Микрофлора почвы

Санитарно-микробиологическое состояние почвы оценивается на основании наличия бактерий - показателей фекального загрязнения. Почвы, с преобладанием санитарно-показательных бакте­рий, расцениваются как санитарно-неблагополучные, загрязненными фекалиями человека или животных. Присутствие в почве Е. coli и энтерококов (разновидность Streptococcusfaecalis) указы­вает на свежее фекальное загрязнение. Наличие бактерий родов Citrobacter и Enterobacter - на несвежее, aClostridiumperfringens - на давнее фекальное загрязнение. Более точная оценка проводится с помощью определения коли-индекса - количество бактерий группы кишечной палочки (БГКП), обнаруженных в 1г почвы, перфрингенс-титра - масса почвы (в граммах), в которой обнаружена 1 особь Clostridiumperfringens, общей численно­сти сапрофитных, термофильных и нитрифицирующих бактерий (ОМЧ) в 1г почвы.

Нормативы: чистая почва: коли-титр - 1 и выше; перфрингенс-титр - 0,01 и выше; ОМЧ- 100-1000.

Загрязненная почва: коли-титр - 0,9 - 0,01; перфрингенс-титр - 0,009-0,0001; ОМЧ-1000-100000.

Сильно загрязненная почва: коли-титр - 0,009 и ниже; перфрингенс-титр -0,00009 и ниже; ОМЧ - 10000-4000000.

Определение ОМЧ почвы. Методика. Почву берут на глубине 10-15 см стерильным но­жом (из разных мест не менее 10 проб) в стерильную банку. Из проб готовят навеску 30 г, которую вносят в колбу с водой (270 мл) и тщательно встряхивают. Готовят разведения 10^-1, 10^-3, 10^-6. Из 2-х последних разведений 0,1 мл смешивают с 40 мл 0,7% расплавленного и остуженного до 45°С МПА, после чего выливают двойным слоем в чашки с 2% агаром. Инкубируют в термостате. Подсчитывают количество выросших колоний.

Определение коли-титра, перфрингенс-титра почвы.

Методика. Различные разведения почвен­ной суспензии засевают по 1 мл в пробирки со средой Кесслера (1л дистиллиро­ванной воды, 10 г пептона, 50 мл бычьей желчи, 10 г лактозы; рН 7,4-7,6; 4 мл 1% водного раствора генцианового фиолетового). Разливают в пробирки с поплавка­ми. Инкубируют при 43°С 48 часов. При получении в средах газообразования и помутнения производят высев петлей на среду Эндо. Отбирают типичные для кишечной палочки колонии, делают мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют. При выявлении в мазках Гр^- палочек ставят пробу на оксидазу. Если проба отрицательная (изменение окраски на синий цвет) проверяют ферментативные свойства выделенной культуры посевом на полужидкую среду с глюкозой. Появле­ние в среде кислоты и газа подтверждает наличие Е. coli. Определяют коли-титр по наименьшему объему, в котором обнаруживают БГКП.

Для определения перфрингенс-титра различные разведения почвенной сус­пензии засевают в пробирки со стерильной железосульфитной средой Вильсон-Блера. Инкубация при 43°С 48 часов. Учитывают результаты по образованию черных колоний Cl. perfringens в агаровом столбике среды. Мазки окрашивают по Граму, микроскопируют (Гр+ крупные палочки со спорами овальной формы, центрального или субтерминального расположения), вычисляют перфрингенс-титр (наибольшее разведение посевного материала, посев которого приводит к почерне­нию и разрыву среды впервые 12 часов роста при 43⁰ С).

Работа № 4. Санитарно-бактериологическая оценка чистоты рук персонала

Цель: изучить методы санитарно-бактериологического контроля в ЛПУ.

Самостоятельная работа:учесть результат готового посева смывов с рук на среде Кесслера.

Посев смыва с рук персонала на среде Кесслера

«К» «О»

Результат:

Вывод:

Теоретическая справка

Микрофлора рук и предметов окружающей среды

Санитарный надзор за состоянием объектов общественного питания и пище­блоков в лечебных и детских учреждениях осуществляется взятием смывов с рук обслуживающего персонала, посуды, поверхности столов, досок и т. д.

