28

Практические навыки

І. Определение групп крови

Материальное обеспечение:

1. Набор стандартных сывороток или моноклональных антител Анти А,

Анти В, Анти АВ.

2. Планшет или тарелка с обозначением групп крови (основная, контрольная).

3. Палочки для перемешивания.

4. Физиологический р-р хлористого натрия 0,9%.

5. Вата гигроскопическая.

6. Иглы стерильные.

7. Спирт.

Техника проведения: Диагностические и лечебные манипуляции

Определение группы крови - маркируют тарелку с указанием места расположения стандартных сывороток разных групп. Соответственно этой маркировке глазной пипеткой наносят стандартные сыворотки каждой из групп, справа от сывороток – исследуемую кровь в соответствии 10:1. Каждую стандартную сыворотку и кровь перемешивают отдельной чистой стеклянной палочкой. Осторожно покачивают тарелку в течение 5 мин. По наличию агглютинации в тех или иных каплях стандартных сывороток судят о групповой принадлежности крови.

Проба на совместимость проводится при комнатной температуре, направлена на предупреждение осложнений, связанных с переливанием крови иной группы. На белую тарелку или предметное стекло наносят сыворотку крови реципиента и донорскую кровь в соотношении 10:1. Ожидают результат в течение 5 мин. Если агглютинация не наступила, то кровь донора и реципиента совместимы.

Тепловая проба на совместимость – позволяет предупредить осложнения, связанные с несовместимостью тепловых антител больного (Rh – антигена). На чашку Петри наносят сыворотку крови реципиента и донорскую кровь в соотношении 10:1. После перемешивания сыворотки с кровью чашку Петри помещают на водяную баню на 10 мин при температуре от +46 до +48 С. Появление агглютинации свидетельствует о недопустимости переливания данной крови.

Проба на биологическую совместимость выполняется в начале переливания крови. Эта проба состоит в том, что в три приема по 25 мл с интервалами в 3-5 мин переливают первые 75 мл крови. Во время интервала система перекрывается. Если после переливания 75 мл крови не наступают признаки несовместимости (беспокойство, затрудненное дыхание, боль в пояснице, покраснение лица, или бледность, учащение пульса, снижение давления), то кровь считается совместимой и переливание крови продолжают капельно до конца.

Определение группы крови системы АВО с помощью моноклональных антител Анти –А и Анти-В (целиклоны анти-А и анти-В).

Целиклоны анти-А и анти-В применяются для определения группы крови человека системы АВО взамен стандартных изогемагглютинирующих сывороток путем выявления антигенов А и В в эритроцитах стандартными антителами, содержащимися в целиклонах.

Моноклональные антитела анти-А и анти-В продуцируются двумя различными гибридомами, полученными в результате слияния мышиных антителообразующих в-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Названные целиконы представляют разведенную асцитическую жидкость мышей – носителей гибридомы, содержащую иммуноглобулин М против антигенов А и В. Целиклоны дают более быструю и более выраженную реакцию агглютинации, чем стандартные АВО-сыворотки. При использовании целиклонов исключается передача вируса гепатита и ВИЧ.

Определяются группы крови при температуре от 15^одо 25^оС. На фарфоровую пластину или маркированную тарелку наносят по одной большой капле целиклонов анти-А и анти-В, рядом наносят каплю исследуемой крови в 10 раз меньшего размера и смешивают отдельными палочками или уголками предметных стекол. Пластинку слегка покачивают и наблюдают за реакцией в течение 2,5 мин. Реакция обычно наступает в первые 3-5 с и проявляется образованием мелких красных агрегатов, а затем хлопьев.

Возможны следующие варианты реакции агглютинации.

1. Агглютинация отсутствует с целиклонами анти-А и анти-В – кровь не содержит агглютиногенов А и В – исследуемая кровь группы 1(0).

2. Агглютинация наблюдается с целиклонами анти-А, эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген А – исследуемая кровь группы ІІ(А).

3. Агглютинация наблюдается с целиклоном анти-В. Эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген В – исследуемая кровь группы ІІ(В).

4. Агглютинация наблюдается с целиклонами анти-А и анти-В. Эритроциты содержат агглютиногены А.и В – исследуемая кровь группы IV(АВ) (табл. 1).

Таблица 1. Реакция агглютинации исследуемых эритроцитов с целиклонами анти-А и анти-В.

Реакция агглютинации		Группа исследуемой крови
целиклон анти-А	целиклон анти-В
1- 2+ 3- 4+	- - + +	I(0) II (A) III (B) IV (AB)

При наличии реакции агглютинации с целиклонами анти-А и анти-В (группа кровиIV(АВ)) для исключения неспецифической агглютинации производят дополнительное контрольное исследование с изотоническим раствором хлорида натрия. Большую каплю (0,1 мл) изотонического раствора смешивают с маленькой (0,01 мл) каплей исследуемой крови. Отсутствие агглютинации подтверждает принадлежность исследуемой крови кIV(АВ) группе. При наличии агглютинации проводят определение группы крови с использованием отмытых стандартных эритроцитов.

Целиклоны анти-А и анти-В выпускаются в жидком виде в ампулах или флаконах, жидкость окрашена в красный (анти-А) и синий (анти-В) цвет. Хранят их в холодильнике при температуре 2-8 С. Срок хранения 2 года.