Техника посева на жидкие и плотные питательные среды
Методы, основанные на механическом разобщении микробов
Метод Дригальского
Стерильной
пипеткой материал помещают на поверхность
МПА в чашку Петри
посев шпателем (газоном) посев петлей (штрихом)
Стерильным шпателем материал Чашку Петри с МПА делят на
тщательно распределяют по 4 сектора. Исследуемый мате-
поверхности агара. Затем, не беря риал стерильной петлей вносят
нового материала и, не обжигая в 1 сектор и делают штрихи,
шпатель, делают посев на 2 и 3 затем такие же линии проводят
чашку МПА. и на других секторах.
На последних секторах вырастают
отдельные колонии.
1 2 3 1 2
изолированные колонии 4 3
4
сектор - изолированные колонии
Снижение концентрации микробов
Метод седиментации по Коху - основан на свободном оседании микроорганизмов на питательную среду в чашку Петри из воздуха. Применяется для определения загрязненности воздуха микроорганизмами.
Метод укола - применяется для выращивания анаэробов или выявления характерного признака микроба, т.к. рост по ходу укола типичен для рада бактерий. Также применяется для длительного хранения культур.
Посев на скошенный агар– применяется для накопления биомассы, получения чистой культуры и их хранения.
Методы, основанные на биологических свойствах микроорганизмов
■ Метод Шукевича. Исследуемый материал засевают в конденсационную воду скошенного агара. При размножении подвижные формы микробов из конденсационной воды дают «ползущий» рост по скошенному агару. Отсевая верхние края культуры в конденсационную воду свежескошенного агара и повторяя это несколько раз, можно получить чистую культуру.
■ Метод прогревания позволяет отделить спорообразующие бациллы от не споровых форм. Прогревают исследуемый материал на водяной бане при 80°С 10-15 мин. Вегетативные формы погибают, а споры сохраняются и при посеве на соответствующую питательную среду прорастают.
■ Метод фильтрации основан на пропускании исследуемого материала через специальные фильтры с определенным диаметром пор и разделение содержащихся микроорганизмов по величине. Этот метод применяется для очистки вирусов от бактерий, а также при получении фагов и токсинов (в фильтрате - чистый фаг, очищенный токсин).
к работе № 5
Б) Каталазная активность. Каталаза - это фермент, катализирующий реакцию разложения перекиси водорода с образованием воды и кислорода. Каталазу содержат аэробы и факультативные анаэробы, но она отсутствует у облигатных анаэробов. Обнаружить каталазу можно по пузырькам кислорода, которые начинают выделяться сразу же после смешивания микробных клеток с 1% раствором перекиси водорода. На предметное стекло помещают каплю перекиси водорода и суспендируют в ней небольшое количество культуры микроорганизмов, выращенной на плотной среде.
к работе № 6
Бактериологический метод является основным при диагностике инфекционных заболеваний. Его сущность заключается в определении вида возбудителя инфекции, следовательно, можно поставить этиологический (окончательный) диагноз. Основной недостаток метода – длительность исследования – от 3х до 5ти суток, а в отдельных случаях и более.
Успех проведения бактериологического метода во многом зависит от предварительного этапа, включающего забор исследуемого материала и его транспортировку, оформление направления в бактериологическую лабораторию. При этом необходимо соблюдать ряд правил:
Забор исследуемого материала следует провести до начала антибактериальной терапии или через 8-10 часов после введения последней дозы антибиотика. Чтобы избежать загрязнения пробы микрофлорой окружающей среды, необходимо соблюдать строжайшую антисептику. Для этого используют стерильный материал: а) ватные тампоны для взятия материала из раны, со слизистых оболочек (глаз, зева, носа); б) проволочную петлю для взятия материала из влагалища, анального отверстия; в) шприц для взятия крови, гноя; г) стерильную посуду для непосредственного сбора в нее мочи, мокроты, испражнений.
Транспортировку полученного материала следует проводить в максимально короткие сроки (2-3 часа) в специальных биксах или пеналах.
Направление прилагают к клиническому образцу в качестве сопроводительного документа. Оно содержит основные сведения, необходимые для проведения микробиологического исследования:
- фамилия, имя, отчество, возраст пациента;
- предполагаемый диагноз заболевания;
- предшествующая антимикробная терапия;
- характер материала;
- дата и время взятия материала;
- цель исследования;
- название лечебного учреждения, номер отделения, палаты;
- подпись лечащего врача.
Бактериологический метод осуществляется в два этапа.
Выделение чистой культуры возбудителя (1-2 суток).
Идентификация чистой культуры (1-3 суток).
На первом этапе проводится посев исследуемого материала на плотную или жидкую питательную среду, оценка культуральных свойств, отбор подозрительных колоний и их отсев на скошенный агар. Этап идентификации включает обязательное изучение морфологии, биохимических свойств и антигенной структуры выделенной чистой культуры, а также проведение дополнительных исследований по определению антибиотикочувствительности, фагочувствительности, фаготипирования, изучение патогенных и персистентных свойств.