При взятии смыва с рук пользуются стерильными ватными тампонами, которые перед употреблением смачивают в среде Кесслера, содержащейся в пробирке, в которой находится тампон. Смывы делают с обеих рук, тщательно протирая ладони, меж­пальцевые промежутки и подногтевые пространства сначала левой руки, а затем правой.

С исследуемых предметов стерильным ватным тампоном, увлажненным изотоническим раствором NaCl, делают смыв. Тампон помещают в среду Кесслера или втирают в поверхность среды Эндо. Для исследования гладких поверхностей и тканей смывы с делают с помощью трафаретов из прово­локи, имеющих площадь 25 см². Посевы выдерживают в термостате при темпера­туре 43° С в течение суток. При наличии брожения в среде Кесслера делают высев на среду Эндо. Колонии, подозрительные на кишечную палочку, подвергают дальнейшей идентификации.

Подпись преподавателя_________________________________________________________

Самостоятельная работа во внеурочное время

Как правильно провести санитарно-бактериологические исследования объектов окружающей среды_____________________________________________________________

_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Перечислите санитарно-показательные микроорганизмы

А) воздуха____________________________________________________________________

Б) воды______________________________________________________________________

В) почвы _____________________________________________________________________

Требования, предъявляемые к СПМ______________________________________________

___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Методы качественного и количественного изучения микро­флоры молока______________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Методы качественного и количественного изучения микро­флоры мяса, колбасных изделий и мясных продуктов ____________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Методы качественного и количественного изучения микро­флоры консервированных продуктов ___________________________________________________________________

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Теоретическая справка

Микрофлора пищевых продуктов

Санитарно-микробиологическая оценка пищевых продуктов включает опре­деление общего микробного числа и санитарно-показательных микроорганизмов, а также патогенных возбудителей.

Нормативы:

молоко и напитки - ОМЧ не более 75000 в 1 мл, коли-титр - не менее 3;

мясо, колбасные изделия и мясные продукты - БГКП не должны содержаться в 1 г, сальмонеллы не должны содержаться в 25 г, протей - в 0,1 г, коагулазоположительные стафилококки - в 0,1 г, сульфитредуцирующиеклостридии - в 0,1 г;

в консервах не должен быть обнаруженботулотоксин и клостридиумботулинум.

Методика. Исследование молока. Для определения ОМЧ пастеризованное молоко разводят стерильным изото­ническим раствором NaCl 1:10, 1:100, 1:1000 и по 1 мл разливают на дно стериль­ных чашек, заливают расплавленным, остуженным агаром. Инкубируют в термо­стате при 37°С в течение 24 часов. Подсчитывают количество выросших колоний.

Для определения коли-титра цельное пастеризованное молоко забирают в 6 пробирок со средой Кесслера: в 3 пробирки вносят по 1 мл, в остальные по 0,1 мл (разводят в 10 раз стерильной водой). Инкубируют при 43°С 24 часа. Из забродив­ших проб делают посевы на среду Эндо и идентифицируют БГКП. При обнаруже­нии Гр^- палочек ставят пробу на оксидазу и производят посев на среду с глюкозой и среду Козера(1л дистиллированной воды, 10 г фосфата однозамещенного калия, 0,2 г сульфата магния, 2,5-3,0 г цитрата натрия, 10 мл 0,5% спиртового раствора бромтимолового синего). При наличии кислоты и газа на среде с глюкозой и отсутствиироста на среде Козера, согласно ГОСТу 9225-68, учитывают только цитратонегативные разновидности кишечной палочки. Коли-титр вычисляют по справочной таблице.

