирующие отдельные типы (варианты) бактерий.

Например, один штамм патогенного стафилококка может лизироваться несколькими типами фагов, поэтому все типовые фаги (24) и штаммы патогенных стафилококков объединены в 4 группы.

Метод фаготипирования имеет большое значение для эпидемиологического исследования, так как позволяет выявить источник и пути распространения возбудителей заболеваний. С этой целью определяют фаговар выделенной из патологического материала чистой культуры на плотных питательных средах с помощью типовых диагностических фагов.

Фаговар культуры микроорганизмов определяют по тому типовому фагу, который вызвал ее лизис.Выделение бактерий одного фаговара от разных обследуемых указывает на источник заражения.

Схема описания бактериофагов:

Название препарата…………………

Классификационное положение: бактериофаг

Действующее начало: бактериофаг

Получение: фильтрат фаголизата бульонной культуры соответствующего микроорганизма

Применение:

лечебно-профилактические - для лечения и профилактики соответствующих инфекций;

диагностические - для идентификации микроорганизмов; определения источника инфекции

Способ применения:в зависимости от назначения фага

в) классифицировать бактериофаги.

Название бактериофага	Классифика-ционное положение	Действующее начало	Получение	Применение	Способ применения

Подпись преподавателя_________________________________________________________

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА ВО ВНЕУРОЧНОЕ ВРЕМЯ

Классифицируйте препараты (см. теоретическую справку):

Лактобактерин

Классификационное положение___________________

Действующее начало_____________________________

Получение_____________________________________