Определение коли-титра в пастеризованном молоке, сливках, кефире и других молочных продуктах

Кишечная палочка обнаружена в объемах, мл							Коли-титр, мл
1,0	1,0	1,0	0,1	0,1	0,1
-	-	-	-	-	-	Более 3,0
+	-	-	-	-	-	3.0
+	+	-	-	-	-	Менее 3,0
+	+	+	-	-	-	Более 0,3
+	+	+	+	-	-	0,3
+	+	+	+	+	-	Менее 0,3
+	+	+	+	+	+	Менее 0,3

Исследование напитков определяют ОМЧ и коли-титр по методикам ис­следования питьевой воды. Лимонад нейтрализуют 10% раствором гидрокарбоната натрия (проверка рН лакмусовым индикатором). Коли-титр определяют методом мембранных фильтров.

Исследование мяса - определяют количество бактерий в мазках-отпечатках из кусочков 2x1,5x2,5 см. Окраска по Граму. Мясо свежее - если в поле зрения не более 10 бактериальных клеток.

Для определения ОМЧ, БГКП, сальмонелл, бактерий рода Протеус, коагула-зоположительных стафилококков и клостридии из глубинных участков стерильно берут навески мяса 20 г и добавляют 80 мл стерильного физ. раствора, гомогенизируют в электрическом смесителе. 0,1 и 0,01 г продукта засевают на МПА, инкубируют 48 часов и подсчитывают количество колоний.

Определение БГКП в 1 г продукта. 5 мл взвеси засевают на среду Кода (пита­тельный бульон, сульфанол, лактоза, бромтимоловый синий), инкубируют 18 часов. Лак⁺ БГКП меняют синий цвет среды на темно-зеленый или ярко-желтый.

Определение сальмонелл проводят посевом на среды Мюллера, Кауфмана или селенитовый бульон.

Протей выделяют по методу Шукевича, клостридии - на среде Вильсон-Блера, коагулазоположительные стафилококки на желточно-солевом агаре.

Исследование консервированных продуктов.Для выявления ботулинического токсина пробы консервов фильтруют и с фильтратом ставят реакцию нейтрализации токсина антитоксической противоботулинической сывороткой типов А,В,С,Е и F на белых мышах. В консервах не допус­кается присутствие ботулинического токсина,

Cl. botuinum, Cl. perfringens и других патогенных бактерий. Присутствие сапрофитных аэробных бацилл допустимо при герметичности и отсутствии бомбажа.

ЗАНЯТИЕ 1.2.2. Дата_________________

Влияние на микроорганизмы биологических факторов. Антибиотики. Бактериофаги

Цель занятия:

изучить характер влияния и механизмы действия биологических факторов на микроорганизмы, химиотерапевтические препараты.

Студент должен знать:

1. Биологические факторы, влияющие на микроорганизмы.

2. Химиотерапия. Понятие о химиотерапевтических препаратах и

химиотерапевтическом индексе. Принципы антимикробной терапии.

3. Классификация антибиотиков по химическому строению, происхождению,

механизму и спектру антимикробного действия, способам получения.

4. Методы изучения антибиотикочувствительности бактерий.

5. Механизмы лекарственной устойчивости возбудителей инфекционных болезней.

Пути ее преодоления.

6. Осложнения антибиотикотерапии, их предупреждение.

7. Бактериофаги (умеренные и вирулентные).Лизогения.Применение фагов

в биотехнологии, микробиологии и медицине.

8. Пробиотики (эубиотики).

Студент должен уметь:

• определять чувствительность бактерий к антибиотикам и бактериофагам;

• интерпретировать антибиотикограмму.

Студент должен иметь представление:

о возможности использования бактериофагов для выявления источников инфекции (эпидемическое маркирование - метод фаготипирования).

Работа № 1. Микробный антагонизм

Цель работы: изучить действие метаболитов кишечной палочки на водный вибрион.

Самостоятельная работа:

а) Зарегистрировать результат опыта действия бактериоцинов. Объяснить механизм микробного антагонизма между кишечной палочкой (штамм E. coli М-17) и вибрионом (водный вибрион).

б) Объяснить назначение и механизм действия пробиотиков с учетом изменений качественного и количественного состава микрофлоры, классифицировать предложенные препараты. Результаты внести в таблицу.

водный вибрион

кишечная палочка

Результат:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Название пробиотика	Классифика-ционное положение	Действующее начало	Получение	Применение	Способ применения

Вывод:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Теоретическая справка